奥沙利铂新剂型与新制剂研究

作者                  作者单位

刘金        江苏大学药学院， 江苏 镇江 212013

余江南      江苏大学药学院， 江苏 镇江 212013

徐希明      江苏大学药学院， 江苏 镇江 212013

奥沙利铂有其独特优点的同时，也存在铂类药物的一般毒性反应，如出现特异的心脏毒性等，具有明显的周围神经性毒性等，为此，通过制剂新技术降低其不良反应，是近年来奥沙利铂新剂型和新制剂研发的重点和方向。本文对该类药物的新剂型及其制剂研究作一综述。

1 脂质体

脂质体(Liposomes)具有磷脂双分子层结构，可包封脂溶性和水溶性药物，延缓药物释放，降低药物的不良反应，提高药物的靶向性，减少用药剂量[3-4]。日本学者Suzuki等[5]以二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)和胆固醇(CH)摩尔质量比为2∶1的组成为脂质材料，氯仿和乙醚(1∶1的体积比)为有机溶剂，9%奥沙利铂蔗糖溶液为水合介质，采用逆相蒸发法将奥沙利铂包封于脂质体中，药时曲线图显示30 h内奥沙利铂脂质体的药时曲线下面积(AUC)明显高于奥沙利铂溶液组;体内分布研究结果显示，6 h后可见脂质体组的药物在肝、肾、脾、肺中的药物浓度均高于溶液组，且主要集中于脾、肝中。说明脂质体组能增强药物体内各脏器中的蓄积，但是由于网状内皮系统的吞噬作用，靶向分布不明显。

为使脂质体专一作用于靶细胞，提高稳定性，在脂质体表面进行修饰可以达到理想的效果。近年来，新型脂质体不断涌现，如长循环脂质体，阳离子脂质体，温敏型脂质体，pH敏感脂质体，磁靶向脂质体等。

1.1 长循环脂质体

长循环脂质体又称立体稳定脂质体、隐形脂质体(stealth liposome，SL)，其表面用亲水聚合物修饰，形成一种立体屏障,防止生物分子、细胞与脂质体发生作用,使脂质体在体内环境中稳定[6-7]。制备长循环脂质体主要采用在磷脂膜中掺入聚乙二醇(PEG)的方法，由于PEG链在脂质体表面形成了位阻，PEG的极性基团提高了脂质体外面的亲水性，进而影响了巨噬细胞对脂质体的识别和吞噬。大多数实体瘤的血管生长迅速，外膜细胞缺乏，基底膜变形，导致肿瘤血管渗透性增加，进而产生增强穿透性和延长保留时间的效应(enhanced permeability and retention effect,EPR 效应)，即大分子药物、药物载体如脂质体等可以穿透肿瘤缺损的血管内皮细胞进入肿瘤组织，且因清除障碍而高浓度、长时间蓄积在肿瘤组织中。长循环脂质体可以在循环系统中长期滞留而不被网状内皮系统捕获，因此可借助EPR 效应富集到肿瘤组织中，最终实现对肿瘤治疗的被动靶向。

在长循环脂质体的表面用特异性配体(如叶酸、转铁蛋白或单克隆抗体等)进行修饰可进一步提高靶向性。转铁蛋白(transferrin, Tf) 和转铁蛋白受体(transferrin receptor, TfR)介导的内吞作用是生物体细胞最具特点的转运过程之一。由于恶性肿瘤细胞过度表达TfR，造成肿瘤部位Tf明显增加，在脂质体表面进行转铁蛋白的修饰，利用TfTfR转运途径,可明显增强抗癌药物的选择性,减少毒性,从而增强疗效[5,8-10]。Suzuki等[5]将二硬脂酰磷脂酰乙醇胺聚乙二醇2000(DSPEPEG2000)和DSPC,CH一起混合后按照逆相蒸发法制备，得到奥沙利铂长循环脂质体(PEG脂质体);在PEG脂质体的基础上，又将转铁蛋白与其偶联，制备成转铁蛋白偶联长循环脂质体(TfPEG脂质体)，并且比较了奥沙利铂溶液、普通脂质体、PEG脂质体和TfPEG脂质体的体内药动学和药效学。实验表明，溶液组中药物很快从血循环中清除，其次是普通脂质体组，而PEG脂质体组(包括TfPEG脂质体)却明显延长了药物的体内循环时间，增加了药物的血药浓度。体内分布结果显示溶液组中肝、脾、肾、肺的药物浓度非常低，三种脂质体在各脏器中的药物浓度均比溶液组高，说明奥沙利铂的脂质体制剂均较其普通制剂的体内吸收有显著增加;PEG脂质体和TfPEG脂质体在肝和脾中的药物浓度比普通脂质体均显著降低，说明PEG脂质体和TfPEG脂质体能相应的减少网状内皮系统对脂质体的吸收，改变了药物的体内分布情况，使得更多的药物参与体内循环和全身分布。Colon26的细胞毒性试验表明，溶液组、普通脂质体、PEG脂质体和TfPEG脂质体ED50值分别为2,60,18,8 μg/ml，对AsPC1细胞的ED50值分别为5,45,75,8 μg/ml。从抑瘤效果看，PEG脂质体与溶液组治疗效果相似，但TfPEG脂质体与PEG脂质体相比差异有统计学意义。PEG脂质体虽然能通过EPR效应到达肿瘤组织部位，但是不能有效的渗入细胞质，而TfPEG脂质体与Tf受体结合，通过内吞作用进入细胞质，取得更好的肿瘤治疗效果。

1.2 阳离子脂质体

阳离子脂质体又称阳性脂质体、正电荷脂质体，是一种本身带有正电荷的脂质体。它可作为荷负电物质的传递载体，特别适用于蛋白质、多肽和寡核苷酸类物质、脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)等[11-13]。Amr等[14]和Lila等[15]以O,O′-二四癸酰-N-(α-三乙酰胺)二乙醇胺氯化物(DC614)为阳离子脂质材料，氢化磷脂∶胆固醇∶DC614∶mPEG2000为 2∶1∶0.2∶0.2的比例混合，以氯仿∶乙醚(1∶2)为有机相，5%葡萄糖奥沙利铂溶液为水相，逆相蒸发制得奥沙利铂阳离子长循环脂质体。与奥沙利铂中性长循环脂质体和奥沙利铂溶液组比较，注射给药后6,24,48 h溶液组的肿瘤组织中药物浓度逐渐递减，中性长循环脂质体组药物浓度高于溶液组，24 h后浓度比6 h提高近2倍，48 h后浓度有所下降，但仍比6 h略高;阳离子长循环脂质体组6 h的药物浓度已是中性长循环脂质体组的3倍多，且一直处于上升趋势，阳离子长循环脂质体组与溶液组相比差异有统计学意义(P<0.01)，与中性长循环脂质体组相比差异有统计学意义(P<0.05)。由于阳离子脂质体能选择性的集中于肿瘤血管的上皮细胞处，其表面的阳离子能与细胞质膜表面的负电荷产生静电作用，因而有更多的脂质体能达到肿瘤细胞，进而达到双重靶向的目的，提高药物疗效以及患者的生活质量。

1.3 温敏型脂质体

温敏型脂质体作为一种新型脂质体，能在特定的肿瘤部位释放药物，成为靶向研究的又一热点。温敏型脂质体的磷脂具有温度敏感性，当温度达到相变温度时，磷脂从胶晶态过渡到液晶态，膜的通透性增加，此时药物迅速释放，低于相变温度时则释放减慢。肿瘤热疗是将肿瘤部位加热到稍高于体温(通常是41℃～43℃)，利用肿瘤细胞对热的敏感性抑制或杀死肿瘤细胞。将温敏型脂质体与肿瘤热疗相结合，可以将药物集中于肿瘤部位，更好地发挥靶向作用[16-17]。杨美燕[18]报道选用DPPC为脂质材料，采用薄膜分散法或逆相蒸发法将奥沙利铂制成长循环热敏脂质体，其包封率可达90%以上，粒径小于200 nm，体外释放试验表明，在37℃条件下，药物释放较少，而在41℃的条件下释放绝大部分药物。SD大鼠的药动学结果表明，奥沙利铂长循环热敏脂质体在体内符合三室模型，其t1/2α,t1/2β,K10和AUC分别为溶液组的5.2,3.2,27和16.9倍。药效学考察结果表明，长循环热敏脂质体的抑瘤率高达77.83%。

2 微 球

微球(Microspheres)指药物与高分子材料制成的基质骨架的球形或类球形实体。将药物制成微球，可以提高药物的稳定性，使液态药物固态化，便于药物的储存，也可以将药物制备成缓控释制剂，使药物浓集于靶区，提高疗效，降低药物的不良反应[19-20]。

奥沙利铂的周围神经毒性限制其最高用药剂量，影响到患者的生存质量，为减小其不良反应， Lagarce等[21]考虑到利用高分子材料聚乳酸-乙醇酸共聚物(Polylacticcoglycolic acid，PLGA)制备的微球能直接注射于肿瘤部位附近，通过调节高分子材料的用量和载药量来控制药物的释放。以PLGA高分子材料RG503,RG502(相对分子质量分别约为40 000和10 000)和PLA低聚物(相对分子质量约为2 000)为材料，乙酸乙酯为溶剂，采用溶剂萃取工艺制成奥沙利铂微球。其包封率为75%～90%，平均粒径在(60±25)μm，不同处方的体外释放曲线显示，释放药物时间长短可以通过调节PLGA中的低相对分子质量材料来控制。

3 磷脂复合物

磷脂复合物(Phospholipid complex)是由意大利学者Bombardelli等在研究脂质体的时候偶然发现的，磷脂与药物形成复合物后，克服了原型药物自身的弱点，增强了药物的药理作用和疗效，延长药物作用时间，降低不良反应，改变药物的溶解性能。复合物增溶主要是由于药物与磷脂的极性基团部分发生了较强的相互作用，抑制了分子中单链的自由转动，而磷脂的两个长脂肪酸链不参与复合反应，可自由移动，包裹了磷脂的极性部分形成一个亲脂性的表面，使复合物表现出较强的脂溶性[22-23]。

奥沙利铂药物的水溶性较顺铂有所改善，在水和甲醇中微溶，氯仿或乙醚中几乎不溶，仍属于油水均难溶性药物，其制剂开发受到很大影响，将其制备成磷脂复合物后，改善其溶解性能，利于其他新剂型的开发。刘伟等[24]采用溶剂挥发法制备磷脂复合物，当奥沙利铂与磷脂的质量比为1∶2.5以上，复合率均为100%时，药物在水中的溶解度增大约2倍，正辛醇-水系统中的油相分配量提高了约6倍，差热分析结果表明，形成了磷脂复合物这一新的物相，奥沙利铂药物在复合物中以无定形或亚稳定型存在。

4 纳米混悬剂

纳米混悬剂(Nanosuspensions)是一种纯药物纳米颗粒的亚微细粒胶态分散体,以表面活性剂为助悬剂。纳米混悬剂具有许多优点[25-26]:增加了药物的溶出速率，增强药物的饱和溶解度，可改变药物的晶型，增加药物中无定形态晶型的比例，提高药物的溶解度，通过对粒子晶型表面修饰，达到定位释放的目的;纳米混悬剂的药物粒子对体内黏膜组织具有黏附性，延长了药物在体内的滞留时间。

刘伟等[24]先将奥沙利铂制成磷脂复合物，再向其中加入等渗剂、抗氧剂、缓冲剂等作为水相，采用逆相蒸发法将其制成奥沙利铂纳米混悬液。纳米混悬剂粒径为(126±17) nm，载药量提高至10 mg/ml，由于絮凝剂的加入，奥沙利铂纳米混悬剂亦表现出良好的稳定性，溶血性实验表明无血管刺激性。

5 脂肪乳剂

脂肪乳剂(lipid emulsion，LE)是根据乳糜微粒的组成、结构与特点而设计,主要是三酰甘油(triglyceride, TG)和磷脂组成的乳剂颗粒溶液。脂肪乳具有许多独特的优点[27-28]:乳剂对药物的包裹作用可以减小静脉给药对血管的刺激性;作为油相的精制植物油和卵磷脂对人体无毒,安全性好;可以利用现有非胃肠道营养用脂肪乳的生产线进行工业化大生产;能够耐受高压蒸汽灭菌;载药量较脂质体高。刘伟等[24]分别将奥沙利铂原料药和奥沙利铂磷脂复合物制备成脂肪乳剂，以药物稳定性、载药量和包封率为评价指标，对处方与工艺的考察结果表明，用奥沙利铂原料药制成的脂肪乳剂药物在油相中的保留很小，包封率不足5%，而其磷脂复合物制成脂肪乳剂后，包封率最高达到22%，但仍没有达到脂肪乳剂的要求，可能与药物在水中有一定溶解度有关。

6 展 望

奥沙利铂作为一种新型抗肿瘤药物，已在临床应用中显现出其独特的优点。为进一步降低其不良反应，增强药物的靶向性，提高生物利用度，近年来，国内外有关奥沙利铂新剂型与新制剂研究十分活跃。虽然奥沙利铂脂质体处于临床研究阶段，其他新剂型的研究也处于实验室研究阶段，但是，随着新剂型与新制剂研究开发的不断深入，相信奥沙利铂制剂新品将陆续面市，用于临床肿瘤患者的治疗。

【参考文献】

[1] Trédaniel J, Becht C，Bekradda M，et al.An open phase II trial of gemcitabine, oxaliplatin and vinorelbine combination as firstline therapy in advanced nonsmall cell lung cancer patients[J].Lung Cancer, 2009, 63(2): 259-263.

[2] Gunnlaugsson A, Anderson H, Fernebro E, et al.Multicentre phase II trial of capecitabine and oxaliplatin in combination with radiotherapy for unresectable colorectal cancer: The CORGIL study[J].Eur J Cancer, 2009, 45(5): 807-813.

[3] Chang CC, Liu DZ, Lin SY, et al.Liposome encapsulation reduces cantharidin toxicity[J].Food Chem Toxicol, 2008, 46(9): 3116-3121.

[4] Wenzel J, Zeisig R, Iduna .Fichtner Inhibition of breast cancer metastasis by dual liposomes to disturb complex formation[J].Int J Pharm, 2009, 370(1/2): 121-128.

[5] Suzuki R, Takizawa T, KuwataY, et al.Effective antitumor activity of oxaliplatin encapsulated in transferrinPEGliposome[J].Int J Pharm, 2008, 346(1/2): 143-150.

[6] Furuhata M, Izumisawa T, Kawakami H, et al.DecaargininePEGliposome enhanced transfection efficiency and function of arginine length and PEG[J].Int J Pharm, 2009, 371(1/2): 40-46.

[7] Ishida T, Shiraga E, Kiwada H, et al.Synergistic antitumor activity of metronomic dosing of cyclophosphamide in combination with doxorubicincontaining PEGylated liposomes in a murine solid tumor model[J].J Controlled Release, 2009, 134(3): 194-200.

[8] Ito Y, Kimura Y, Shimahara T, et al.Disposition of TFPEGliposomeBSH in tumorbearing mice[J].Appl Radiat Isot，2009, 67(7/8): 109-110.

[9] Kobayashi T, Ishida T,Okada Y, et al.Effect of transferrin receptor targeted liposomal doxorubicin in Pglycoproteinmediated drug resistant tumor cells[J].Int J Pharm, 2007, 329(1/2) : 94-102.

[10] 江里口正纯, 柳卫宏宣, 丸山一雄,等.含有奥沙利铂的脂质体制剂[P].CN:1628638A, 2005-6-22.

[11] Su EH, Hyungu K, Ga YS, et al.Novel cationic cholesterol derivativebased liposomes for serumenhanced delivery of siRNA[J].Int J Pharm, 2008, 353(1/2): 260-269.

[12] Maitani Y, Igarashi S, Sato M, et al.Cationic liposome(DC-Chol/DOPE=1∶2) and a modified ethanol injection method to prepare liposomes, increased gene expression[J].Int J Pharm, 2007, 342(1/2): 33-39.

[13] Zhang SB，Zhao BD, Jiang HM, et al.Cationic lipids and polymers mediated vectors for delivery of siRNA[J].J Controlled Release, 2007, 123(1): 1-10 .

[14] Amr S, Lila AA, Kizuki S, et al.Oxaliplatin encapsulated in PEGcoated cationic liposomes induces significant tumor growth suppression via a dualtargeting approach in a murine solid tumor model[J].J Controlled Release, 2009, 137(1): 8-14.

[15] Lila AA, Suzuki T, Doi Y,et al.Oxaliplatin targeting to angiogenic vessels by PEGylated cationic liposomes suppresses the angiogenesis in a dorsal air sac mouse model[J].J Controlled Release, 2009, 134(1): 18-25.

[16] Dromi S, Frenkel V, Luk A, et al.Pulsedhigh intensity focused ultrasound and low temperature sensitive liposomes for enhanced targeted drug delivery and antitumor effect[J].Clin Cancer Res，2007, 13(9): 2722-2727.

[17] Hossann M, WiggenhornM, Schwerdt A, et al.In vitro stability and content release properties of phosphatidylglyceroglycerol containing thermosensitive liposomes[J].Biochim Biophys Acta, 2007, 1768(10): 2491-2499.

[18] 杨美燕.奥沙利铂长循环热敏脂质体研究[D].北京: 军事医学科学院, 2007.

[19] Puapermpoonsiri A, Spencer J，Vanderwalle CF, et al.Walle freezedried formulation of bacteriophage encapsulated in biodegradable microspheres[J].Eur J Pharm Biopharm, 2009, 72(1): 26-33.

[20] Ratajczak M, Estebe J, Dollo G, et al.Epidural, intrathecal and plasma pharmacokinetic study of epidural ropivacaine in PLGAmicrospheres in sheep model[J].Eur J Pharm Biopharm, 2009, 72(1): 54-61.

[21] Lagarce F, Cruaud O, Deuschel C.Oxaliplatin loaded PLAGA microspheres: design of specific release profiles[J].Int J Pharm, 2002, 242(1-2): 243-246.

[22] Lu Y, Zhang Y, Yang ZY, et al.Formulation of an intravenous emulsion loaded with a clarithromycinphospholipid complex and its pharmacokinetics in rats[J].Int J Pharm, 2009, 366(1/2): 160-169.

[23] Falasca K, Ucciferri C, Mancino P, et al.Treatment with silybinvitamin Ephospholipid complex in patients with hepatitis C infection[J].J Med Virol, 2008, 80(11): 1900-1906.

[24] 刘 伟.奥沙利铂磷脂复合物的制备及其在静脉给药系统中的应用研究[D].沈阳: 沈阳药科大学, 2006.

[25] Sagar MA, Pradeep RV.Diclofenacloaded biopolymeric nanosuspensions for ophthalmic application[J].Nanomed Nanotechnol Biol Med, 2009, 5(1):90-95.

[26] Francesco L, Chiara S, Guido E, et al.Diclofenac nanosuspensions: Influence of preparation procedure and crystal form on drug dissolution behaviour[J].Int J Pharm, 2009, 373(1/2): 124-132.

[27] Chen ML, Chi HF, Liu SL, et al.Effect of olive oILbased emulsion on human lymphocyte and neutrophil death[J].J Parenter Enteral Nutr, 2008, 32(1): 81-87.

[28] Gura KM, Lee S, Valim C, et al.Safety and efficacy of a fishoILbased fat emulsion in the treatment of parenteral nutritionassociated liver disease[J] .Pediatrics, 2008, 121(3) : 678-686.