血必净注射液对急性有机磷中毒性心血管损伤的干预研究

　　作者：王颖,荣廷,邹艳果,李锦绣 作者单位：山东大学第二医院急诊科， 济南 250033

　　【摘要】 目的 观察血必净注射液对急性有机磷中毒性心血管损伤患者外周血中性粒细胞核转录因子²kappa B(NF²κB)的活化程度及损伤预后的影响。方法 将70例急性有机磷中毒合并心血管损伤患者随机分为阳性对照组(35例)和实验组(35例)，用免疫酶组织化学法检测其外周血中性粒细胞NF²κB的活化程度，并观察患者血清心肌酶活性值的变化。结果 ①实验组死亡率低于对照组(P<0.05);②对照组NF²κB活化程度高于实验组(P<0.05);③血必净注射液呈剂量依赖性地抑制中性粒细胞NF²κB的活性(P<0.05);④实验组血清心肌酶活性值恢复程度优于对照组，且与血必净注射液用量呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 早期联合应用血必净注射液和常规治疗药物，可改善急性有机磷中毒并发心血管损伤患者的预后，提高救治成功率。

　　【关键词】 血必净注射液,有机磷中毒,心血管系统,损伤,免疫组织化学,核转录因子²κB

　　To observe the effects of Xuebijing injection on nuclear factor² kappa B activation of PMN and the prognosis of cardiovascular injury. Methods 70 cases of acute organophosphate poisoning complicated with cardiovascular injury were divided into the positive control group (35 cases)and the test group(35 cases) at random. The enzyme labeled immunohistochemical method was used to determine the NF²κB activation degree. Changes of myocardial enzyme were also observed. Results ① Death rate of the test group was lower than that of the control group(P<0.05). ② The NF²κB activation degree of the control group was higher than that of the test group(P<0.05).　③ Xuebijing injection suppressed the activation of NF²κB on dosage(P<0.05). ④ The degree of myocardial enzyme recovery of the test group was superior to that of the control group and was dose²dependent on Xuebijing injection(P<0.05). Conclusion Xuebijing injection in combination with routine therapies has obvious efficiency on increasing the success rate of acute organophosphorus pesticide poisoning patients complicated with cardiovascular injury.

　　Key words: Xuebijing Injection,Organophosphate poisoning,Cardiovascular systerm,Injuries,Immunohistochemistry,Nuclear factor²kappa B

　　近年，急性有机磷农药中毒并发心血管损伤的病死率随器官功能损伤程度的增加而升高，心脏损害、心律失常、心功能不全、微循环障碍等对整个病情影响极大，已成为有机磷中毒患者死亡的主要原因之一[1]。本研究应用血必净注射液联合常规治疗药物对急性有机磷中毒并发心血管损伤患者进行治并心血管损伤患者，按入院顺序随机分为常规治疗组(阳性对照组)和血必净注射液治疗组(实验组)。实验组又根据血必净注射液的治疗剂量分成实验亚组Ⅰ(100?mL组)和实验亚组Ⅱ(150?mL组)，另设健康体检者为阴性对照组。阳性对照组共35例，其中男16例，女19例，平均年龄(32.12±10.51)岁。中毒类型：对硫磷8例，敌敌畏9例，敌百虫7例，乐果5例，氧化乐果6例。中毒程度：中度13例，重度22例。实验组共35例，其中男15例，女20例，平均年龄(32.43±9.81)岁。中毒类型：对硫磷7例，敌敌畏8例，敌百虫8例，乐果7例，氧化乐果5例。中毒程度：中度14例，重度21例。其中实验亚组Ⅰ17例，男7例，女10例，平均年龄(42.64±16.73)岁;实验亚组Ⅱ18例，男8例，女10例，平均年龄(41.12±15.36)岁。阴性对照组：共20例，其中男9例，女11例，平均年龄(30.65±11.23)岁。阳性对照组和实验组患者在年龄、性别、中毒程度、中毒种类构成比、中毒后入院时间方面无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。

　　1.3 方法

　　1.3.1 治疗方法 患者入院后均给予清水洗胃, 给予解毒剂(阿托品、氯解磷定)、补液、利尿等常规治疗。实验组在常规治疗的基础上加用血必净注射液，其中①实验亚组Ⅰ：血必净注射液100?mL+生理盐水注射液250?mL静脉滴注，每日1次，连用7日;②实验亚组Ⅱ：血必净注射液150?mL+生理盐水注射液250?mL静脉滴注，每日1次，连用7日。阴性对照组即健康体检者，未用药。

　　1.3.2 免疫酶组织化学法检测NF²κB活性 所有患者分别于入院即刻、第3天、第5天、第7天抽取外周静脉血，每人每次采血4?mL。加入肝素抗凝后，置于-4?℃冰箱内保存备检。将抽取的外周血离心(1?500?r/min)、取沉淀再加入红细胞裂解液、离心(1?500?r/min)分离出中性粒细胞。实验组和对照组均给予常规免疫组化染色，阴性对照省去一抗，仅给予PBS液作为对照。采用ABC法染色程序(具体步骤参照试剂盒说明书)，每张切片任选取10个无重复视野，显微镜400倍下检测，细胞胞浆中有棕褐色颗粒，而细胞核呈白色或弱均匀淡褐色为阴性细胞，如细胞核中出现棕褐色颗粒则为阳性细胞，计数阳性细胞百分率(%)，并用图像分析仪半定量分析NF²κB的活化程度。其中鼠抗人NF²κB单克隆抗体检测试剂盒和免疫组化S²P试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司，酶作用底物DAB(3，3一四盐酸二氨基联苯胺)购于武汉博士德公司，小牛血清购于北京元亨生物制品有限公司。

　　1.3.3 心肌酶活性值的检测 以血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK²MB)、门冬氨酸转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、α²羟丁酸脱氢酶(HBDH)活性值为心血管损伤的观察指标。血清心肌酶活性值检测均用日立全自动生化分析装置7170S，结果以U/L表示。全部患者于入院后即刻和治疗后第7天抽取静脉血后立即测定。

　　1.4 统计学处理 每个参数均以±s表示。多个样本均数间的两两比较，均先进行方差齐性检验，方差齐时进行方差分析，方差不齐时采用秩和检验。两个样本均数的比较用t检验，两个样本率的比较用χ2检验。所有数据采用SPSS13.0统计学软件进行分析处理，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 实验组和阳性对照组患者死亡率比较 见表1。实验组死亡率低于阳性对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。

　　2.2 各组存活病例外周血中性粒细胞NF²κB检测结果 见表2，表3。与阴性对照组相比，阳性对照组和实验组在中毒后入院即刻NF²κB核转移即增加(P均<0.05)，于第3天时达到高峰，但实验组在第3天时 NF²κB核转移即低于阳性对照组(P<0.05)。与实验亚组Ⅰ相比，实验亚组Ⅱ从入院后第3天NF²κB核转移降低明显,差异有统计学意义

　　3 讨 论

　　急性有机磷农药中毒合并心血管系统损伤的患者主要表现为不同程度的胸闷、胸痛、心慌等症状，心脏损伤标记物如心肌酶也常呈现异常改变，可作为观察心血管系统损伤预后的观察指标之一[3]。机体中毒后，毒性物质是一种强刺激因子，可触发大量炎性介质及细胞因子的产生与释放，从而产生全身炎症“瀑布样”反应，无论有无合并细菌感染均可出现全身性炎症反应，进而发生心血管损伤甚至多器官功能损伤[4]。NF²κB是复杂炎症反应放大环路的重要转录因子，不适当或过度增强NF²κB的活性均可引起许多与炎症相关的疾病。Nakamori等[5]发现，与健康志愿者比较，全身炎性反应综合征患者白细胞核内NF²κB活性显著增高。Paterson等[6]比较了完全符合全身炎性反应综合征标准的患者与健康志愿者0、24、48和72?h NF²κB的活性，发现全身炎性反应综合征患者外周血中性粒细胞NF²κB的活性显著高于健康志愿者。提示NF²κB活性可作为急性有机磷中毒合并心血管系统损伤的实验室观察指标，并可判断患者的预后。

　　中药针剂血必净注射液是以古方血府逐瘀汤为基础而研制的国家二类新药。主要成分为赤芍、川芎、丹参、红花、当归等活血化瘀药物。其中丹参具有选择性抑制血小板合成与释放血栓素A2等缩血管物质的能力，具有扩张血管、改善微循环、抑制血小板凝聚的作用。此外，它还能保护血管内皮细胞，在常压下增加组织耐缺氧能力。川芎所含的川芎嗪似为一种“钙离子拮抗剂”，可直接降低红细胞聚集性，增加其多形性，降低血小板凝聚性和其表面粘附性，抑制血栓形成。现代药理学研究证明，血必净注射液具有强效拮抗由单核/巨噬细胞产生内源性炎性递质失控性释放的作用，能够减少纤维蛋白原含量，提高超氧化物歧化酶的活性，调节过高或过低的免疫反应[7]。临床常用于治疗各种原因(创伤、烧伤、大手术、各种感染、急性胰腺炎、肿瘤、缺血再灌注损伤、中毒等)引起的器官功能损伤。血必净注射液在前期的临床试验中已被证实确有提高急性有机磷中毒救治成功率，加快中毒后患者心血管功能损伤恢复的功效。本研究结果亦显示，与对照组相比，实验组心肌酶的恢复优于对照组(P<0.05)，其NF²κB活性程度降低(P<0.05)，且呈剂量依赖性抑制NF²κB的活性(P<0.05)。由此推测，血必净注射液抑制NF²κB的激活通路可能是其提高急性有机磷中毒合并心血管损伤救治成功率、改善损伤预后的分子生物学机制之一，而且大剂量的血必净注射液对NF²κB活性的抑制程度较高，可明显改善心血管损伤的预后,值得临床推广应用。

　　【参考文献】

　　[1] 许荣廷.中毒性心血管损伤与救治策略[J].中华实用医药杂志，2002，2(10)：30.

　　[2] 陈灏珠.实用内科学[M].第11版，北京：人民卫生出版社，2003：759²761.

　　[3] 刘秋慧，李福琴.急性有机磷中毒致心肌损伤临床分析[J].医药论坛杂志，2005，26(14)：22²23.

　　[4] 乔万海.危重病患者细胞因子和氧代谢指标的动态变化[J].中国危重病急救医学，2004，16(8)：493.

　　[5] Nakamori Y， Koh T， Ogura H， et al. Enhanced expression of intranuclear NF²kappa B in primed polymorpho nuclear leukocytes in systemic inflammatory response syndrome patients[J]. Trauma， 2003， 54(2)：253²260.

　　[6] Paterson R L， Galley H F， Webster N R. The effect of N²acetylcysteine on nuclear factor²kappa B activation， interleukin²6， interleukin²8， and intercellular adhesion molecule²1 expression in patients with sepsis[J]. Crit Care Med， 2003， 31(11)：2574²2578.

　　[7] 张淑芬.血必净注射液的临床应用概况[J].现代中西医结合杂志，2008，17(15)：2418²2419.