Bcl2表达对不同细胞来源的弥漫大B细胞淋巴瘤临床病理特征

作者                  作者单位

裴媛媛  贵阳医学院 病理学教研室， 贵州 贵阳 550004

杨文秀  贵阳医学院 病理学教研室， 贵州 贵阳 550004

王松    贵阳医学院 病理学教研室， 贵州 贵阳 550004

薄丽    贵阳医学院 病理学教研室， 贵州 贵阳 550004

孟青　　贵阳医学院 病理学教研室， 贵州 贵阳 550004

The Effects of Bcl2 Expression on the Clinicopathological

Features and Prognosis of Diffuse Large B Cell Lymphoma from Different Cell Origins

PEI Yuanyuan, YANG Wenxiu, WANG Song, BAO Li, MENG Qing

Department of Pathology，Guiyang Medical College, Guiyang 550004, Guizhou, China

[Abstract] Objective: To investigate the influence of Bcl2 expression on clinicopathological features and prognosis of diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) developed from different cell origins. Methods: Tissues of 42 cases of DLBCL were screened from 180 cases of B cell nonHodgkin lymphoma. Sections were stained with routine HE method, and immunophenotypes of neoplastic cell, such as CD20, CD3, CD10, Bcl6, Bcl2 and MUM1, were examined with immunohistochemistry (IHC) stained sections. The clinical and pathological data of all cases were collected. Some patients were followed up. Statistical analysis was done. Results: The expression of Bcl2 was found in 31 out of 42 case of DLBCL (73.8%). There was no statistically significant difference of Bcl2 expression between GBClike (14/17) and ABClike (17/25) DLBCL. The relation of Bcl2 expression with age, sex, site of DLBCL was not found, but it was associated with clinical staging of the disease. The stages of Bcl2positive DLBCL cases were later than those of Bcl2negative DLBCL cases (P<0.05). Most of the DLBCL cases that originated outside nodes showed positive expression of Bcl2 (5/6). There was a tendency that the survival status of Bcl2positive cases was worse than that of Bcl2negative cases (P=0.06). Conclusions: The expression of Bcl2 in DLBCL doesn't associate with the gene expression spectra obviously, but it affects the clinical course and prognosis of DLBCL. Bcl2 may be one of predictive factors for prognosis of DLBCL.

[Key words] lymphoma; bcl2; pathology; prognosis

弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma, DLBCL)是外周成熟B细胞淋巴瘤中最常见的类型，是一组异质性淋巴瘤，在2008年淋巴造血组织肿瘤分类中被分成了十余种亚型[1],不同DLBCL亚型的病因、发生机制、临床过程和预后不尽相同。Bcl2是从B细胞淋巴瘤中被首先发现的癌基因，是重要的凋亡抑制基因，主要通过线粒体途径抑制细胞凋亡。过去研究认为，Bcl2特异地在惰性的滤泡性淋巴瘤中表达，通过抑制细胞凋亡而参与滤泡性淋巴瘤的发生机制。现在发现，Bcl2在多种惰性小B细胞淋巴瘤和侵袭性的DLBCL中都有表达，其表达对这些淋巴瘤产生的影响目前尚未完全清楚。有报道认为，Bcl2表达可能影响DLBCL的化疗效果和临床过程[2，3]，但研究结果不尽一致，Bcl2表达对不同细胞来源的DLBCL的影响还未见报道。收集2001-2007年DLBCL病例进行研究，观察Bcl2表达对DLBCL细胞来源、临床病理特征和预后等是否产生影响，是否可以作为判断DLBCL预后的相关因子。

1 资料和方法

1.1 资料

收集2001-2007年诊断的B细胞非霍奇金淋巴瘤180例，常规HE切片观察，检查肿瘤细胞的免疫表型，按照2008年WHO淋巴造血组织肿瘤分类[2]进行病例复查和筛选。筛选工作由两位资深的病理科医师完成，淋巴瘤的临床分期参照修正的Ann arbor 分期进行，根据Bcl2表达情况对研究病例进行分组，根据肿瘤细胞CD10、Bcl6和MUM1的表达情况确定DLBCL的细胞来源。CD10和Bcl 6阳性(或Bcl 6及CD10单独阳性)、而MUM1阴性者划为生发中心细胞来源(GBC)，CD10和Bcl6阴性(或Bcl6阳性)、而MUM1阳性者划为活化后细胞来源(ABC)。

1.2 方法

1.2.1 常规苏木素伊红染色

按常用病理技术操作规范进行[4]。切片、脱蜡、梯度酒精下行入水、苏木素染色、分化、伊红染色、脱水、透明封片。

1.2.2 免疫组织化学染色

采用SP三步法，以Tris乙二胺四乙酸(EDTA)(pH 9.0)或枸掾酸(pH 6.0)为修复液，进行高压热修复。DAB显色，用PBS液代替一抗作为空白对照。全部病例都标记CD20、CD3、CD10、MUM1、Bcl6和Bcl2。所用一抗Bcl6购自北京中杉金桥公司，其余均为DAKO产品。抗体稀释度CD10为1∶80，Bcl6为1∶50，其余均为1∶150，检测试剂盒购自北京中杉金桥生物科技有限公司。免疫组织化学结果判断：CD20、CD10、CD3阳性信号定位于细胞膜，Bcl6、MUM1阳性信号定位于细胞核，Bcl2阳性信号定位于细胞浆。以Bcl2阳性细胞数多于肿瘤细胞的20%为阳性。

1.2.3 随访

主要采用电话随访、信访或到病人家中探访，以病人诊断之日为随访开始时间，以2009年7月18日为随访结束时间。

贵阳医学院学报 34卷 6期裴媛媛等 Bcl2表达对不同细胞来源的弥漫大B细胞淋巴瘤临床病理特征和预后的影响　　1.2.4 统计学分析 应用SPSS 11.5软件包进行分析，计数资料均采用χ2检验，生存分析采用KaplanMeier方法绘制生存曲线，生存曲线的比较采用对数秩检验(Log Rank test)，以P值<0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 临床病理资料

180例B细胞性非霍奇金淋巴瘤中，42例符合诊断标准、具有相对完整的临床病理资料的病例被纳入研究。42例DLBCL中，男27例，女15例，男女之比为1.8:1, 发病年龄16～91岁，中位发病年龄59.5岁。原发于淋巴结内15例，原发于结外27例。临床分期I期4例，II期8例，III期20例，IV期10例。27例原发于淋巴结外的DLBCL中6例有淋巴结累及。光学显微镜下观察DLBCL肿瘤细胞弥漫分布，原有的组织结构破坏，肿瘤细胞为中等或大细胞，细胞圆形或类圆形，细胞核为泡状核、染色质细腻、见多个贴近核膜的小核仁或中位的大核仁。肿瘤细胞免疫表型为：全部病例CD20阳性及C3阴性， 17例CD10阳性，23例Bcl6阳性，25例MUM1阳性。

2.2 Bcl2表达与DLBCL临床病理特征

42例DLBCL中，31例不同程度地表达Bcl2(31/42, 73.8%)(图1)，6例出现淋巴结累及的结外DLBCL中5例表达Bcl2。Bcl2表达与DLBCL部分临床病理特征的关系见表1。表1 Bcl2表达与DLBCL临床病理特征的关系(略)

2.3 随访结果

42例DLBCL中有26例获随访资料，获访率61.9%，随访时间2～37月。26例获访病例中，存活16例，复发3例，死亡10例，均死于DLBCL，中位生存时间17月。10例死亡病例中，来源于GBC细胞和ABC细胞的DLBCL各占5例，9例Bcl2阳性，1例Bcl2阴性。3例复发病例中，2例来源于ABC细胞，1例来源于GBC细胞，3例均为Bcl2阳性。26例中7例接受手术治疗，其中2例术后辅以化疗，6例接受了单纯CHOP方案化疗，2例接受CHOP方案化疗和放疗，5例接受中药治疗，1例接受骨髓移植，5例放弃治疗。根据DLBCL病例的Bcl2表达和细胞来源情况绘制生存率曲线并进行生存分析，结果见图2、3。

3 讨论

DLBCL是发病率很高的侵袭性淋巴瘤。在DLBCL的十几个亚类型中，非特指的DLBCL是最多见的亚类。根据肿瘤细胞的基因表达图谱，非特指DLBCL被分成了GBC样和ABC样DLBCL。目前主要通过免疫组织化学标记来进行划分，常用的抗体为CD10、Bcl6和MUM1。CD10和Bcl6是GBC样的标记，MUM1则是ABC样B细胞的主要标记。研究认为，ABC样DLBCL的临床过程和预后较GBC样DLBCL差，GBC有50%以上的5年生存率，是低临床风险的DLBCL，而ABC样DLBCL病人仅有不到20%的5年生存率，具有较晚的临床分期，原发于结外者具有较高的淋巴结累及率，是具有高临床风险的DLBCL[5～7]。Bcl2是凋亡抑制基因，在滤泡性淋巴瘤中由于t(14;18) 染色体易位的出现，使18号染色体上的Bcl2基因易位到免疫球蛋白重链基因的强启动子下，导致Bcl2基因的高表达。在研究和工作中发现，Bcl2在一些惰性的小B细胞淋巴瘤和DLBCL中都有不同程度的表达，有报道认为Bcl2是DLBCL治疗中相关的耐药基因。目前，Bcl2表达对不同类型非特指DLBCL的影响很少见到报道，此次研究发现，在DLBCL中具有较高的Bcl2表达，表达率为73.8%(31/42)，在GBC样和ABC样DLBCL病例之间，Bcl2的表达没有明显差异(GBC样为14/17，ABC样为17/25)。Bcl2表达对DLBCL的发病年龄、性别及原发部位等没有明显影响，但Bcl2表达和不表达病例之间临床分期有明显差别，Bcl2阳性的DLBCL临床分期明显晚于Bcl2阴性的DLBCL，原发于结外的DLBCL淋巴结累及者大多数是Bcl2阳性表达病例(5/6)，说明Bcl2表达对DLBCL的临床过程有明显影响，这和文献报道一致[8]。此次研究还发现，ABC样DLBCL病例多于GBC样DLBCL病例。生存分析发现，GBC样DLBCL的中位生存时间是28月，ABC样DLBCL中位生存时间是24月，两组病人的生存率曲线比较没有统计学差异(P>0.05)，Bcl2阳性表达的DLBCL中位生存时间为36个月，而Bcl2阴性表达病例的中位生存时间为22月，两组病人的生存率曲线比较亦未见统计学差异，P=0.06，提示Bcl2阳性表达病例的生存状况有差于阴性表达病例的趋势，生存分析结果与文献报道不尽一致，这可能与本次获访病例数偏少和随访时间短有关系，DLBCL病例的中位生存时间较短可能与研究病例中ABC样DLBCL病例较多，而GBC样DLBCL病例较少有关，也可能与贵州山区经济贫困和医疗条件落后有关系，这有待于扩大研究范围、延长随访时间进行深入的研究。

【参考文献】

[1]Sweredlow SH, Campo E，Harris NL, et al. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues [M].4th Edition, IARC Press, 2008: 214-217, 233-237.

[2]施姗姗，胡长路，余元勋,等. Bcl2/IgH和IgH基因重排与非霍奇金淋巴瘤诊断和化疗效果的相关性研究[J].临床肿瘤学杂志,2009 (1):55-58

[3]蒋会勇，李慧灵，胡海,等. 弥漫大B细胞淋巴瘤t(14;18)易位及bcl2基因扩增的检测[J]. 中华病理学杂志，2007(2)：84-89.

[4]陈天明.现代病理诊断规范与操作技术[M].2版.北京：中国科学文化出版社，2005:304-325

[5]Hans CP, Weisenburger DD, Greiner TC, et al. Confirmation of the moleular classification of diffuse large B cell lymphoma by immunohistochemistry using a tissue microarray[J]. Blood, 2004(103):275-282

[6]Colomo L, LopezGuillemo A, Perales M, et al. Clinical impact of the differentiation profil assessed by immunophenotyping in patients with diffuse large B cell lymphoma[J], Blood, 2003(101):78-84

[7]Rosenwald A, Wright G, Chan WC, et al. The use of molecular profiling to predict survival after chemotherapy for diffuse large B cell lymphoma[J]. N Engl J Med, 2002(346):1937-1947

[8]Amen F, Homcastle D, Elderfield K, et al. Absence of cyclinD2 and Bcl2 expression within the germinal centre type of diffuse large B cell lymphoma identities a very good prognosis subgroup of patients[J]. Histopathology, 2007(51):70-79.