母牛分枝杆菌菌苗对无症状期HIV 感染者CD4+ 和CD8+T 细胞计数及病毒载量的影响

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染所导致的以免疫系统功能缺陷为特征的慢性高致死率传染病。CD4+T 细胞是HIV 损害的主要靶细胞，HIV 可引起CD4+ T 淋巴细胞进行性丢失与功能受限[1]。而无症状HIV 感染者所占比例较大，其体内CD4+T 淋巴细胞数量虽达不到高效抗逆转录病毒疗法(HARRT)治疗标准，但细胞免疫功能已不健全。母牛分枝杆菌菌苗能促进T 淋巴细胞转化及增殖，改善患者的细胞免疫功能，使CD3和CD4值升高，CD8值降低，调节Th1/Th2平衡[2]。本研究以无症状期HIV 感染者为研究对象，通过对其予母牛分枝杆菌菌苗治疗，探讨对该类患者的细胞免疫功能改善治疗效果，现将结果报道如下。

1　资料与方法

1.1　一般资料　选择2012 年10月至2013 年9月在重庆市北碚区及本院符合纳入标准的102 病例纳入本次分析研究。纳入标准：经重庆市疾病预防控制中心实验室确认为HIV 阳性者;年龄为18～60 岁;符合世界卫生组织(WHO)界定的HIV 无症状感染期(临床1 期);未接受抗病毒抗反转录病毒药物治疗;签署知情同意书者。根据入组时CD4+ T 淋巴细胞检查结果分4组，CD4+ T 淋巴细胞低下者(CD4+ T 细胞小于500/μL)随机分为治疗组Ⅰ 和对照组Ⅰ，CD4+ T 淋巴细胞正常者(CD4+T 细胞大于或等于500/μL)为治疗组Ⅱ 和对照组 Ⅱ，各组的人口资料比较见表1。各组间性别，年龄范围比较，差异无统计学意义(p>0.05)。

1.2　治疗方案　治疗组给予母牛分枝杆菌菌苗注射液(安徽龙科马生物制剂有限责任公司生产，批号：201206212)，每次22.5μg深部肌肉注射，每周1次，2个月为1个疗程。

1.3　血液标本采集　使用EDTAK2 抗凝真空管分别采集患者治疗前以及治疗2月后晨起空腹肘静脉血液5mL，6h内进行免疫功能检测，剩余标本离心制备血浆后置液氮罐冻存送金域生物检验公司进行HIV 病毒载量测定。

1.4　CD4+ 和CD8 + T 细胞计数　取新鲜EDTAK2 抗凝全血50μL，加入含有已知数量标准微球的TruCOUNT 管(BD公司)，加入20μLCD4/CD8/CD3 三色荧光团标记抗体(TritestCD4FITC/CD8PE/CD3PerCP，BD 公司)，室温避光染色20min，加人10倍稀释溶血素450μL、混匀避光15min，FACSCalibur流式细胞仪(BD 公司)检测。使用MultiSET 软件，计算CD4+T 细胞、CD8+ T 细胞绝对值及相应百分比。

1.5　外周血浆中病毒载量测定　取EDTAK2 抗凝全血，2000r/min离心10 min分离血浆，置液氮罐冻存备用，待标本收集完全后送金域生物检验公司进行HIV 病毒载量测定，简要操作方法如下：取100μL 血浆，采用RTPCR 在COBASAmpliPrep/COBASTaqMan全自动病毒载量仪上(Roche公司)定量检测血浆中HIV RNA，扩增的靶核酸位置是HNgag区，可扩增HIV1 M 组的AH 亚型。实验设1个内部定量标准品，阴性质控品、弱阳性质控品和强阳性质控品各1 个。检测线性范围是40～1×107copies/mL。

1.6　统计学处理　使用Epidate3.02 建立数据库，病毒载量低于检测下限的结果按40copies/mL 统计，高于检测上限按1×107copies/mL 统计。软件用SPSS19.0 简体中文版分析，计量资料用单因素方差分析，用Pearson进行相关性检验。以 p<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1　免疫指标变化　治疗组Ⅰ、Ⅱ 治疗后的CD4+ 、CD4+/CD8+ 明显高于治疗前和对照组Ⅰ、Ⅱ，差异有统计学意义(p<0.05)。

2.2　HIV 病毒载量变化　治疗组Ⅰ、Ⅱ 病毒载量治疗后、治疗前和对照组Ⅰ、Ⅱ 无明显变化，差异无统计学意义(p>0.05)，而对照组治疗前后比较，差异无统计学意义(p>0.05)。

3　讨　　论

在HIV 感染早期，CD4+ T 细胞可在正常范围，但增殖减慢和无能应答[3]。无症状感染期，血液中CD4+ T 细胞进行性减少，外周CD8+T 细胞反应性升高并发挥着重要的抑制病毒复制的作用[4]，CD4+/CD8+ 比值下降，患者体内病毒载量处于相对较低水平。进入艾滋病期后，CD4+T 细胞进一步下降，而升高的CD8+T 细胞也降至接近健康人的水平。国际上通常建议当CD4+T 细胞小于500/μL 作为抗病毒治疗的重要指标之一，我国免费HARRT 治疗标准为CD4+ T 细胞小于350/μL。无症状感染期患者病情仍处于缓慢进展中[5]，故改善该期患者细胞免疫功能，延缓各种并发症发生具有重要的临床意义。母牛分枝杆菌菌苗富含与结核分支杆菌相似的共同抗原[6]，是一种良好的免疫调节剂，具有双向免疫调节功能[7]，能促进T 淋巴细胞转化、增殖，释放出各种淋巴因子[8]，显著改善患者的细胞免疫功能，增强机体抵抗力[9]，且能有效抑制结核杆菌等感染引起的过强变态反应所致的病理性损害[10]。研究结果提示母牛分枝杆菌菌苗通过调节细胞免疫，促进CD4+T 细胞数量增加及功能恢复[11]，对于控制艾滋病病毒感染者细胞免疫功能维持，延缓患者发病具有重要意义，为无症状期或达不到HARRT 治疗的HIV 感染者采取积极的应对措施提供科学依据。在无症状期HIV 患者特别是细胞免疫功能低下患者，应该给予免疫治疗[12]，而对于艾滋病期患者在HARRT 治疗基础上联合母牛分枝杆菌菌苗治疗是否提高其细胞免疫功能的恢复，将进一步研究探讨。

参考文献

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(收稿日期：20131210)