贵州两种牛带绦虫感染免疫抑制小鼠生化指标的动态观察

作者                作者单位龚莉莉     黔南民族医学高等专科学校,贵州,都匀,558003

戎聚全     黔南州第一人民医院,贵州,都匀,558003

林开颜     黔南州第一人民医院,贵州,都匀,558003

陈利红     黔南州第一人民医院,贵州,都匀,558003

吴桂萍     黔南州第一人民医院,贵州,都匀,558003

Dynamic observation on the biochemical index in the immunosuppressive mice experimentally infected with Taenia sagi-nata asiatica in Duyun City and Taenia saginata in Congjiang City.

GONG Li-li，RONG Ju-quan，LIN Kai-yan，et al.

(School of Qiannan Minority Nationality Medical College，Duyun558003，Guizhou，P.R.China)

Abstract:Objective To observe the dynamic change on the biochemical index in mice experimentally infected with Taenia saginata. Methods Mice were subcutaneously infected with oncospheres of T.saginata asiatica and Taenia saginata in Con-gjiang and every mouse was treated with dexamethasone(1mg/day)through subcutaneous injections.All the mice were dissected40，60and75days after infection，then the liver function，renal funtion and myocardial enzyme index was determined. Results Liver funtion TP、ALB、ALT、ASP changed more significantly with the increase of days aftger infection;renal funtion index BUN、CREA、UA and myocardical enzyme CK、LDH improved markedly，with the increase of parasitized days of cysticerci，a variety of biochemical in-dex of a multiple increased. Conclusion The biochemical indexes of mice such as liver and renal funtion，myocardial enzyme index etc.changed more significantly with the increase of infected days.

Key words:Taenia saginata;Experimental infection;Mice;Biochemical index

贵州省黔南布依族苗族自治州都匀市和黔东南苗族侗族自治州从江县是牛带绦虫病的流行区 [1] ，相关文献已证明都匀及从江牛带绦虫感染猪、牛后，生活史形态不同，并经DNA、PCR扩增试验体细胞色素氧化酶，基因片段并测序，计算遗传距离并构建系统发育树状圈，结果贵州都匀基因序列与已确认的台湾亚洲牛带绦虫(Taenia saginata asiatica)基因序列的同原性达97.44%，氨基酸序列到同源性达99.16%，而与从江县牛带绦虫区别不同的亚种 [2～5] 。为观察都匀对宿主组织器官的伤害，现以免疫抑制小鼠感染都匀亚洲带绦虫与从江牛带绦虫动态观察生化指标，以探讨感染对宿主生化指标的影响。

1 材料和方法

1.1 实验动物 昆明小鼠60只，雌、雄各半，体重18～20g(购自贵阳医学院动物中心)，并随机分为2组，都匀亚洲带绦虫感染组(30只)，从江牛带绦虫感染组(30只)。感染前小白鼠经粪检、驱虫，证明无囊尾蚴感染。

1.2 方法

1.2.1 实验虫体来源 虫来自贵州都匀亚洲带绦虫流行区和贵州从江牛带绦虫流行区已确诊的绦虫病患者，采用南瓜子、槟榔驱虫法，驱出完整的虫体，用生理盐水洗净，经形态学鉴定，贵州都匀牛带绦虫为亚洲带绦虫，从江牛带绦虫为传统的牛带绦虫。

1.2.2 虫卵收集 将用生理盐水洗净的成虫分别取其末端成熟孕节片10节剪碎，用无菌生理盐水漂洗，除去虫体碎片，1000r/min离心5min，弃上清液备用。

1.2.3 虫卵孵化 将0.5%次氯酸钠溶洲加入离心后的虫卵沉淀物中，室温振荡混匀，8min后吸取混匀的孵化液镜下观察，待大部分卵膜破裂六钩蚴孵出后，离心，去上清液加入10ml无菌蒸馏水混匀后，倒入培养皿中，再分别用60ml无菌蒸馏水洗净离心管后倒入培养皿中，混匀后镜下计数(约700个六钩蚴/ml)备用。

1.2.4 小鼠免疫抑制方法 从感染当天开始，每只小鼠皮下注射地塞米松1mg/d，同时在小鼠饮水中按0.8mg/ml的比例加入四环素以防止细菌感染，直至剖杀。

1.2.5 实验感染方法 用注射器吸取六钩蚴溶液，缓慢注入小鼠皮下和腹腔，每只注射1ml溶液。感染后的小鼠按组隔离喂养。

1.3 检测方法 实验小白鼠分别于接种前、接种后40、60、75d取血采用日立75150全自动生化分析仪检测(每次各20只，取平均值)肝功能，包括总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、丙氨酸胺基转移酶(ALT)、天门冬氨酸胺基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP);肾功能，包括尿素氮(BUN)、肌肝(CREA)、尿酸(UA);心肌酶，包括肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)。另采用910EO+血球计数仪检测小白鼠血象指标。

1.4 统计学处理 实验数据取平均值，进行卡检验分析。

2 结果

2.1 囊尾蚴感染情况 小白鼠感染都匀牛带绦虫75d后在皮下发现较多的囊尾蚴，但肌肉、肝脏只有少量囊尾蚴，囊尾蚴椭圆形可近圆形，囊体透明，囊壁厚，囊内充满液体，可见囊内凹入的乳白色头节。测量50个囊尾蚴，大小为(1.34～2.78)×(1.22～2.31)mm。囊尾蚴压片染色，虫体头部均可见4个吸盘和顶突，3个囊尾蚴原头节顶突周围发现两圈似小钩的点状结构。

2.2 实验感染免疫抑制小鼠肝功能、肾功能、心肌酶指标动态观察，见表1。

表1 贵州两种牛带绦虫实验感染小鼠肝功能、肾功能、心肌酶指标动态观察(略)

Table1 Dynamic observations on the liver and renal function，myocardial enzyme index in mice experimentally infected with Taenia saginata in Duyun and Congjiang area

2.3 实验感染免疫抑制小鼠血象指标变化 感染前、感染后40、60、75d的血象指标大致正常，但嗜酸性粒细胞随着感染时间延长而升高，感染前、感染后40、60、75d分别为0～1%、2%～3%、4%～7%和15%～24%。

3 讨论

本实验发现都匀亚洲带绦虫与从江牛带绦虫实验感染免疫抑制小鼠后，肝功能TP、ALB、ALT、AST、ALP，肾功能BUA、CREA;心肌酶CK、LDH生化指标随感染时间呈倍递增，以感染至60d为高峰，之后逐渐下降。虽然两种绦虫感染免疫抑制小鼠，囊尾蚴分布在皮下，肌肉由于毒素和免疫作用可以引起肝细胞、肾细胞损伤，直至坏死，使血中ALT、AST和UBN、CREA升高;也可引起心肌、肌肉炎症、坏死，导致细胞能量代谢障碍，细胞肿胀，膜孔腺增大，酶从细胞中溢出，血中CK、LDH升高 [6～8] ，其机理还需进一步研究。这一结果与李薄报道 [9] ，牛带绦虫生化指标变化与其囊尾蚴寄生部位一致的结果不同，但也说明了皮下肌肉的囊尾蚴感染。也能引起全身中毒、免疫反应，导致全身性损害，引起心、肝、肾功能衰退。本文对都匀亚洲牛带绦虫及从江牛带绦虫感染免疫抑制小鼠生化指标进行观察，可反映小鼠的内脏损害程度，这对于了解不同绦虫、不同宿主、不同感染方式与宿主损害的相互关系，对药理作用机理的研究均有一定意义。

参考文献:

[1]包怀恩.我国亚洲牛带绦虫研究的现状和展望[J].热带医学杂志，2002，2:215～218.

[2]王正蓉，包怀恩.用mtCOI技术测定云南及贵州四地区的牛带绦虫[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2003，21(1):20～23.

[3]陈艳，包怀恩，李金福，等.贵州都匀牛带绦虫亚洲亚种的调查和虫体内元素及氨基酸的检测[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2003，21(5):311～313.

[4]莫兴泽，包怀恩，戎聚全，等.都匀亚洲牛带绦虫与从江牛带绦虫实验感染牛和猪的比较研究[J].中国寄生虫病防治杂志，2005，8(2):120～122.

[5]陈利红，包怀恩，戎聚全.都匀亚洲带绦虫感染免疫抑制小鼠的实验研究[J].中国人兽共患病杂志，2005，7，21(7):602～604.

[6]Winweed PJ，kuffer cells:The activation and role of animal models of liver injury and human liver disease[J].seminars in liver Disease，1993，13(1):50.

[7]Zhang LP，Takahara T，Yata Y，et al.Increased expreression of plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor during liver fibrogenesis of rats:role of stellate cell[J].J Hepatol，1999，31(4):703～711.

[8]李萍.生物化学检验[M].第2版.北京:人民卫生出版社，2003，224～227.

[9]李薄，包怀恩，戎聚全，等.都匀牛带绦虫与从江牛带绦虫实验感染猪牛生化指标的观察[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2005，23(5):312～314.