载脂蛋白E基因多态性与2型糖尿病合并高血压的关系

　　作者：周君  　作者单位: 157000 黑龙江牡丹江，牡丹江市第二人民医院神经内科   　　【关键词】  糖尿病

　　2型糖尿病患者高血压、冠心病、肥胖、卒中等并发症  的发生率明显高于普通人群。2型糖尿病和高血压均为一  类具有共同遗传背景的多基因疾病。近年有关于载脂蛋白   E（apoE）基因多态性与高血压关系的研究报道，但结果很  不一致。本文采用分子生物学手段以中国东北地区汉族为  对象，探讨apoE基因多态性与2型糖尿病合并高血压的关  系。   

　　1 对象与方法   

　　1.1     研究对象 病例来源于2002年10月～2003年7月  在我院住院患者。对照来源于同期无糖尿病史及脑血管病  史的住院患者和门诊体检者。2型糖尿病诊断和分型依照  1999年WHO制定的标准。高血压诊断按1999年WHO和  ISH标准。本研究收集单纯2型糖尿病患者45例，2型糖  尿病合并高血压患者92例，对照组68例;性别、年龄和体  重指数在3组之间比较差异均无显著性，具有可比性。  

　　1.2     研究方法  

　　1.2.1  标本的采集与处理 所有受试者在上午6～8时空  腹抽取肘静脉血2.7ml，注入含枸橼酸钠抗凝的真空管，置  -70℃保存。采用酚-氯仿法提取基因组DNA，-20℃保  存至分析用。  

　　1.2.2     apoE基因的PCR扩增 以基因组DNA为模板，  PCR扩增apoE基因第4外显子片段。反应引物按Wenham  等    ［1］    报道设计，由上海Sangon公司合成。上游引物序列  为:5′-TCCAAGGAGCTGCAGGCGGCGCA-3′;下游引物序  列为:5′-ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACACTGCCA-  3′。PCR扩增在10μl反应体系中进行，其中包括基因组  DNA 1μl（10～20ng/μl），10×Buffer 1μl，4×dNTP 0.6μl  （2.5mM），引物各0.4μl（10μmol/L），二甲亚砜1μl，Taq   DNA聚合酶0.5u。先进行94℃10s、68℃10s、72℃30s共4  个循环，再进行94℃10s、62℃10s、72℃30s共30个循环，最  后置于72℃延伸7min。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色检测扩增结果。  

　　1.2.3     限制性内切酶消化 限制性酶切反应在20μl反应  体系中进行，其中包括PCR产物6μl，Hin6I内切酶6u  （10u/μl）及相应Buffer 2μl。轻轻混匀后置37℃消化过   夜。酶切产物经8%中性聚丙烯酰胺凝胶电泳，DNA快速  银染，电泳图谱按文献    ［3］    的方法鉴定apoE基因型。  

　　1.3     统计学方法 用χ    2   检验进行等位基因和基因型频率  分布的比较，用方差分析进行组间均数的比较，数值用均数  ±标准差（ ˉ x±s ）表示。 P <0.05差异具有显著性。所有统  计学分析均采用SAS 6.0统计软件系统进行。   

　　2 结果   

　　2.1     apoE基因型鉴定 载脂蛋白E基因PCR-RFLP电  泳结果见图1。

　　图1   载脂蛋白E基因PCR-RFLP电泳结果   略

　　2.2     apoE基因型及等位基因频率分布 见表1。   

　　表1 3组人群apoE等位基因及基因型频率分布    （略）

　　3 讨论  

　　载脂蛋白E根据氨基酸序列的不同，有3种主要的异  构体E    2   、E    3   和E    4   ，分别由19号染色体上的一个基因位点  的3个等位基因ε    2   、ε    3   和ε    4   编码，形成apoE基因多态性    ［2］    。这3种等位基因呈共显性表达，在人群中组成了6  种不同的基因表型，即3种纯合子（ε    2   ε    2   、ε    3   ε    3   、ε    4   ε    4   ）和3种  杂合子（ε    2   ε    3   、ε    2   ε    4   、ε    3   ε    4   ）。  apoE基因多态性与血压的关系仍未阐明，临床研究结  果亦有较大分歧。Uusitupa等    ［3］    根据apoE多态性对胆固  醇的影响，推测它可能和血压间存在着某种联系，经研究发   现ε    4   等位基因携带者收缩压较其他等位基因者高，而舒张压则与apoE基因多态性无关  ［3］    。De Knijff等    ［4］    认为apoE  基因多态性与血压无关。Uusitupa等［3］认为apoE可能 通  过升高LDL来减弱内皮依赖性血管舒张而使血压升高;  另外它可能通过影响高血压的相关危险因素而间接起作  用，如携带E    4   等位基因者LDL较高    ［5］    ，而较高的LDL个  体易发生动脉硬化，进而影响血压;有研究认为apoE基因  多态性与高胰岛素血症及胰岛素抵抗间存在相关性    ［6］    ，  胰岛素抵抗被认为是高血压的重要危险因素和病理生理  机制。本研究的结果显示，2型糖尿病合并高血压患者携  带ε    4   等基因的频率与单纯2型糖尿病组和对照组差异无  显著性。这与郑以漫等    ［7］    研究的结果一致。我们认为  apoE基因型与中国东北地区汉族人2型糖尿病合并高血  压无相关性。  apoE基因多态性与血压之间的关系颇为复杂，可能通  过基因-基因及基因-环境间的相互作用    ［8］    ，以某些直接  或间接的方式影响血压。其确切关系和机制还有待于进一  步研究。    

　　【参考文献】   

　　1  Wenham PR，Price WH，Blundell G.Apolipoprotein E genotyping by    one-stage PCR.Lancet，1991，337 （8750）:1158-1159. 

　　2 Zannis VI，Breslow JL.Human very low density lopoprotein E isopro-  tein polymorphism is explained by genetic variation and post-trans-  lation modification.Biochemistry，1981，20 （4）:1033-1041. 

　　3 Uusitupa M，Sarkkinen E，Kervinen K，et al.Apolipoprotein E phe-  notype and blood pressure.Lancet，1994，343:57-62. 

　　4 De Knijff P，Boomsma DI，Fesken EJM，et al.Apolipoprotein E phe-  notype and blood pressure.Lancet，1994，343:1234. 

　　5 Cui GF.Apolipoprotein E and atherosclerosis. Xiandai zhenduan yu   Zhiliao （ mod Diagn Treat ），2000，11 （2）:86 -88. 

　　6 Li YF，Zhao SP.Apolipoprotein E gene polymorphism and hyperten-  sion. Gaoxueya Zazhi （ Chin J Hypertension ），2000，8 （1）:9 -  11. 

　　7 郑以漫，孙荣，李小英，等.apoE基因多态性与中国人2型糖尿  病及其心血管并发症的关系.中华内分泌代谢杂志，1998，14  （1）:11-14. 

　　8 Kauma H， Savolainen MJ， Rantala AO， et al.Apolipoprotein E   phenotype determines the effect of alcohol on blood pressure in mid-  dle- aged men.Am J Hypertens，1998，11 （11pt1）:1334-1343.