Galectin3和PTTG在甲状腺良恶性肿瘤中的表达及其鉴别

　　作者：崔文丽,陈妍,刘存,邢鹏程,王园　　作者单位：新疆医科大学基础医学院1病理解剖学教研室， 2病理生理学教研室, 新疆乌鲁木齐830011

 　　【摘要】目的:研究甲状腺组织半乳糖凝素3(Galectin3)和垂体瘤转化基因(PTTG)在甲状腺良恶性疾病中的表达特点及鉴别诊断中的应用价值。方法: 应用免疫组织化学Envision法检测正常甲状腺组织10例、甲状腺滤泡性腺瘤(腺瘤)13例、滤泡性癌14例、乳头状癌40例中单克隆抗体Galectin3、PTTG的表达。结果: 甲状腺病变中Galectin3和PTTG表达均位于细胞质; Galectin3、PTTG的表达在甲状腺腺瘤中74.62%为阴性,而滤泡性癌阳性明显增加,乳头状癌90%为中、强阳性, Galectin3和PTTG在腺瘤阳性表达率分别为15.38%(2/13)和15.38%(2/13),在滤泡性癌分别为64.29%(9/14)和57.14%(8/14),在乳头状癌分别为 95%(38/40)、90 %(36/40);Galectin3和PTTG在正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤与恶性病变(滤泡性癌、乳头状癌)表达差异均有统计学意义(P均<0.05);在恶性肿瘤(滤泡性癌和乳头状癌)间表达差异亦有统计学意义。10例正常甲状腺组织Galectin3和PTTG均不表达,腺瘤中仅有1 例表达,腺瘤2者均阳性表达为7.69%,滤泡性癌为21.43%,乳头状癌为100%。结论: Galectin3和PTTG免疫组化联合检测对甲状腺病变的诊断、鉴别诊断具有较高的实用价值。

　　【关键词】 甲状腺肿瘤; Galectin3; PTTG; 免疫组化

　　Expression of Glactine3 and PTTG in benign and malignent thyroid tumor and its clinicopathological significance on their differential diagnose　　CUI Wenli, CHEN Yan, Liu Cun, et al　　Department of Pathology, Basic Medical College, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, China

　　Abstract: 　Objective: 　To study the expression of galectin3(Gal3), pituitary tumor transforming gene (PTTG) in thyroid tumors and to assess their value as markers in the differential diagnoses of thyroid nodular lesions. Methods: Immunohistochemical staining was performed on formalinfixed paraffinembedded tissue of 10 cases of normal thyroid tissue, 13 cases of follicular adenoma (FA), 40 cases of papillary carcinoma (PC), and 14 cases of follicular carcinoma (FC). Results: galectin3 and PTTG were expressed in the cytoplasm with no or weak expression in benign FA and diffuse strongly in malignant cases. Positive expressions of galectin3 and PTTG were present in 2 of 13, 2 of 13 in FA, 9 of 14, 8 of 14 in FC, 38 of 40, 36 of 40 in PC. The detected frequency of two markers between FA and malignant tumors (PC and FC) were revealed statistically significance. Between two malignant lesions (PC, FC), the differences were statistically significant as well. Ten cases were negative for all two markers in normal thyroid tissue. Only one case negative for all two markers in FA. The rate of one case with two positive marker expression in FA, FC, PC were 7.69 %(1/13), 21.43 %(3/14) 100%(40/40) respectively, the difference between benign lesions and malignant lesions was revealed statistically significance. Conclusions: Immunohistochemical stains of galectin3 and PTTG, especially when used in combination , can be used as an important biomarker for histopathological diagnoses of thyroid lesions.

　　Key words: thyriod tumor; galectin3; PTTG; immunohistochemistry

　　我国约3亿人生活在碘缺乏地区，位于内陆山区及半山区。新疆是甲状腺疾病的高发流行地区，甲状腺肿的患病率较高。在外科治疗中，区别良恶性病变是提高治愈率的关键。由于诊疗技术的进步,甲状腺肿块检出及手术明显增多,但在临床病理诊断中对甲状腺病变即腺瘤、滤泡性癌及乳头状癌的鉴别有时仍较为困难。国外有学者将半乳糖凝素3(Galectin3, Gal3)[1]、垂体瘤转化基因(PTTG)用于甲状腺病变鉴别诊断,而国内报道较少, 尤其PTTG。本研究采用免疫组化方法对67例甲状腺不同病变组织中Gal3、PTTG进行检测,旨在探讨二者在甲状腺病变诊断及鉴别诊断中的价值。

　　1对象和方法

　　1.1研究对象选择

　　新疆医科大学第一附属医院2004年5月～2007年5月手术切除的67例甲状腺肿瘤标本。所有标本病理诊断以2006年WHO甲状腺组织学分类为依据,恶性甲状腺肿瘤共54例,其中乳头状腺癌40例,滤泡状腺癌14例,甲状腺腺瘤13例。所有病例均未经过药物或颈部放射治疗。另取尸检的正常甲状腺组织10例作为正常对照。所有病例临床资料完整,所有标本均经10%福尔马林固定、石蜡包埋、4 μm连续切片,进行常规HE染色及免疫组织化学染色。

　　1.2主要试剂与方法

　　Galectin3小鼠抗人单克隆抗体浓缩液为北京中杉公司产品,稀释度为1∶75;PTTG小鼠抗人单克隆抗体浓缩液为北京中杉公司产品，稀释度为1∶50。Envision试剂盒为美国Daka公司产品。免疫组化染色依照Envision试剂盒的说明进行。

　　1.3结果判断

　　以Galectin3、PTTG在细胞质内出现棕黄色颗粒定为阳性。每张切片随机选10个高倍视野。阳性细胞数<10%为阴性,阳性细胞11%～25%为弱阳性(+)，阳性细胞数26%～50%为中度阳性(++)，阳性细胞数>51%为强阳性(+++)。

　　1.4统计学处理

　　采用SPSS11.0统计软件进行统计学处理,各种甲状腺病变之间免疫组化染色结果的比较采用秩和检验，率的比较采用精确概率法，检验水准α=0.05。

　　2结果

　　2.1Galectin3和PTTG在甲状腺病变组织中的表达情况Gal3细胞质内表达,部分有细胞核着色,同时不论良性或恶性病变散在组织细胞亦有Gal3 阳性表达。在腺瘤组织中滤泡上皮11例阴性,仅2例有阳性表达,在滤泡性癌表达明显增加,有些肿瘤中央滤泡上皮不表达,但在浸润包膜处癌细胞阳性表达明显,而在乳头状癌病例中36例中度和强阳性表达。甲状腺良性病变与恶性病变间比较, 腺瘤、滤泡性癌、乳头状癌间比较，乳头状癌与滤泡状癌比较，差异均有统计学意义(P均<0.05),见表1。PTTG在腺瘤组织中11例为阴性,而滤泡上皮增生形成的突入腔内的乳头却很少表达,仅2例腺瘤为中度阳性表达，但未见有强阳性表达,在滤泡性癌中PTTG表达率及表达强度均增加,特别在包膜浸润处明显阳性,而在乳头状癌病例中除4例为阴性外，余均为中度和强阳性表达,在癌周围组织中一些散在浸润滤泡亦为明显阳性,染色清晰,与背景反差明显,而不同于腺瘤组织的散在弱阳性(表1)。甲状腺腺瘤与恶性病变(包括滤泡性癌、乳头状癌)PTTG表达差异有统计学意义(χ2=37.886, P<0.05)，在腺瘤、滤泡性癌、乳头状癌间比较，差异均有统计学意义(P=0.000)，乳头状癌与滤泡状癌比较,差异无统计学意义(χ2=1.754, P>0.05),见表1。表1Gal3、PTTG在甲状腺不同病变中的表达分类(略)

　　2.2Gal3和PTTG标记共同表达与甲状腺病变的关系在甲状腺良性病变腺瘤中约76.92%病例Gal3、PTTG均不表达,仅有1例出现2种标记同时表达;而在滤泡性癌仅14.29%病例2 种均不表达且21.43%病例出现2种标记表达;在乳头状癌几乎均为2种标记表达且表达强度在中度以上。经统计学分析Gal3、PTTG2种标记同时表达在甲状腺良性病变与恶性病变间,即腺瘤，滤泡性癌和乳头状癌间差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。表2Gal3、PTTG标记协同表达与甲状腺病变的关系(略)

　　3讨论

　　甲状腺组织半乳糖凝素3(Gal3)是一个31kD的β半乳糖蛋白, 属于植物血凝素家族,其编码基因位于染色体1p13[1]。Gal3是一种细胞内和细胞外凝集素,主要与细胞内的糖蛋白、细胞表面分子和细胞外基质蛋白作用,参与前体mRNA剪切,调节细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡[2]。Gal3在甲状腺乳头状癌中显示较高的表达率约78%, 是近年较为关注的标志物。Coli等[3]研究表明Gal3在不同类型甲状腺癌中的表达有差异，在甲状腺乳头状癌中的表达率最高，在甲状腺滤泡上皮恶性肿瘤中有较高的阳性率, 在结节性甲状腺肿和滤泡性腺瘤中表达较低(乳头状癌>滤泡状癌>滤泡状腺瘤)，并与局部细胞异型增生和恶变存在联系, Gal3表达水平检测有助于对良性病变的恶性转化(malignant transformation) 或恶性潜能未定腺瘤做出明确诊断。张延美等[4]研究表明，Gal3在恶性甲状腺肿瘤中的表达水平增高,而在良性甲状腺肿瘤中几乎不表达或呈较弱的点状散在分布。本研究结果表明在腺瘤中Gal3 阳性表达仅为15.38%,并且均为弱阳性,滤泡性癌中阳性表达为64.29%, 乳头状癌中阳性表达为90%且呈中度及强阳性表达, 提示Gal3 的表达情况对恶性病变、腺瘤、滤泡性癌和乳头状癌之间的鉴别诊断有较好的参考价值。垂体瘤转化基因(PTTG)作为一种强有力的肿瘤转化基因,可通过多条途径来诱导肿瘤的发生、发展。PTTG基因调控区的突变将引起PTTG调控失常。Pei[5]通过研究PTTG在分化型甲状腺癌(DTC)中的表达水平,发现在DTC中PTTG mRNA水平显著高于正常组织。有学者认为乳头状癌与滤泡状癌的PTTG mRNA表达水平无明显差异，与TNM的分期无明显相关;但通过随访发现在复发肿瘤中PTTG mRNA 表达水平显著高于无复发的肿瘤,由此认为PTTG表达水平可作为甲状腺癌的一个独立的预后指标[6～8]。熊志阳等[9]研究认为，PTTG既可与碱性成纤维生长因子形成正反馈环路并刺激肿瘤血管形成，也可激活cmyc基因核内转录。目前尚无在甲状腺肿瘤中的研究。本研究发现在腺瘤中PTTG阳性表达率仅为15.38%,并且均为中度阳性,滤泡性癌中阳性表达率为57.14%, 乳头状癌中阳性表达率为90%且呈中度及强阳性表达,表明PTTG的表达不仅是甲状腺乳头状癌较好的标记，而且有助于滤泡性癌和腺瘤之间的鉴别。本研究显示Gal3和PTTG联合检测对甲状腺病变的鉴别诊断作用明显增强,2种标记均不表达的病例在甲状腺良性病变中约占76.92%,而滤泡性癌仅为14.29%,乳头状癌为0;出现2种标记阳性表达在甲状腺良性病变为7.69%,而滤泡性癌为21.43%,乳头状癌为100%,可见应用Gal3、PTTG联合检测可以作为区分甲状腺良、恶性病变的参考指标。在腺瘤、滤泡性癌、乳头状癌间亦有差异,说明对三者也有明显鉴别作用,提示良性病变中出现2 种以上表达尤其是中或强阳性表达,一定要多取材排除恶性。故Gal3、PTTG 的检测尤其联合检测对甲状腺病变的诊断、鉴别诊断具有较高的实用价值,值得进一步研究和探讨。

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　　[9]熊志阳,美华,李义云.PCNA、PTTG、c myc、p53 在垂体腺瘤中的表达及其与肿瘤复发的关系[J]. 中国临床神经外科杂志, 2006,11(9):531534.