2种参数设置的Jaffe法与酶法测定血清肌酐结果的比对研究
发表时间：2014-05-07 浏览次数：1764次
肌酐是肌酸的终末代谢产物，主要通过肾小球滤过后随尿排出，血清肌酐浓度是临床评价肾小球滤过率受损和损害程度的重要指标之一。临床检测肌酐的常规测定方法有肌氨酸氧化酶法(酶法)和碱性苦味酸法(Jaffe法)两大类。Jaffe法特异性差，但操作简单、准确、快速，可进行急诊检验，广泛应用于临床。酶法较Jaffe法具有显著优势，灵敏度高、干扰因素小、线性范围宽。本研究以酶法为基准，观察Jaffe法在2种参数设置模式下与酶法结果的偏倚，并评价上述2种参数设置模式的准确性。
1 材料与方法
1.1 仪器 仪器为日立7170全自动生化分析仪。
1.2 试剂 Jaffe法试剂盒由德国罗氏诊断有限公司提供，酶法试剂盒由上海科华东菱诊断用品有限提供。校准品和质控品由德国罗氏诊断公司提供。
1.3 参数设置 单动力Jaffe法设置：反应类型RateA，反应时间10min，读数点20-24-0-0，主波长505nm，副波长570nm，样本量11μL，试剂Ⅰ量192μL，试剂Ⅱ量38μL，校准类型为两点校准。双动力Jaffe法设置：反应类型RateB，读数点20-24-10-14，其余同单动力Jaffe法设置。酶法设置：反应类型2piontend，反应时间10min，读数点16-34-0-0，主波长546nm，副波长800nm，样本量6μL，试剂Ⅰ量180μL，试剂 Ⅱ量60μL，校准类型为两点校准。
1.4 方法 在用Jaffe法2种模式测定血清肌酐过程中，试剂盒使用同一批号，两种方法测定均使用同一批号的质控品、校准品。每天进行质控检测。按美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)评价方案进行相关性分析和偏倚评估[1-2]。胆红素干扰物的配制参照文献[3]。
1.5 统计学处理 采用SPSS18.0软件进行统计学分析，方法之间的差异采用配对狋检验和方差分析，方法相关性采用线性回归分析。以p<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 相关性分析 随机选取本院住院部不同疾病患者，除外黄疸、溶血、脂血标本，每天测定12份，每份标本用3种方法分别做2次测定，第1次按顺序1→12测定血清肌酐，再按相反顺序12→1重复测定，共测10d，记录结果。经组内、组间离群值检验后得线性回归方程为：Y1=1.002X+16.246(r=0.945)，Y2=0.958X+7.974(r=0.997)。结果显示2种模式Jaffe法与酶法相关性良好。
2.2 结果偏倚评估 根据酶法测定值分组：Ⅰ组低浓度(<42μmol/L)45例，Ⅱ组中浓度(42～133μmol/L)34例，第Ⅲ组高浓度(>133μmol/L)26例，依据上述回归方程，酶法与单动力Jaffe法测定肌酐结果的预期偏倚评估见表1，酶法与双动力Jaffe法测定肌酐结果的预期偏倚评估见表2。并进行Jaffe法每种模式与酶法的配对狋检验，分别见表3、4。
3 讨 论
Jaffe法是测定肌酐的经典方法，但受许多假性肌酐物质的干扰，结果不够准确[2，4]，而且苦味酸物质对仪器管道有腐蚀作用，影响生化仪的使用寿命，易产生交叉污染，但由于价格便宜，目前仍在广泛应用。肌酐酶偶联肌氨酸氧化酶法是解决肌酐测定中非特异性的根本途径，其方法还利用自动分析仪双试剂法，消除了内源性肌酸的干扰。由于其抗干扰能力强，线性范围宽，标本用量少，污染少，特异性、重复性好，灵敏度高[5-8]，所以用来作为本实验室的参考方法。本研究结果表明，在除外黄疸情况下，3种方法均有很好的相关性。单动力Jaffe法与酶法间存在16.246的恒定偏倚，双动力Jaffe法与酶法存在7.974的恒定的偏倚，酶法与单动力Jaffe法的预期偏倚随着浓度的增高而增高，但酶法与双动力Jaffe法的预期偏倚随着浓度的增高而降低，与预期偏倚的评估具有一致性。本研究结果与肖刚等[9]报道的结果存在一定差异，可能是由于所用的仪器和试剂，还有所选的比对范围不同所致。作者认为各实验室在换用不同仪器或试剂时，应分析参数设定的合理性，并建立各自的参考范围，同一医院使用多种检测方法，为了使不同方法的测定结果具有可比性，建议以酶法为基准，将其他方法的测定结果校正为与其一致[10]，应做10～18μmmol/L的补偿，而使得测定值接近真实值水平。经过对低肌酐住院患者的调查随访，本研究发现，对于患有长期消耗性疾病，如恶性肿瘤、肺结核、慢性萎缩性胃炎、严重创伤和烧伤、系统性红斑狼疮、慢性化脓性感染等患者的血清肌酐浓度异常降低。作者认为实验室对低肌酐测定方法学精密度和准确度的要求会随着临床对低肌酐检测意义的重视而提高。国内有文献报道低肌酐对疾病预后有影响，所以找出检测低肌酐的适宜方法具有重大的意义。徐静等[4]报道，与反相高压液相色谱法比较，酶法测定结果偏低，且当血清肌酐浓度小于或等于70μmol/L时不能准确测定。宋云霄等[11]报道，除个别低浓度标本外，酶法与同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LD-MS/MS)检测肌酐具有较好的一致性。由于条件所限，本实验未能将3种方法的测定结果与参考方法进行比对，所以对于低浓度肌酐的测定结果的准确性难以作出判断，其参考价值具有一定的局限性。总之，酶法的精密度、准确性、重复性及抗干扰能力较好，对自动分析仪的比色杯，管路影响较小，减少了交叉感染的发生，但因其价格昂贵，一定程度上限制了它的应用;Jaffe法成本低廉，操作简单，尤其是可应用双动力Jaffe法的实验室，仍可使测定值较为准确，适用于中小型实验室
参考文献
[1]杨昌国，许叶，张抗.线性评价和干扰试验中NCCLS评价方案的应用[J].临床检验杂志，1999，17(1)：47-48.
[2]张传洽.Jaffe速率法、电极法和酶法测定肌酐结果的比较[J].国际检验医学杂志，2006，27(3)，283-284.
[3]徐静，王清涛，徐国宾.几种人血清肌酐常规测定方法与反相高压液相色谱测定法的比对研究[J].中华检验医学杂志，2007，30(6)，683-684.
[4]陈珊珊.流式细胞术用于临床检验中的一些问题[J].中华检验医学杂志，2000，23(4)：197-198.
[5]石凌波，林龙顺.常见肌酐测定方法中存在的干扰[J].中华检验医学杂志，2001，24(2)：102-104.
[6]顾国宝，陈洁，李燕.全自动生化仪使用中项目间交叉污染的探讨[J].上海医学检验杂志，2002，17(3)：176-177.
[7]王卉妍.胆红素对酶法和碱性苦味酸速率法测定肌酐的影响[J].医疗装备，2009，22(12)：39-40.
[8]黄霞梅，伍惠玲，钟慧芝，等.肌氨酸氧化酶法和碱性苦味酸速率法检测血清肌酐结果比较和偏倚评估[J].重庆医学，2011，40(33)：3372-3374.
[9]肖刚，董杰明，朱远航.肌氨酸氧化酶法和苦味酸法测定血清肌酐的比较[J].实用医技杂志，2006，13{20｝，3553-3554.
[10]孙艳红，高玲，钟方毅，等.三种方法肌酐测定方法偏倚的比较[J].实用医学杂志，2004，20(3)：324-326.
[11]宋云霄，欧美贤，李水军，等.同位素稀释质谱法、酶法和碱性苦味酸法测定血清肌酐方法比较[J].检验医学，2013，28(8)：698-703.
(收稿日期：2013-12-05)
