影响支原体液体培养阳性结果的因素

　　　　作者：农建宏，梁莉，梁荣伟，苏国生 作者单位：百色市妇幼保健院，百色 533000

　　【摘要】 目的：了解各种影响支原体液体培养阳性结果判断的因素,提高泌尿生殖道支原体感染实验室诊断的准确性。方法：对疑为支原体阳性结果的液体培养基再转种和进一步鉴定。结果：从375例疑为支原体阳性结果的液体培养基中分离出34株大肠埃希菌，分离出金黄色葡萄球菌9株，分离出表皮葡萄球菌21株，分离出念珠菌31株。结论：对支原体液体培养结果要详细分析,把澄清桃红色的和浑浊桃红色分开，浑浊桃红色的再进一步鉴定，才能为临床提供准确可靠的检验结果。

　　【关键词】 泌尿生殖道 支原体 液体培养

　　Mycoplasma Positive Impact on the Results of Liquid Culture Factors

　　(Maternal and Child Health Hospital in Baise City,Baise 533000,China)

　　【ABSTRACT】 Objective:Understanding of the impact of mycoplasma liquid culture positive results to determine the factors,Improve the urogenital mycoplasma infection in laboratory diagnosis accuracy.Methods:Mycoplasma positive results on the suspected liquid medium and further sub-species identification.Results:From 375 cases of suspected positive results of mycoplasma liquid medium to isolate E.coli 34,Staphylococcus aureus isolated from 9,Isolated from Staphylococcus epidermidis 21,Candida isolated 31.Conclusions:Mycoplasma liquid culture of a detailed analysis of results.To clarify and muddy pink pink separate,Muddy pink further identification,Can provide accurate and reliable clinical test results.

　　【KEY WORDS】Mycoplasma;Liquid culture

　　支原体(mycroplasma)是迄今所知能够自我复制并独立存活的最小原核细胞型微生物，呈高度多形性，种类繁多。支原体造成的危害非常广泛，其影响可涉及到人、动物、植物及细胞培养等。支原体最初从动物传染病的病原体中发现，自1937年从女性巴氏腺炎的分泌物中分离出第一株人系支原体，迄今为止，从人体分离出来的支原体已有20多种[1]。随着国产试剂商品化迅速发展，越来越多医院临床上采用液体培养法来检测和鉴定支原体。以颜色在培养后变红判断支原体生长与否，这种判断存在很多缺陷。为了解影响支原体液体培养阳性结果的因素。作者对从375例疑为支原体阳性结果的液体培养进行进一步分离鉴定。现将结果报告如下。

　　1 资料和方法

　　1.1 临床资料

　　375例标本来源 全部来自2007年1月～12月份到我院生殖门诊和妇科门诊就诊的疑为非淋菌性尿道炎(NGH)患者，并且已经进行支原体培养疑为支原体阳性的标本，其中男性64例，女性311例，年龄17岁～65岁。平均年龄37.5岁，临床表现大多表现为尿道或阴道瘙痒、灼痛小腹坠胀、尿道发红及尿频等不适症状，少数患者可无症状。

　　1.2 采集方法

　　男性先用消毒棉签将尿道口分泌物擦干净，患者自行挤压阴茎数次后，用无菌棉拭子轻轻伸入尿道(2～2.5)cm，旋转360度，再停留约15秒获得细胞材料后取出立即送检;女性：清除阴道及宫颈口分泌物，无菌绵拭子插入宫颈管内(1～2)cm，轻轻旋转后取出，取样拭子不可碰阴道壁，标本取出后立即送检。所有标本均于采样后半小时内接种。

　　1.3 试剂盒与培养基

　　由珠海浪峰生物技术有限公司提供。该试剂盒可同时检测解脲支原体(UU)和人型支原体(MH)，并进行药物敏感试验，是培养鉴定和药敏一体化试剂盒。血培养平板，伊红美兰培养平板，沙氏培养平板由杭州天和微生物试剂有限公司提供半成品，自制成培养平板。

　　1.4方法

　　操作严格按照试剂盒说明书，将绵拭子插入液体培养基中，充分振洗并在瓶内壁挤干后弃之形成样本液，然后再接种到检测板小孔中。每孔加两滴无菌石蜡防止水分蒸发，剩下的液体培养基也一同放入35℃～37℃的培养箱培养24小时或48小时观察颜色变化。

　　1.5 结果判断

　　由于Uu分解尿素，Mh分解精氨酸，生成碱性物质使液体培养基PH上升，使酚红指示剂显红色或橙色的，如果培养瓶培养基变桃红色而且清亮透明，定量药敏版计数孔变红表示标本中支原体≥104 CFU;可以报告为支原体阳性。如果定量药敏版计数孔变红而培养瓶培养基浑浊的变桃红色，则继续接种到血培养平板，伊红美兰培养平板，沙氏培养平板进行下一步的分离培养和鉴定。仍为黄色为阴性可以报告结果。

　　2 结果

　　从375例疑为支原体阳性结果浑浊的液体培养基中分离出34株大肠埃希菌，占9.1%(34/375);分离出金黄色葡萄球菌9株，占2.4%(9/375);分离出表皮葡萄球菌21例，占5.6%(21/375);分离出念珠菌31株，占8.3%(31/375)。详细见表1。

　　表1 浑浊液体培养基鉴定结果(略)

　　3 讨论

　　支原体在自然界中广泛分布，迄今为止已分离到150余种，其中寄生性的90多种，解脲支原体(U.urealyticum,UU)和人型支原体(M.hominis,MH)均与泌尿生殖道感染有关。约有20%～30%的非淋菌性尿道炎(NGH)病人是以上两种支原体感染引起的，是非淋菌性尿道炎和宫颈炎的第二大致病菌[2]。目前支原体检测方法有培养法(又分为固体培养和液体培养)、血清学检查和分子诊断技术等。支原体为难培养微生物，不同种的支原体对培养基的要求不同。支原体初代培养时间需几天至几个月不等，生殖支原体的培养困难，常需要(1～5)个月。该法阳性结果可靠，但程序繁琐、灵敏度低、技术条件要求高、所需时间长，不利于早期快速诊断。因而分离培养目前没有被用作临床诊断和流行病学研究的常用手段，但在支原体的毒力、致病性研究和药敏试验中仍有重要作用[3]。PCR诊断法快速、简便、特异且敏感，特别对难以培养的支原体，PCR也许是唯一可行的办法，同时对支原体感染的早期诊断有极其重要意义。但PCR也存在一些问题，一方面因其太敏感或靶细胞DNA污染PCR试剂而出现假阳性;另一方面因其存在DNA抑制剂或使用错误的试剂和程序而导致假阴性。同时PCR要求一定的实验室环境和技术，基层医院也难于开展。

　　目前国内支原体培养的商品试剂大部分为液体培养基，以颜色在培养后变红判断支原体生长与否。这种判断依据存在着较多的影响因素，容易误诊。其主要可能就是常规混合支原体UU-MH液体的培养基抑菌剂多为青霉素，在基础培养基中加入各种抑菌剂以抑制标本中杂菌的生长，以达到对支原体的正确判断，而在临床标本中有较高比例的细菌浑浊生长现象[4]。随着抗生素的广泛应用，细菌对青霉素耐药率也越来越高，液体培养基中加入青霉素已经不能抑制某些细菌的生长，如某些大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌，而这些细菌又能分解尿素产氨和二氧化碳，使液体培养基PH值上升，导致液体培养基变红。另一方面大部分液体培养基没有加入抗真菌的药物，有真菌污染时，特别是某些念珠菌能分解尿素产生碱性物质而使液体培养基变红，往往培养基也由黄色变为红色，对于初学者经常误认为是支原体生长，按支原体阳性报告给临床医师，容易误导临床医师对患者的治疗。

　　综上所述，支原体液体培养，作者认为应该对专业医师进行适当的培训，留取合格的标本，及时送检;实验室收到标本后先接种到液体培养基，增菌48h后待培养基变红后，液体培养基澄清桃红色的、浑浊桃红色的分开后。澄清桃红色的液体培养基可以报告支原体阳性，浑浊桃红色的应该进一步接种到血培养基，伊红美蓝培养平板，沙氏培养平板各一块，再结合分离鉴定情况才能为临床提供准确可靠的检验结果。

　　【参考文献】

　　1 杨斌，郭兆旺，陈超群，等.泌尿生殖道支原体、衣原体感染检测及药敏分析[J].中国实用医药，2008;3(22)：23～24

　　2 李明成，刘兴宇，李凡.生殖道支原体、解脲脲原体和人型支原体在泌尿生殖道感染的研究[J].中国实验诊断学，2005;9(2)：237～239

　　3 栾瑞玲，吴元赭.支原体与泌尿生殖道系统疾病[J].实用医学杂志，2008;24(8)：1457～1458

　　4 刘新元，王晓楠.支原体液体培养及阳性结果分析[J].大连医科大学报,2008;30(2)：78～79.