高效液相色谱法同时测定三七伤药胶囊中4种成分
发表时间：2014-06-03 浏览次数：1218次
三七伤药胶囊收载于《国家药品标准新药转正标准第六十一册》,是由三七、草乌(蒸)、雪上一枝蒿、冰片、骨碎补、红花、接骨木、赤芍等8味中药经提取加工制成的中药复方制剂,具有舒筋活血、散瘀镇痛作用[1],用于急慢性挫伤、扭伤、关节痛、神经痛、跌打损伤等。目前9同时测定三七伤药胶囊多个成分含量的文献笔者未见报道。笔者采用高效液相色谱法(HPLC)切换波长法同时测定三七中活性成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1,骨碎补中活性成分柚皮苷、赤芍中活性成分芍药苷的含量[2-4],为该制剂的质量控制提供参考。
1仪器与试药
1.1仪器高效液相色谱仪:SⅢMADZU⒛10AHT,Class-VP色谱软件系统。
1.2试药芍药苷(批号:110736-201136)、柚皮苷(批号:110722-201111)、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1,以上4种对照品均购于中国食品药品检定研究院;三七伤药胶囊(广西玉林制药集团有限公司,批号:310150,310151,3101,规格:0.25g),阴性样品自制;甲醇为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱:shim-packVP-0DSC1:(250mm×4.6mm,5um);流动相:乙腈(A)-水(B);进样量:10uL;流速1.0mL·min1;检测器:紫外。各主成分与相邻峰之间的分离度>1.5,分离度良好。色谱条件见表1。
2.2对照品溶液的制各精密称对照品适量(芍药苷[5]12.51mg、柚皮苷[6]10.O~s mg、人参皂苷Rg11O.∝mg、人参皂苷Rb110,⒃mg)置犭mL量瓶中,制成混合溶液,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(配成浓度为药苷0.5CKl4mg·mL㈠、柚皮苷0硐2吧·lllL人参皂苷Rg10.娴16mg·lmL l、人参皂苷Rb10.0o94mg·lmL1的混合对照品溶液)。
2.3供试品溶液的制各取样品10粒内容物,精密称定,研细,精密称取细粉约1g,置具塞锥形瓶中,精密加人甲醇50mL,称定质量,充分振摇,超声提取娴min,补足减失的质量,放置室温后,取上清液,滤过,即得。
2.4阴性对照溶液的制各以相同处方比例,制得不含三七、骨碎补、赤芍的阴性样品,按供试品溶液的制各方法制成空白对照溶液。
2.5线性关系考察精密称取芍药苷12.53mg、柚皮苷10.12mg、人参皂Rg110.17mg、人参皂苷Rb1 10.“mg,置于10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取0.1,0.5,1.0,2.0,5.0,10.0mL置10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度。注人液相色谱仪分析,以峰面积对浓度做线性回归方程。得各成分回归方程,结果见表2。
2.6稳定性实验取同一供试品溶液,按上述色谱条件每隔4h进行测定,共计进样6次,测定其稳定性。芍药苷、柚皮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1峰面积的RSD分别为1.9%,1.8%,1.7%,1.8%。结果表明供试品溶液在24h内基本稳定[6]。
2.7精密度实验精密吸取同一混合对照品溶液,连续进样6次,测定其峰面积芍药苷、柚皮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷RbI,RSD分别为0.51%,0.55%,0.81%,0.72%(而=6),结果表明本法精密度良好[7]。2.8重复性实验取同一批号的样品6份,按“供试品溶液的制各”方法制各溶液并依法测定,结果芍药苷、柚皮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量的RSD分别为1.8%,置.1%,1.9%,1.6%(n=6),结果表明重复性良好。
2.9回收率实验精密称取已知含量的三七伤药胶囊样品适量,精密加人对照品适量,按“供试品溶液的制备”方法处理,计算各成分的回收率。结果表明,本法具有良好的加样回收率[8]。结果芍药苷平均回收率98.38%,RSD1.0%;柚皮苷平均回收率叨.30%,RSD1.0%;人参皂苷Rg1平均回收率,RSD 1.1%;人参皂苷Rb1平均回收率叨.13%,RSD0.6%,见表3。
2.10样品含量测定按供试品溶液项下制各方法和色谱条件对3批样品中芍药苷、柚皮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1进行分析,计算含量[9],结果见表4。
3讨论
3.1流动相的选择流动相应用乙腈-水,流动相用甲醇-水时人参皂苷类成分有末端吸收。导致明显的基线噪音,故选用乙腈为流动相的有机相。流动相的比例定为乙腈-水(17∶83)芍药苷的分离度才能够达到要求。
3.2检测波长的选择根据4种待测成分及其在色谱柱上分离顺序的先后,结合流动相的梯度配比,最终确定检测波长,使主成分干扰小、能够达到良好分离。
参考文献：
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