淫-鹑方治疗变态反应性鼻炎的实验与临床研究

作者                               作者单位

王虹敏                      三峡大学校医院,湖北宜昌443002

郑九星                      三峡大学校医院,湖北宜昌443002

徐小萍                      三峡大学校医院,湖北宜昌443002

刘汉丹                      三峡大学校医院,湖北宜昌443002

张明君                      三峡大学校医院,湖北宜昌443002

程启秀                      三峡大学校医院,湖北宜昌443002

变态反应性鼻炎是发生在鼻腔粘膜的变态反应性疾病，极易诱发上呼吸道感染[1]，近年来发病率呈明显上升趋势。在长期的临床工作中我们发现淫-鹑方(自拟)能够提高上呼吸道易感人群的抵抗力，因此我们于2001-05～2005-12采用淫-鹑方治疗变态反应性鼻炎189例，效果良好，并同时进行了淫-鹑方对小鼠免疫功能影响的实验研究。现报道如下。

1 材料

昆明系雄性小鼠，清洁级,体质量(20±2)g,共30只，由三峡大学动物实验中心提供。药物：淫-鹑方粉末(用时用无菌生理盐水溶解)由湖北长阳县人民医院制备;环磷酰胺(Cy),白色结晶，200 mg/瓶配制，批号为030803，上海华联制药有限公司生产。试剂：T细胞亚群检测试剂盒，由Caltag Laboratories生产;PBS液、Hank's液，由三峡大学医学院天然药物实验室提供。

2 方法

2.1 分组取昆明系雄性小鼠30只，随机分为3组，每组10只。第1组为空白对照组，实验进程中正常饲养不作任何处理;第2组为模型对照组，腹腔内注射环磷酰胺造模, 环磷酰胺用量为80 mg/kg,ip qd·1 ，同时灌服生理盐水25 ml/kg·d;第3组为药物治疗组,用Cy行腹腔注射，用量为80 mg/kg,ipqd·1并同时用淫-鹑方粉剂溶解液灌胃，小鼠的用药剂量为25 g/kg·d。三组均连续用药10 d。

2.2 标本采集和检测用药10 d后,予末次灌胃给药1～2 h内处死动物，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank's液平皿中，用镊子轻轻将脾磨碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，或用4层纱布将脾磨碎，用Hank's液洗2次，每次离心10 min(1 000 r/min)。然后将细胞悬浮于1 ml的完全培养液中，调整细胞浓度为1×106个/mL，取上述细胞悬液到1～5号试管，标记管号为(1#Rat-IgG2a-PE， 2# Hamster-IgG-FITC，3# Mouse-CD3-FITC，4#Mouse-CD4-PE，5#Mouse-CD8-PE)取相应荧光单抗与上述的试管的单细胞悬液充分混匀，避光室温孵育15 min，于countler-PREP破碎红细胞后，用流式细胞仪检测[2]。

2.3 观察指标各组小鼠脾组织T细胞亚群的百分比以及CD4+/CD8+值的比较。

2.4 统计学方法实验数据用±s表示，应用SPSS10.0统计软件进行统计学处理，各组间比较采用t检验，P<0.05为差异有显著性意义。

3 结果

3.1 动物数量分析30只小鼠在实验过程中未死亡，全部进入结果分析。

3.2 各组小鼠脾组织T淋巴细胞亚群流式结果分析模型组小鼠脾脏CD3+，CD4+ ，CD8+T细胞亚群的百分比与空白组相比较都有所降低(P<0.01或P<0.05)，模型组小鼠CD4+/CD8+的比值与空白组相比较亦降低(P<0.01)，差异有显著性意义。见表1;治疗组小鼠CD3+，CD4+T细胞亚群的百分比与模型组相比较都有所升高(P<0.01)，CD8+T细胞亚群的比例降低，差异也有显著性意义(P<0.01)，治疗组小鼠CD4+/CD8+的比值与模型组相比较也有所升高(P<0.01)，差异有显著性意义。见表2。表1 空白组与模型组小鼠T细胞亚群的比较(略)表2 模型组与治疗组小鼠T细胞亚群的比较(略)

4 临床研究

4.1 一般资料在我院专科门诊中随机选择变态反应性鼻炎189例，其中男88例，女101例;年龄9～53岁，平均21岁;病史均在两年以上，最长达20年左右。患者主要表现为鼻痒、鼻塞、水样鼻涕、打喷嚏、头昏、头痛等。呈反复发作或治疗-好转-又发作的特征，一般一年内发作6～12次。常伴精神不振、易倦、记忆力减退等症状。检查鼻粘膜水肿、苍白、鼻腔有水样或粘液样分泌物，鼻甲肿大、重者呈紫色。189例中合并过敏性咽喉炎者35例、过敏性鼻窦炎的29例、慢性支气管炎13例、支气管哮喘8例。189例随机分为两组,治疗组152例，对照组37例。

4.2 方法

4.2.1 治疗方法

淫-鹑方主要由淫羊藿、肉苁蓉、鹌鹑等天然药物组成，将上方按工艺流程加工、粉碎成末。治疗组口服淫-鹑方粉末，每次30 g，3次/d，温开水冲服，7 d为一疗程，每疗程复查一次，连续服用4～8疗程。对照组口服开瑞坦，每次10 mg，3次/d，连续服用4～6周，另加鼻丘冷冻，每周1次，冷冻4～6次后停止观察2周。

4.2.2 观察指标

参照中华医学会耳鼻咽喉科学分会变态反应性鼻炎的诊断标准，用药4～8周复诊进行近期疗效评价 ，随访12～18个月进行远期疗效评价。以远期疗效作为评价本方的治疗结果，以痊愈例数计算治愈率，以痊愈、显效加好转例数计算有效率。痊愈：近期复诊症状、体征消失，随访期间无复发;显效：近期复诊症状、体征消失，随访期间复发1～2次，但持续时间短;好转：近期复诊症状、体征大部分消失，随访期间复发3～4次;无效：近期复诊症状、体征部分减轻，远期随访症状、体征均无明显改变。

4.2.3 统计学方法

所得数据经SPSS10.0软件包进行统计学分析，组间比较应用χ2检验。

4.3 治疗结果

本组189例，随访12～18个月，治疗组随访147例，失访5例;对照组随访36例，失访1例。共随访183例，随访率为96.82% 。治疗组147例中痊愈95例，显效23例，好转16例，无效13例。治疗组远期治愈率为64.63%，远期有效率为91.16% 。其中大部分患者自觉体质增强，感冒比过去明显减少。对照组36例中痊愈8例，显效12例，好转7例，无效9例。对照组远期治愈率为22.22%，远期有效率为75.00% 。详见表3 。治疗组的有效率比对照组的有效率明显要高(χ2=5.69，P<0.05)，差异有统计学意义。表3 治疗组与对照组远期疗效比较(略)

5 讨论

变态反应性鼻炎是发生在鼻腔粘膜的变态反应性疾病，近年来发病率呈明显上升趋势。鼻腔粘膜的变态反应使鼻腔粘膜水肿和渗出，除了产生局部症状外，还使上呼吸道通气不畅，病人易倦、精神不振、头昏、头痛、记忆力减退。 鼻腔与鼻窦、咽腔相连，鼻腔粘膜的变态反应很易波及鼻窦、咽喉部、气管和支气管，并发病毒或细菌感染。对变态反应性鼻炎临床上一般采用抗过敏药物、冷冻、激光、射濒、微波、激素封闭等疗法。这些治疗方法虽然都有一定疗效，但易在短期内复发。应用中药组方治疗变态反应性鼻炎，调节其免疫功能，协调免疫反应，调整过敏性体质，增强抗病能力是一个值得探索的途径。在长期的临床工作中我们发现天然药物淫-鹑方能够提高上呼吸道易感人群的抵抗力，因此我们探索应用淫-鹑方来治疗变态反应性鼻炎，进行了为期四年多的临床观察，并同时进行了淫-鹑方对小鼠免疫功能影响的实验研究。

实验研究显示，在对雄性小鼠用Cy进行注射造模后，与空白组相比，CD3+、CD4+ 、CD8+和CD4+/CD8+的比值明显下降(P<0.01或P<0.05)。CD4+、CD4+/CD8+明显降低，表明T细胞亚群异常。CD4+ T细胞的减少不仅可以导致产生多种淋巴因子的能力减弱，而且还可导致协助B细胞产生抗体及辅助其他细胞亚群等功能的减弱，影响细胞免疫反应及抗体形成，从而使机体免疫功能降低，说明小鼠在进行Cy注射后免疫功能低下。而CD8+水平异常降低，可能是由于小鼠在Cy刺激后，所产生短暂的应激反应，具体的机理还不是很清楚。应用淫-鹑胶囊后，与模型组相比，CD3+，CD4+和CD4+/CD8+的比值明显升高(P<0.01或P<0.05)，CD8+水平明显降低 (P<0.01)，提示应用淫-鹑胶囊后，小鼠的免疫力有了较大的提高。其机制可能与方中淫羊藿多糖、肉苁蓉多糖等成分刺激T细胞产生IL-2细胞因子，引起多种淋巴细胞(如T、B细胞及NK细胞等)的增殖,增强CTL、NK细胞和LAK细胞的杀伤活性，促进B细胞产生抗体，诱导IFN分泌等，从而达到提高和协调小鼠免疫功能的作用[3]。

变态反应性鼻炎为一种变态反应性疾病,由IgE 和肥大细胞介导。机体被特异性变应原致敏后产生特异性IgE ,后者固定于肥大细胞表面,使机体致敏,已被致敏的机体再次暴露于特异性致敏物,即可在肥大细胞上产生抗原抗体反应,导致肥大细胞脱颗粒,并释放介质-组胺。组胺作用于细胞的H1 受体,可引起一系列反应。有研究发现，B 细胞前体集落增强因子( PBEF) 、CD83抗原基因表达的上调提示变应性鼻炎并发支气管哮喘患者体内B细胞存在着持续的活化,由此产生大量IgE抗体,介导了I型变态反应的发生[4]。淫-鹑方的主药之一的淫羊藿主要含有淫羊藿苷、去氧甲基淫羊藿苷、淫羊藿多糖、淫羊藿总黄酮等化学成分，淫羊藿多糖能够促进胸腺释放成熟细胞，增强机体细胞免疫功能，而且还能促进T细胞增殖，激活巨噬细胞，提高机体免疫力[5]。淫羊藿总黄酮不但能够改善血液透析患者的临床症状，还能够提高机体的T细胞免疫功能[6]。肉苁蓉主要成分肉苁蓉多糖能够促进小鼠胸腺淋巴细胞内钙释放,使胞内钙离子浓度升高，而促进了IL-2基因的表达,导致T细胞增殖[7]，而提高机体免疫力。因此淫-鹑方不但在临床上对变态反应性鼻炎有较好的疗效，同时还可以提高机体免疫力达到防御疾病的效果。

目前临床上治疗变态反应性鼻炎的方法主要有微波、激光、中药、抗过敏药物等。有研究显示[8]，微波和激光治疗变态反应性鼻炎随访1～2年后，激光治疗组总有效率为92.2%，微波治疗组有效率为91.9%，两种方法比较差异无显著性意义。但两种方法对过敏性体质、有哮喘史和免疫功能低下的患者，治疗效果欠佳。本研究显示，淫-鹑方治疗变态反应性鼻炎的远期治愈率为64.63%，远期有效率为91.16% ，与开瑞坦药物治疗相比远期有效率明显提高

(χ2=5.69，P<0.05)且大部分患者自觉体质增强，感冒明显比过去减少。合并过敏性咽喉炎的35例和过敏性鼻窦炎的29例均明显好转或痊愈;合并慢性支气管炎的13例和支气管哮喘的8例发作次数明显减少。淫-鹑方治疗变态反应性鼻炎的远期有效率高，复发率低，疗效可靠，未发现不良反应。而且本方对增强体质和预防上呼吸道感染也有明显效果。 临床疗效证实本方具有扶正固本、固表祛邪，改善过敏体质，增强机体抗病能力的作用。

淫-鹑方能够显著提高小鼠的免疫功能,改善其免疫系统紊乱的状况;淫-鹑方也能够调节人体免疫功能，改善过敏体质，增强抗病能力，是治疗变态反应性鼻炎的有效方剂。

【参考文献】

[1]韩得民.耳鼻咽喉头颈科学[M].北京: 高等教育出版社，2005：21.

[2]詹灵凌,陈智平,刘志明,等.流式细胞仪不同标记技术对检测T细胞亚群的影响[J].广西预防医学,2003,9(5):305.

[3]黄金玲,龙子江,吴华强，等.苓桂术甘汤对免疫功能低下模型小鼠T细胞亚群及IL-2活性的影响[J].中国实验方剂学杂志，2003,9(6):38.

[4]祝戎飞，刘光辉，黄爱霞，等.变应性鼻炎并发支气管哮喘患者免疫相关基因表达的研究[J]. 临床耳鼻咽喉科杂志，2006 ，20(9)：405.

[5]罗林,罗崇念,肖培根.淫羊藿多糖研究进展[J].中国中药杂志,1998,23(7):436.

[6]陆军爱,崔爱东,蔡 良.淫羊藿对血液透析患者T淋巴细胞亚群的影响[J].中西医结合实用临床急救,1998,5(4):148.

[7]曾群力,郑一凡,吕志良.肉苁蓉多糖的免疫活性及机制[J].浙江大学学报(医学版),2002,31(4):284.

[8]倪爱民，常敏强.激光与微波治疗过敏性鼻炎的疗效对比观察[J].中国激光医学杂志，2007，16(1)：54.