RP-HPLC法检测0.2%苯酚溶液含量
发表时间：2014-06-03 浏览次数：1104次
苯酚为一种原浆毒，能使细菌细胞的原生质蛋白发生凝固或变性而杀菌;0.2%苯酚水溶液在医疗机构常被用于医疗器械消毒及排泄物处理等。由于苯酚溶液易于氧化，所以配制的苯酚溶液应密闭、避光低温保存。苯酚原料药收载于《中国药典》[1]2010版443页，其含量测定采用氧化还原滴定法，方法操作比较繁琐，重复性差，滴定终点不好判断。本文采用反相高效液相色潽法测定该制剂中苯酚的含量，方法简便、准确、重复性好。1 仪器与试药紫外分光光度计UV-2550(日本岛津);高效液相色谱仪Agilent1200(美国安捷伦);工作站Agilent Chemstation for LC and LC/MS Systems;电子天平BP211D(德国赛多利斯);苯酚对照品(批号：批号：100509-200902中国药品生物制品鉴定所提供);水为重蒸馏水;甲醇(色谱纯，美国TEDIA);0.2%苯酚溶液(齐齐哈尔医学院第一附属医院制剂室制备，规格：2mg?ml-1;三批A、B、C)。2 方法与结果2.1 溶液的制备2.1.1 对照品浓溶液精密称取对照品苯酚20.21mg置100ml棕色量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，浓度为0.2021mg?ml-1，作为对照品浓溶液。2.1.2 供试品溶液精密量取供试品溶液10ml，(约相当于苯酚20mg)，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀;精密量取5 ml置100 ml量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，既得。2.1.3 空白溶剂制备取生产线制剂用纯化水(60-70℃)500ml置于产品用塑瓶中;加盖、密封;存放10天后使用。2.2 色谱条件[3]色谱柱：Waters-C18(150mm×4.6mm,5μm);流动相：甲醇-水(65：35);流速：1.0ml?min-1;柱温：35℃;进样量：10μl;检测波长254nm。色谱图见图1。AB图1 A对照品溶液 B供试品溶液 C空白2.3 线性关系考察精密量取苯酚对照溶液储备液1.0 、2.0 、5.0 、8.0、10.0ml分别置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，按2.2色谱条件进行测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标作线性回归;得回归方程为Y=28.625X-16. 746，r=0.9996;结果表明苯酚进样量在2.021μg～20.21μg?ml-1的范围内线性关系合格。2.4 精密度试验精密量取2.1.1对照品浓溶液5.0 ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，按2.2色谱条件，重复进样6针，得峰面积值，RSD为0.42%(n=6);表明系统精密度良好。2.5 重复性试验取(批号为A)供试品细粉6份，按2.1.2配制供试品溶液，按2.2色谱条件进行测定，样品的平均含量为98.6%;RSD=0.58%(n=6);表明系统重复性较好。2.6 稳定性试验取(批号为A)供试品细粉，按2.3配制供试品溶液;分别在0,2,4,8,12,24h进样测定，峰面积的RSD为0.64%(n=7);表明供试品溶液在24h内保持稳定。2.7 加样回收试验精密量取已知含量的供试品(批号：2010071，含量：99.6%);(相当于苯酚20mg)，共9份，分别置于100ml量瓶中;精密加入“2.1.1”项下对照品储备液相当于供试品中已知含量的80%、100%、120%各3份(精密量取对照品储备液80ml,3份、100ml,3份、120ml,3份)置于上述9份100ml量瓶中，用水稀释至刻度，过滤，再分别精密量取5ml置100ml量瓶中，加流动相至刻度，按“含量测定”项下方法测定，计算回收率，测得平均回收率为99.7%，RSD=0.81%。2.8 样品测定精密量取“2.1.1”项下的对照品溶液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，按本文色谱条件测定，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，测得结果见表1。表1 苯酚测定结果比较3 讨论3.1 检测波长的确定，取对照品溶液，在220～400nm的波长范围内进行紫外光谱扫描，苯酚浓度为10μg?ml-1的水溶液在254nm的波长处有最大吸收，所以将254nm作为液相系统的UV检测波长。3.2 中国药典2010版收录了苯酚原料药的含量测定方法为氧化还原滴定法，操作比较繁琐，滴定终点不好判断，苯酚见光或与空气接触易于氧化，影响测定结果。RP-HPLC法可以有效地将主药、降解产物、杂质进行分离、分析;使得测定结果更加准确、可靠、专属性强。【参考文献】[1] 中国药典[S].2005年版.二部.附录VD 443.[2] 张庆和.高效液相色谱色谱实用手册[M]：269.[3] 中国药典[S].2005年版.二部.附录VD 28.
