银杏叶提取物对早期糖尿病肾病患者TGF-β1和CTGF水平

　　作者：李旭升,郎旭军,傅晓骏,叶赏和,陈跃华　　作者单位：金华职业技术学院医学院，浙江 金华 321007

　　【摘要】目的 探讨银杏叶提取物对早期糖尿病肾病(DN)患者转化生长因子(TGF)-β1、结缔组织生长因子(CTGF)及Ⅳ型胶原(CⅣ) 水平的影响。方法 63例早期DN患者随机分组，对照组(29例)采用糖尿病(DM)常规治疗，治疗组(34例)在常规治疗基础上加用银杏叶片，疗程2个月。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组患者治疗前后血清TGF-β1、CⅣ和尿TGF-β1、CTGF水平，同时观察尿白蛋白排泄率(UAER)、空腹血糖(FPG)、血肌酐(Scr)、血脂等指标的变化。 结果 与治疗前比较，治疗组患者治疗后血清TGF-β1、CⅣ和尿TGF-β1、CTGF水平下降(P<0.05或P<0.01)，UAER明显降低，Scr、血脂指标改善(P<0.05或P<0.01)，对照组治疗后上述指标无明显差异(P>0.05)。结论 银杏叶提取物可通过降低早期DN患者TGF-β1、CTGF水平而延缓DN的发展。

　　【关键词】 银杏叶提取物;糖尿病肾病;转化生长因子-β1;结缔组织生长因子;Ⅳ型胶原

　　基金项目：浙江省教育厅科研项目(20051319)

　　Effect of Extract Gingko biloba on TGF-β1 and CTGF in patients with early diabetic nephropathy

　　LI Xu-Sheng，LANG Xu-Jun，FU Xiao-Jun，et al.

　　Jinhua Profession and Technology College Medical School， Jinhua 321007，Zhejiang，China

　　【Abstract】 Objective To investigate the effect of Extract Gingko biloba (EGb) on transforming growth factor β1 (TGF-β1)，connective tissue growth factor (CTGF) and type Ⅳ collagen (CⅣ) in patients with early diabetic nephropathy (DN).Methods Sixty-three patients with DN in early stage were randomly divided into the control group(n=29) and the treatment group(n=34).The control group was applied DN regular treatment and the treatment group was added to EGb on the basis of regular treatment.Both of them were treated for 2 months.Serum TGF-β1 and CⅣ，urinary TGF-β1 and CTGF were determined with ELISA in two groups both before and after treatment.The urinary albumin excretion rate (UAER)，blood sugar level，serum creatinine and lipid test were also examined.Results The levels of serum TGF-β1 and CⅣ，urinary TGF-β1 and CTGF in the treatment group were significantly lower than those of pre-treatment(P<0.05 or P<0.01)，favorable changes of levels of other parameters(UAER，Scr，TC，TG，LDL-C)were also demonstrated(P<0.05 or P<0.01).However，no significant decrease in the above-mentioned indexes were found in the control group (P>0.05).Conclusions EGb could delay the development of early DN by decreasing the levels of TGF-β1 and CTGF.

　　【Key words】 Extract Gingko biloba;Diabetic nephropathy;Transforming growth factor β1;Connective tissue growth factor;Type Ⅳ collagen

　　糖尿病肾病(DN)是一类以进行性肾纤维化为特征的肾脏疾病。多种细胞因子分泌增多和细胞外基质(ECM)蛋白代谢异常在DN发病的各个环节中起重要作用。我们前期研究表明，银杏叶提取物(Extract Gingko biloba，EGb) 可使糖尿病(DM)大鼠脂质过氧化减轻和一氧化氮水平下降，对DM大鼠多个脏器具有保护作用〔1，2〕。但其具体机制目前尚未完全阐明。本研究观察EGb对34例早期DN患者血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和尿TGF-β1、结缔组织生长因子(CTGF)水平的影响，探讨EGb治疗DN的机制。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料 以2003年6月～2005年6月金华职业技术学院附属门诊部和金华市中医院肾内分泌科住院及门诊的63例早期DN患者为研究对象，其中男34例，女29例，年龄59～77(平均67.3±7.8)岁，病程为7个月～18年。DM按1985年世界卫生组织(WHO)和1997年美国糖尿病协会(ADA)的标准诊断，且根据Mogensen〔3〕对DN的分期，选择尿白蛋白排泄率(UAER)为30～300 mg/24 h的早期DN患者。均给予降血糖治疗，合并高血压还需接受降血压治疗，当空腹血糖(FPG)降至7.0 mmol/L以下，收缩压控制在125～130 mmHg左右，舒张压控制在75～80 mmHg左右时，连续2 d测定24 h尿微量白蛋白，计算平均值，取30～300 mg/24 h为入选者。所有受试者均排除酮症酸中毒、非DM肾脏疾患、泌尿系感染、肝病、甲状腺机能亢进病、肺间质纤维化、心肌与腹膜后纤维化及胶原性疾病等。63例早期DN患者随机分为治疗组和对照组。两组性别、年龄、体重指数等一般情况差异均无统计学意义。

　　1.2 治疗方法 两组患者在DM教育、优质低蛋白饮食的基础上，对照组根据FPG及尿糖变化，给予口服降糖药，不适应口服降糖药者，皮下注射胰岛素控制血糖在理想水平(空腹<7.0 mmol/L，餐后<9.0 mmol/L);合并高血压者，加用降压药使血压控制在正常范围(130/80 mmHg)。治疗组在给予以上综合治疗的基础上加用银杏叶提取物制剂“天保宁”(每片含总黄酮醇苷9.6 mg、萜类内酯2.4 mg，由浙江康恩贝制药公司生产，批号：030124)。每天口服3次，每次2片，连续服用2个月。

　　1.3 观察指标 清晨抽取空腹静脉血后分别检测治疗前后两组患者FPG、血脂、血肌酐(Scr)，采用美国Beckman CX7全自动生化分析仪测定。收集24 h尿液，2 000 r/min 离心10 min，取上清液2 ml于-70℃保存。尿微量白蛋白浓度用放射免疫法测定，药盒购自中国原子能研究所。TGF-β1测定采用ELISA法，试剂盒购自天津天硕生物制品所。血清CⅣ用ELISA法测定，试剂盒购自北京化学试剂研究所。以双抗体夹心ELISA(试剂盒购自Dako公司)检测尿CTGF的浓度，标本经盐酸和氢氧化钠预处理。为了消除尿液稀释或尿液浓缩等对结果的影响，尿CTGF以其与尿肌酐的比值表示。

　　1.4 统计学方法 数据用x±s表示，用SPSS10.0软件进行统计分析，组间比较采用t检验。

　　2 结果

　　2.1 两组病例治疗前后FPG、UAER、Scr的变化 两组病例治疗前后FPG差异无统计学意义(P>0.05)，治疗组接受EGb 2个月治疗后UAER和Scr较治疗前均有明显下降(P<0.01) (表1)。

　　2.2 两组病例治疗前后血脂的变化 治疗组治疗后总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均较治疗前明显下降(P<0.05或P<0.01);与对照组治疗后比较，TC下降差异有统计学意义(P<0.01) (表2)。

　　2.3 两组病例治疗前后TGF-β1、CTGF和CⅣ的变化 与治疗前比较，治疗组患者治疗后血清TGF-β1、CⅣ和尿TGF-β1、CTGF水平下降(P<0.05或P<0.01)，对照组治疗后无明显差异(P>0.05) ;与对照组治疗后比较TGF-β1、CTGF和CⅣ下降显著(P<0.05或P<0.01) (表3)。

　　表1 两组治疗前后FPG、UAER、Scr的变化(略)

　　与本组治疗前比较：1)P<0.01;与对照组治疗后比较：2)P<0.01

　　表2 两组治疗前后血脂的变化(略)

　　与本组治疗前比较：1) P<0.05，2)P<0.01;与对照组治疗后比较：3)P<0.01

　　表3 两组治疗前后TGF-β1、CTGF和CⅣ的变化(略)

　　与本组治疗前比较：1) P<0.05，2)P<0.01;与对照组治疗后比较：3)P<0.05，4)P<0.01

　　3 讨论

　　DN是DM的主要并发症，其发生及发展是多因素综合作用的结果，其中糖代谢紊乱，肾脏血流动力学改变，多种细胞因子以及遗传背景均起非常重要的作用。本研究以63例早期DN患者为研究对象，在相同综合治疗基础上，结果显示34例加用EGb治疗的患者，其早期UAER明显下降，而另外29例未加用EGb治疗的对照组患者早期微量白蛋白量无明显改善，与朱宏文等〔4〕研究结果相似。EGb还可能通过改善DM患者脂质代谢紊乱，降低肾小球的高灌注、高滤过状态，从而减少尿蛋白的排出量。由于对照组与治疗组血糖无明显差异，故该药对肾的保护作用可能与糖代谢因素无关。

　　DN的早期病理特征是肾小球肥大、基底膜增厚和系膜基质扩张，晚期则表现为肾小球硬化和间质纤维化。ECM进行性积聚是其共同的病理基础，细胞因子在这一过程中起关键作用〔5〕。DM时，高糖及其代谢紊乱、血流动力学改变等均可刺激肾脏局部TGF-β1、CTGF等细胞因子表达上调，导致ECM合成增多、降解减少，促使ECM在肾脏过度蓄积，促成肾小球硬化、间质纤维化的发生。TGF-β1作为重要的致纤维化因子参与了DN的发生和发展，参与ECM进行性积聚过程，如刺激ECM中纤维连接蛋白、胶原等多种成分合成，减少蛋白酶表达和增加蛋白酶抑制合成，上调ECM受体整合素的表达，促进细胞与间质黏附及基质沉积等〔6〕。CTGF在DN发病过程中作为TGF-β1的下游调节因子，具有促进成纤维细胞活化以及ECM产生、积聚等功能。Adler〔7〕等发现，与正常人或尿蛋白排泄正常的DN患者相比，早期和临床DN患者的肾小球CTGF mRNA的表达要高出两倍。而且，CTGF mRNA水平与尿白蛋白的程度呈正相关。CⅣ为ECM的主要成分，是构成基底膜骨架的主要胶原成分。DM时肾小球基底膜增厚和系膜增生主要与CⅣ mRNA表达增加及其产生增多有关。这类成分的增加是导致肾组织纤维化的物质基础，也是肾小球硬化早期形态学改变的重要标志。应用抗TGF-β1单克隆抗体治疗DM大鼠，可以降低肾脏TGF-β1的表达及CⅣ的积聚，从而改善肾脏病变〔8〕。阻断这些细胞因子的表达与合成，或阻断其受体及受体后效应，将为临床防治DN提供一条安全有效的新途径。

　　EGb是从植物银杏的叶子中提取的重要成分，主要包括黄酮类、萜类，其中前者占24%，后者占6%。具有广泛的药理作用，如拮抗血小板活化因子(PDF)、清除自由基、抗炎、抗过敏等。唐灵等〔9〕观察到EGb治疗后DM大鼠肾组织TGF-β1及C-fos蛋白表达明显下降，肾脏肥大指数和尿白蛋白量有明显改善，肾脏病理形态学改变也减轻。本研究结果显示，EGb能显著降低早期DN患者尿白蛋白排泄，保护早期DN患者的肾脏功能。这种保护作用可能与EGb通过抑制TGF-β1、CTGF表达，抑制肾小球细胞及肾间质成纤维细胞合成ECM，进而使肾小球系膜细胞及肾小管上皮细胞转分化成肌成纤维细胞后合成及分泌间质胶原减少，最终延缓疾病的进展。

　　【参考文献】

　　1 李旭升，胡 野，陈国荣，等.银杏叶提取物对糖尿病大鼠脂质过氧化作用的影响〔J〕.中国中医药信息杂志，2005;12(2)：47-8.

　　2 李旭升，蒋 磊，陈国荣，等.银杏叶提取物对糖尿病大鼠巨噬细胞脂质过氧化作用和一氧化氮水平的影响〔J〕.中华内分泌代谢杂志，2005;21(1)：79-80.

　　3 Mogensen CE.Early glomerular hyperfiltration in insulin-dependent diabetics and late nephropathy〔J〕.Scand J Clin Lab Invest，1986;46(3)：201-6.

　　4 朱宏文，史正芳，陈云燕，等.银杏叶提取物对早期糖尿病肾病的影响〔J〕.中国中西医结合杂志，2005;25(10)：889-91.

　　5 Mason RM，Wahab NA.Extracellular matrix metabolism in diabetic nephropathy〔J〕.J Am Soc Nephrol，2003;14(5)：1358-73.

　　6 Chen S， Hong SW，Iglesias-de la Cruz MC，et al.The key role of the transforming growth factor-beta system in the pathogenesis of diabetic nephropathy〔J〕.Ren Fail，2001;23(3-4)：471-81.

　　7 Adler SG，Kang SW，Feld S,et al.Glomerular mRNAs in human type 1 diabetes：biochemical evidence for microalbuminuria as a manifestation of diabetic nephropathy〔J〕.Kidney Int，2001;60(6)：2330-6.

　　8 Hori Y，Katoh T，Hirakata M，et al.Anti-latent TGF-beta binding protein-1 antibody or synthetic oligopeptides inhibit extracellular matrix expression induced by stretch in cultured rat mesangial cells〔J〕.Kidney Int，1998;53(6)：1616-25.

　　9 唐 灵，张木勋.银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏TGF-β1及C-fos表达的影响〔J〕.华夏医学，2002;15(6)：726-9.