叶下珠有效部位总提取物一般药理作用研究

作者                    作者单位

温志坚       四川省中药研究所，四川 成都 610041

周永禄       四川省中药研究所，四川 成都 610041

曹毓         四川省中药研究所，四川 成都 610041

彭龙玲       四川省中药研究所，四川 成都 610041

叶下珠Phyllanthus urinaria L.为大戟科Euphorbiaceae叶下珠属PhyllathusL.的全草，自印度学者Thyagarajan 1988年首次报道苦味叶下珠Phyllanthus amarus L.治疗乙型肝炎病毒携带者有良效以来，引发了国内外学者广泛、深入、持久的开发研究;本课题组采用大孔树脂提取工艺制备的叶下珠Phyllanthus urinaria L.)有效部位总提取物及其制剂(叶下珠胶囊，下文均统称叶下珠)，用于治疗鸭乙肝[1]和临床预试[2]均获良效。目前叶下珠研究领域已拓展到抗肿瘤、抗单纯疱疹病毒、抗艾滋病毒、抗菌、溶栓、镇痛等领域;但其毒理学的研究报道却极少。为了更深入研究叶下珠的药理作用，为临床应用提供安全参考，拟将叶下珠有效部位总提取物一般药理、毒理研究结果作较系统的报道。

1 叶下珠对中枢神经系统的作用[3]

1.1 器材受试药物：叶下珠有效部位总提取物(下称叶下珠)每克相当原生药34 g;下文均以叶下珠有效部位总提取物重量计算。批号：96237，由四川中药研究所药化室提供。

1.2 动物昆明种远交系小鼠，一级标准，合格证为24301035;四川省中药 研究所实验动物室提供。

阳性对照药：速效枣仁安神胶囊内容物，重庆中药厂生产，批号：951206-4临用时蒸馏水配制5 mg/ml。戊巴比妥钠，Serva进口分装，Serva进口分装，上海化学试剂采购供应站，批号95-01-03。

1.3 仪器智能四箱式生物自发活动测定仪，重庆大学生物工程中心研制。

1.4 方法与结果

1.4.1 叶下珠对戊巴比妥钠睡眠时间的影响取体重18～22 g昆明小鼠50只，雄性，每组10只，共5组，分别为正常对照组(灌服生理盐水)，速效枣仁安神胶囊100 mg/kg，叶下珠大、中、小剂量(500，250，125 mg/kg);各组动物灌胃给药1 h后腹腔注射戊巴比妥钠50 mg/kg;记录灌胃后动物行为，以及腹腔注射戊巴比妥钠后，翻正反射消失和恢复的时间，计算各动物睡眠时间;数据按t检验统计处理结果见表1：药后观察动物行为未见异常。(给药后无催眠、镇静，无体位变化;姿势、步态均正常，无肌颤、流涎、眼球震颤等改变)。表1 叶下珠对小鼠戊巴比妥钠睡眠时间影响(略)

结果表明叶下珠对小鼠戊巴比妥钠睡眠时间无明显影响;阳性对照组速效枣仁安神胶囊100 mg/kg可明显延长小鼠戊巴比妥钠的睡眠时间。

1.4.2 叶下珠对戊巴比妥钠阈下催眠剂量的影响取体重18～22 g昆明种小鼠50只，雄性，随机分成5组，每组10只，分组及剂量见表2。药物组按0.2 ml/10 g灌胃，正常对照组灌胃等体积生理盐水。小鼠于给药后30 min分别腹腔注射阈下催眠剂量的戊巴比妥钠(25 mg/kg,0.1 ml/10 g)，观察注射戊巴比妥钠15 min后各组翻正反射消失1 min以上的动物数;χ2值测定给药组与对照组的差异。结果见表2。表2 叶下珠对戊巴比妥钠阈下催眠剂量的影响(略)

结果表明：叶下珠各剂量与正常对照组无显著性差异;速效枣仁安神胶囊和戊巴比妥钠有协同作用，说明速效枣仁安神胶囊有镇静作用。

1.4.3 叶下珠对小鼠自发活动的影响仪器：智能四箱式生物自发活动测定仪，重庆大学生物工程中心研制。

受试药物、阳性对照药、实验动物来源均同上。

取体重为18～22 g昆明小鼠40只，分成4组，每组10只，雌雄各半;分别设叶下珠大、小剂量组(600，150 mg/kg)、速效枣仁安神胶囊75 mg/kg和正常对照组;实验分10批进行，每批分别取各组动物1只，按表3剂量灌胃1次，正常对照组灌胃等体积蒸馏水，给药1 h后分别置智能四箱式生物自发活动测定仪中，测定20 min动物的总位移数，结果见表3。实验结果进行t检验。表3 叶下珠对小鼠自发活动的影响(略)

结果表明叶下珠大、小剂量对小鼠自发活动均无明显影响;速效枣仁安神胶囊可明显减少小鼠总位移数。即抑制小鼠自发活动。

综上所述，叶下珠对中枢神经未产生明显的抑制或兴奋作用。而速效枣仁安神胶囊有明显安神、镇静作用。

2 叶下珠对狗血压、呼吸、心率、心电图的影响[4]

2.1 材料

2.1.1 受试药物叶下珠有效部位总提取物，每克相当原生药34 g。本所药化室供。

2.1.2 动物杂种狗，体重10 kg左右，中国人民解放军第三军医大实验动物室提供，雌雄兼有。

2.1.3 仪器日本光电RM-6000 kg型多导生理记录仪。

2.1.4 试剂戊巴比妥钠，Serva进口分装，上海化学试剂采购供应站，批号95-01-03。

2.2 方法与结果动物于实验前驱线虫，两周后起用，基本方法按文献[4]，按体重腹腔注射戊巴比妥钠33 mg/kg麻醉，麻醉后仰位固定于解剖台上，分离左侧总动脉，插管连接日本RM-6000型多导生理记录仪上描记血压、呼吸、Ⅱ导联心电图。剑突下切一小口约3 cm，找出十二指肠行外科插管并固定，作给药用通道。手术记录血压、呼吸、心率、心电图30 min平稳后，十二指肠给药。按两个剂量组(47，470 mg/kg)给药，两剂量分别相当临床剂量(10 mg/kg)4.7，47倍。给药后隔5，15，30 min描记，共记录13次。结果如表4～6。表4 叶下珠对狗心率、呼吸、血压的影响(略)表5 叶下珠对狗心率、呼吸、血压的影响(略) 表6 叶下珠对狗心电图的影响(十二指肠1次给药结果)(略)

结果显示：叶下珠47 ，470 mg/kg(临床剂量4.7，47倍)对狗戊巴比妥钠麻醉条件下十二指肠给药，用MR-6000型多导生理记录仪连续4 h记录给药前后的呼吸、血压、心率、心电图，未发现异常。

3讨论

本文按中药5类新药开发研究的一般药理研究指导原则进行研究，按该原则，新药一般药理研究是指新药主要药效作用以外广泛的药理作用研究(重点观察中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统);以了解该品更全面的药理作用，为全面开展毒理研究作准备。结果显示：叶下珠有效部位总提取物500，250，125 mg/kg(均在药效学有效剂量范围之内)对戊巴比妥钠睡眠时间、对戊巴妥钠阈下催眠剂量、小鼠的自发活动均无影响。说明本品对中枢系统无兴奋或抑制作用。这有利于使用药品的患者正常工作与生活;结果还显示，对戊巴比妥钠麻醉状态下的犬，施用外科插管作十二指肠给药，八导生理记录仪连续4 h记录心率、心电图、血压、呼吸频率，结果表明，47，470 mg/kg(分别相当于临床预试剂量的4.7倍和47倍)对正常麻醉状态动物的心率、心电、血压、呼吸频率无影响;有报道认为苦味叶下珠全草具有利尿、降压作用，能显著降低患者收缩压[5，8]。苦味叶下珠有效成分叶下珠素、叶下珠次素、珠子草素是新发现的一类蝴蝶肽类内皮素-Ⅰ拮抗剂，能选择性抑制内皮素-Ⅰ与A型受体结合，从而达到降压作用[6，8];还有报道[7，8]认为叶下珠属植物活性成分鞣花酸、老鹳草素(geraniin)、没食子酸、柯里拉京均能抑制血管紧张素转化酶(ACER)活性，从而抑制血管紧张素-Ⅰ转化为血管紧张素-2。可能是采用的叶下珠(Phyllanthus urinaria L)有效部位总提取物成分较多，可能存在互相互干扰的成分，或者我们是采用整体动物麻醉状态下显示其作用有异。Srividya. N报道的是Phyyllar-thus urinaria L全草，观察对象又是人，而且用药时间为10 d;而Hussain R A和Ueno H应用的是单一成分。所以与国外学者结果有异。为深入研究，有必要将有效成分分离纯化，作进一步药理研究。

【参考文献】

[1]陈压西，郭树华，温志坚，等.叶下珠有效部位抗鸭乙型肝炎病毒及体外抗HBV活性的研究[J].中药药理与临床，1999，15(6)：16.

[2]张建军，盛国光，张赤志.叶下珠胶囊治疗慢性乙型肝炎的临床研究[J].中西医结合肝病杂志，2002，12(6)：326.

[3]李仪奎，王钦茂.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社，1991：327.

[4]徐叔云，卡如濂，陈 修.药理实验方法学，第2版[M].北京：人民卫生出版社，1991：804.

[5]Srividya,Nct al.Indlan J Exp Biol.1995，33(11)：861.

[6]Hussain R A ctal.J Nat Prod.1995:58(10):1515.

[7]Ueno H ct al.J Nat Prod.1988,51(2):357.

[8]任进余，秦存林.苦味叶下珠、叶下珠的药理作用综述[J].国外医学中医中药分册，1999，21(2)：3.