清热明目颗粒的药效学实验研究

作者                  作者单位

李志金          河北省邢台市眼科医院

杨存爱          河北省邢台市眼科医院

1 材料与方法

1.1 药物 清热明目颗粒(10 g/袋，邢台眼科医院提供，批号：001128);复方乙酰水杨酸片(0.3 g/片，石家庄制药集团有限公司，批号：000102); 醋酸泼尼松片(5 mg/片，石家庄制药集团有限公司，批号：990401);左旋咪唑片(25 mg/片，洞庭制药厂，批号：990109)。

1.2 菌种及培养基 甲型溶血性链球菌(32209)、乙型溶血性链球菌(32210)、大肠埃希氏菌(44102)、普通变形杆菌(49101)、甲型副伤寒沙门氏菌(50001)、痢疾志贺氏菌(51252)、金黄色葡萄球菌[26111(5)]、流感杆菌(585294)，营养琼脂培养基(中国药品生物制品检定所);比浊管(中国细菌浊度标准，中国药品生物制品检定所)。

1.3 仪器 JA3003电子天平;大鼠足容积测量装置(自制);721型分光光度计(上海第三分析仪器厂)。

1.4 动物 昆明种小鼠(河北医科大学实验动物学部，合格证号：医动字第04056号);SD大鼠(河北医科大学实验动物学部提供，合格证号：医动字第04057号)。

1.5 方法

1.5.1 药物对二甲苯致小鼠耳朵肿胀的影响 [1] ：将小鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半;分为模型对照组、清热明目颗粒小剂量组(1.4 g/kg)、清热明目颗粒中剂量组(2.8 g/kg)、清热明目颗粒大剂量组(5.6 g/kg)及阳性药阿司匹林组(0.2 g/kg);给药组连续灌胃给药7 d，1次/d，剂量为0.2 ml/10 g，模型对照组给予等量蒸馏水;末次给药后1 h，分别在小鼠右耳两面涂以二甲苯0.05 ml/只，左耳作对照。15 min后处死动物，用直径6 mm的打孔器将双耳同部位切下，用JA3003电子天平称重，以左、右耳片重量之差为肿胀度，计算5组肿胀度。

1.5.2 对1%角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响[1,2]:将40只雄性大鼠随机分为5组，每组8只;分别为模型对照组、清热明目颗粒小剂量组(1.4 g/kg)、清热明目颗粒中剂量组(2.8 g/kg)、清热明目颗粒大剂量组(5.6 g/kg)及阳性药阿司匹林组(0.2 g/kg);给药组连续灌胃给药7 d，1次/d，剂量为1 ml/100 g，模型对照组给予等容量蒸馏水：末次给药后1 h，在每鼠后右肢踝部皮下注入1%角叉菜胶0.1 ml致炎，于致炎前、致炎后1、2、4、6 h测量右后足跖容积，计算肿胀度(致炎后容积与致炎前容积之差)。

1.5.3 对大鼠棉球肉芽肿增生的影响: 大鼠在乙醚浅麻醉无菌条件下作腹部切口，将20 mg的灭菌棉球植入两侧腹股沟皮下。术后随机分为5组，每组10只;分别为模型对照组，清热明目颗粒小剂量组(1.4 g/kg)、清热明目颗粒中剂量组(2.8 g/kg)、清热明目颗粒大剂量组(5.6 g/kg)及阳性药强的松组(40 mg/kg);给药组连续灌胃给药7 d，末次给药后1 h，将大鼠断头处死，剥离并取出棉球肉芽组织，于60℃烘箱内干燥12 h后称重，减去原棉球重量，即肉芽肿净重(并以mg/100 g表示)。

1.5.4 对小鼠免疫功能的影响:将50只小鼠随机分为5组，每组10只，分别为模型对照组、清热明目颗粒小剂量组(1.4 g/kg)、清热明目颗粒中剂量组(2.8 g/kg)、清热明目颗粒大剂量组(5.6 g/kg)及阳性药左旋咪唑组(50 mg/kg);给药组连续灌胃给药，剂量为0.2 ml/10 g，模型对照组给予等量蒸馏水;给药2 d后，5组小鼠均腹腔注射5∶3(V∶V)稀释的绵羊红细胞悬液0.2 ml/只，进行免疫。5组继续给药5 d，末次给药1 h后，分别摘眼球取血，分离血清，测定溶血素含量。

1.5.5 体外抑菌实验：①制备含药琼脂平板。将受试物按倍比稀释配制不同药物浓度的培养基，加热，调制各自所需pH值，10磅30 min灭菌，冷至45℃。倾注成无菌平板(平皿d=65 mm,10 ml/平皿)，最终使培养基中含受试物原液(0.91 g/ml)的稀释倍数分别为1∶2，1∶4……1∶1 024。同时做各自的空白对照培养基。②接种。取传至第三代的幼龄菌，分别用0.9%氯化钠溶液按标准比浊管校正浓度为108 cfu/ml的待检菌液，分别接种于不同倍比稀释的各自含药琼脂表面，同时接种平行点3点，使每点含2 μl菌液，每一接种点的液滴直径为5～8 mm。待接种点干燥后，翻转平板于36℃恒温培养箱培养20 h观察结果(同时做空白对照)。③判定标准。以不出现菌落的琼脂平板上的最低稀释受试物浓度为其最低抑菌浓度(MIC)。

1.6 统计学分析 计量资料以±s表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 药物对二甲苯致小鼠耳朵肿胀的影响 清热明目颗粒组(1.4 g/kg、2.8 g/kg、5.6 g/kg)及阿司匹林组(0.2 g/kg)小鼠耳肿胀度均较模型对照组轻(P<0.05或<0.01)。见表1。表1 清热明目颗粒对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响注：与模型对照组比较，*P<0.05，#P<0.01

2.2 对1%角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响 清热明目颗粒组(1.4 g/kg、2.8 g/kg、5.6 g/kg)大鼠，在致炎后1、2、4、6 h 4个时间点肿胀值均较模型对照组小(P<0.05或<0.01)，表明其角叉菜胶所致大鼠足肿胀由明显抑制作用。见表2。

2.3 对大鼠棉球肉芽肿增生的影响 清热明目颗粒组(1.4 g/kg、2.8 g/kg、5.6 g/kg)及强的松组大鼠肉芽肿干重均较模型对照组大鼠低(P<0.05或<0.01)，表明其灌胃给药均可抑制慢性肉芽肿的增生，对慢性增生性炎症有明显抑制作用。见表3。表2 清热明目颗粒对1%角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响注：与模型对照组比较，*P<0.05,#P<0.01表3 清热明目颗粒对大鼠棉球肉芽肿形成的影响注：与模型对照组比较，*P<0.05，#P<0.01

2.4 对小鼠免疫功能的影响 清热明目颗粒组(1.4 g/kg、2.8 g/kg、5.6 g/kg)及左旋咪唑组(50 mg/kg)小鼠血清溶血素含量均模型对照组高(P<0.01)，表明其灌胃给药可明显增强小鼠体液免疫功能。见表4。表4 对小鼠血清溶血素含量的影响注：与模型对照组比较，*P<0.01

2.5 体外抑菌实验 见表5。

表5 清热明目颗粒体外抑菌结果

菌株最低抑菌浓度(MIC,g/ml)药物稀释度甲型溶血性链球菌0.0071∶128乙型溶血性链球菌0.00351∶256大肠埃希菌0.0141∶64普通变形杆菌0.0071∶128甲型副伤寒沙门氏菌0.0281∶32痢疾志贺氏菌0.0071∶128流感杆菌0.0071∶128金黄色葡萄球菌0.0141∶64

3 讨论

葡萄膜炎病因复杂，多为自身免疫性疾病，由于体液免疫和细胞免疫功能的紊乱，使人体处于易感状态，常反复发作。为减少葡萄膜炎的反复发作，应整体辩证，调整机体免疫功能[2]。从实验结果来看，清热明目颗粒能明显提高实验动物血清溶血素含量，可明显增强实验动物体液免疫功能，进一步说明了清热明目颗粒提高机体免疫功能，减少葡萄膜炎发作的药理学基础。对于抑制肉芽肿的形成及抑制化学刺激所致的肿胀，表明清热明目颗粒具有抗炎作用;体外抑菌试验表明，清热明目颗粒对于多种细菌具有明显抑菌作用。以上实验为清热明目颗粒治疗以热邪犯目引起的葡萄膜炎、视网膜血管炎、急慢性结膜炎和各类角膜炎提供了药理学依据。

本试验证明，清热明目颗粒(1.4 g/kg、2.8 g/kg、5.6 g/kg)灌胃给药对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显抑制作用;可明显抑制1%角叉菜胶致大鼠足肿胀及棉球肉芽肿形成;可提高小鼠血清溶血素含量，提高小鼠体液免疫功能;对甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、大肠埃希菌、普通变形杆菌、甲型副伤寒沙门氏菌、痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、流感杆菌有明显抑菌作用。

中药复方制剂作用的物质基础研究是一个复杂的系统工程。其主要功效和配伍理理论是中药复方制剂研究的前提，药效学研究为中药复方制剂的临床应用提供依据。本实验选用恰当的药理模型和严谨、缜密的科研设计，探讨了清热明目颗粒药理作用的药质基础，为临床用药提供依据。

【参考文献】

1 徐淑云,汴如濂,陈修主编.药理实验方法学.第3版.北京：人民卫生出版社，2002.911,934.

2 罗云坚，刘茂才主编.眼科医院耳鼻喉科专病中医临床诊治.第1版.北京：人民卫生出版社，2002.38.