Caspase-3、ADAM10在肺癌中表达与生物学意义

2。世纪50年代开始，吸烟等种种因素导致了我国肺癌发病率和病死率的升高，肺癌的防治成为一项重大问题川，但目前肿瘤的生物学行为无明确指标。既往研究显示，细胞外信号通路、线粒体信号通路、内质网信号通路和高尔基体信号通路的共同终末都是Caspase酶。整合素一金属蛋白酶(ADAMs)是近年来发现的一类与细胞膜结合的糖蛋白家族，能参与细胞信号传导等过程，也可能参与了人类肿瘤细胞转移的病理过程。我们为此采用免疫组化方法研究Caspase-3,ADAM10表达与肺癌临床病理参数的相关性，为判断肺癌的特点与预后提供依据，报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料收集我院病理科2004年2月一2011年7月间手术切除的肺癌石蜡包埋标本80例，男60例，女20例。人选标准:患者术前均未行任何治疗，符合世界卫生组织(WHO)中肺癌的诊断标准，同意人选。肺癌类型:腺癌35例，鳞癌35例，小细胞癌10例;年龄33-78岁，平均(60.2士9.2)岁;按组织学分级:高分化20例，中分化35例，低分化25例;淋巴结转移J例，无淋巴结转移30例。同期取正常肺组织20例，包括13例尸检的正常肺组织，5例手术切除炎性假瘤病例的正常肺组织和2例肺大泡的正常肺组织。

1.2方法

1.2.1主要试剂本文使用的兔抗人多克隆抗体ADAM10和C aspase-3购自USBi。公司，EDTA抗原修复液购自福州迈新公司，DAB显色剂购自DAKO公司，观察所用显微镜为同本Olympus产品，型号为BX-50。丙酮和无水乙醇为天津市化学试剂公司产品。

1.2.2染色方法所有标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片常规脱蜡至水;3%过氧化氢微波炉低档孵育2 min,蒸馏水浸泡;将切片放人盛有EDTA抗原修复液的高压锅中，喷气后1^-2 min，高压锅离开热源，冷却至室温，取出切片;蒸馏水浸泡，PBS液(pH 7.4)浸泡;滴加1，75的一抗4℃冰箱过夜，PBS液浸;滴加生物素标记的二抗工作液，室温下湿盒中孵育10 min,PBS液浸泡;DAB显色剂显色，显微镜下观察，适时终止反应。

1.3判定标准着色细胞比例1/3以下为1分，1/3-}-2/3为2分，2/3以上为3分。着色程度，无着色。分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。然后根据两者积分的乘积来判断阳性等级),l一2分为(}),3}-4分为(-}}),4分以上为(+++);其中，(+)为弱阳性，(++一++十)为强阳性。

1.4统计学方法采用SPSS 18.0统计软件包进行数据分析。ADAM10和Caspase-3在各组中表达阳性率的比较采用丫检验，PGO.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 ADAM10和Caspase-3的表达情况ADAM10和Caspase-3阳性表达呈棕黄色与颗粒状，主要定位于细胞浆中。ADAM10和Caspase-3在正常肺组织和肺癌组织的表达阳性率分别为100 00、5000，见表to 

2.2 ADAM10和Caspase-3的表达与肺癌临床病理参数的关系调查显示，ADAM10和Caspase-3在腺癌中的表达水平较鳞癌和小细胞癌低，同时在转移的肺癌表达水平也比较低。

3讨价

近年来，从我国城乡前10位恶性肿瘤构成来看，肺癌已代替肝癌成为我国首位恶性肿瘤死亡原因，占全部恶性肿瘤死亡的22.7%，且发病率和病死率仍在继续迅速上升。根据卫生部全国肿瘤防治办公室提供的资料显示，2005年-2011年间，中国肺癌的发病数估计增加28万人，目前我国肺癌发病率每年增长26.9%，如不及时采取有效控制措施，预计到2025年，我国肺癌患者将达到100万，成为世界第1肺癌大国。大量的流行病学研究证明了吸烟与肺癌发生的密切关系，吸烟使肺癌的发病率和病死率持续上升。在因肺癌死亡的患者中，90%是由吸烟，包括被动吸烟引起的。同时肺癌的发生与个体基因易感性也有关。Caspase酶是1个氨基酸序列和空间结构非常相似的蛋白质家族，它有3个结构域，是控制细胞凋亡的关键组件，平常它们以酶原的形式存在于细胞内，当细胞接到凋亡信号后，Caspase家族成员依次被激活，以多种方式“拆解”细胞，其中1种方式是激活CAD，使CAD进人细胞核内，像剪刀一样剪断肿瘤细胞的DNA，导致细胞凋亡，因此Caspase酶也被形象地称为肿瘤细胞的“剪刀酶mCs,s7。有研究发现，Caspase-3在良性前列腺增生表达明显高于前列腺癌细胞。还有研究应用免疫组织化学发现，Caspase-3在肺癌的表达与有无淋巴结转移、病理分期、分化程度有关}m nz}。ADAM10是一种功能性的分泌酶，ADAM10最初从牛脑髓鞘膜中分离纯化而来，并被称为哺乳动物整合素金属蛋白酶。体外实验发现ADAM10是细胞质髓鞘碱性蛋白酶，由于ADAM10广泛参与细胞功能，许多疾病，如癌症或AD都将其列为有潜力的靶点。

ADAM10可以切割肿瘤相关底物，并与前列腺癌或乳腺癌的进程相关，它还与人结肠癌细胞迁移有关。因此，抑制ADAM10在一定条件下对于肿瘤治疗可能是有帮助的。相反，在脑内ADAM10过表达或激活对于治疗神经退行性疾病，也许是有利的。本文结果显示，ADAM10和Caspase-3阳性表达呈棕黄色与颗粒状，主要定位于细胞浆中。ADAM10和Caspase-3在正常肺组织和肺癌组织的表达阳性率分别为100%和X0.000。经过调查，ADAM10和Caspase-3在腺癌中的表达水平较鳞癌和小细胞癌低，同时在转移的肺癌表达水平也比较低。总之，Caspase-3,ADAM10在肺癌中表达都受到抑制，阳性率降低，可能与患者肿瘤的病理特点与转移情况有关，可作为预测肺癌发生发展的指标之一。

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