心喘胶囊对犬实验性心力衰竭时神经内分泌过度激活的调节作用研究

心喘胶囊对犬实验性心力衰竭时神经内分泌过度激活的调节作用研究作者：杨志旭,李洁,尚晓泓,李春生    作者单位：中国中医科学院西苑医院,北京 100091 国家自然科学基金资助(39400175)   【摘要】  目的 研究心喘胶囊对心力衰竭时神经内分泌过度激活的调节作用。方法 采用静脉泵入戊巴比妥钠复制犬心力衰竭动物模型,十二指肠给予心喘胶囊水提取液,观察各组神经内分泌过度激活相关指标的变化。结果 心喘胶囊具有明显提高衰竭心脏心肌细胞β受体密度,降低血浆去甲肾上腺素、肾上腺素水平的作用；还具有明显降低血浆血管紧张素转换酶活性的作用,这方面作用与阳性对照药倍他乐克加开博通作用相似。结论 心喘胶囊对心力衰竭时神经内分泌过度激活具有调节作用。提出中医对心力衰竭的治疗,除了针对“心主血脉”功能失调进行治疗外,还应针对“心藏神”功能失调,即心神不宁进行调治。    【关键词】  心喘胶囊；心力衰竭；神经内分泌；犬    Study on the Regulatory Effect of Xinchuan Capsules on the Excessive Aactivation of Neuroendocrine of Dogs with Experimental Heart Failure YANG Zhi-xu, LI Jie, SHANG Xiao-hong, et al  Xiyuan Hospital, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100091, China    Abstract：Objective To investigate the regulatory effect of Xinchuan capsules on the excessive activation of neuroendocrine with heart failure. Methods The heart failure animal model was built up using dogs by intravenous pumping of sodium pentobarbital. Water extract of Xinchuan capsules was given through duodenum. Indicators relating to the excessive activation of neuroendocrine changes of each group were observed. Results Xinchuan capsules could significantly increase the density of beta receptors of failure myocardial cells and lower the level of plasma norepinephrine and epinephrine, and remarkbly decrease the activity of plasma angiotensin converting enzyme. This played the similar role as the positive control drug metoprolol plus captopril. Conclusion Xinchuan capsules have the regulatory effect on the excessive activation of neuroendocrine with heart failure. TCM treatment for heart failure should not only target the functional disorder of the heart dominating blood circulation and vessels, but also the functional disorder of the heart stores the spirit, that is uneasy mental state.    Key words：Xinchuan capsules；heart failure；neuroendocrine；dog    心力衰竭是一种复杂的临床综合征,临床常见而危害严重。20世纪80年代以来,随着对心力衰竭基础和临床研究的不断深入,认为心力衰竭已不是单纯的血流动力学障碍,更重要的是多种神经体液因子的参与,从而促使心衰持续发展。心力衰竭时,作为代偿机制的神经内分泌激活常有过度,反而对心血管系统有害。为此,笔者进行心喘胶囊水提取液对犬实验性心力衰竭时神经内分泌过度激活的调节作用研究。1  实验材料　　1.1  动物    健康成年杂种犬20只,体重(14.81±2.45)kg,雌雄兼用,北京实验动物养殖调剂中心,合格证号：京幼管犬字(96)第030号。　　1.2  药物    心喘胶囊水提取液,l g原药材/mL,中国中医科学院西苑医院制剂研究室提供；美托洛尔,25 mg/片,阿斯特拉无锡制药有限公司生产；卡托普利片,25 mg/片,常州制药厂生产；戊巴比妥钠,上海化学试剂采购供应站分装；肝素钠注射液,12 500 U/支,上海生物化学制药厂生产。2  实验方法　　2.1  造模　　实验动物经戊巴比妥钠(30 mg/kg)静脉麻醉,气管插管,连接电动人工呼吸机；分离右侧股静脉,连接恒速蠕动泵,以备输入戊巴比妥钠；分离右侧股动脉插管,测量动脉血压(BP)；左侧第4肋间开胸,暴露心脏,剪开心包,做心包床；分离主动脉,测量心输出量(CO)；左心室尖部插管,测定左室内压峰值(LVP),左室舒张末期压(LVEDP),左心室内压变化速率最大值(dp/dtmax)；记录标准Ⅱ导心电图(ECG),根据心电图R波峰判断心室开始收缩的起点至dp/dtmax的间隔时间(R-dp/dtmax)；测定心率(HR)并描记变化曲线；在左心室表面纵向放置心肌张力换能器测量左室心肌收缩力(LVMCF)。上述各项指标同步记录于多道生理记录仪。    施腹部手术,十二指肠插管,以备给予所试药物。静脉推注肝素注射液(125 U/kg)进行肝素化,30 min后,记录各项指标, 作为心衰前基础值。经蠕动泵恒速输入2%戊巴比妥钠,造成心力衰竭动物模型,记录各项心衰后指标(药前值)。经十二指肠给入所试药物。分别于造模前、给药前以及给药后60、120、180 min抽血,放低温离心机离心10 min后,取血浆置入-20 ℃冰箱保存备检。180 min后处死动物并立即取出犬左心室心肌组织一块,用纱布包裹后放置于95%O2＋5%CO2饱和的冷Krebs液中备用。　　2.2  分组及给药    将20只成年杂种犬随机分为4组,每组5只。空白对照组给生理盐水3 mL/kg；心喘胶囊小剂量组给2 g原药材/kg；心喘胶囊大剂量组给4 g原药材/kg；阳性对照组给倍他乐克0.2 mg/kg,加开博通2.8 mg/kg。上述实验药物均在实验前用生理盐水配制成等体积(3 mL/kg),经十二指肠给药。　　2.3  观察指标及方法　　2.3.1  心肌细胞β受体密度测定 　　采用放射配体结合实验。将犬左心室心肌组织在20 mL含NaCl 154 mmol/L的20 mmol/L磷酸钠盐缓冲液(PBS)中制备匀浆,经过滤,离心处理后制成粗制细胞膜标本,保存于冰浴中备用。膜标本分别用PE 10 μmol/L,PE＋5-MU 1 mmol/L温育l0 min,或CEC 20 mmol/L预处理后加PE温育10 min,然后做125I吲哚洛尔(pindolol,Pin)的结合饱和实验,125I Pin浓度范围为20～590 pmol/L,经Scatchard分析,求出配体解离常数(Kd)和最大结合容量(Bmax)[1]。　　2.3.2  血浆去甲肾上腺素、肾上腺素含量测定 　　用高效液相色谱电化学法测定血浆去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)含量。　　2.3.3  血管紧张素转换酶活性测定 　　按马尿酰甘氨酰甘氮酸合成法,使用紫外分光光度计测定血清血管紧张素转换酶(ACE)活性[2]。　　2.4  统计学方法    实验数据用x±s表示,以t检验判断其显著性。3  结果　　3.1  犬心力衰竭动物模型的血流动力学变化    戊巴比妥钠造成犬实验性心力衰竭后,血流动力学指标发生明显变化,20只犬实验结果统计显示：LVP由(115.43±25.10)mm Hg降至(48.00±11.80)mm Hg,下降(58.04±12.37)%；dp/dtmax由(2 938.1±898.6)mm Hg/s降至(750.0±200.0)mm Hg/s,下降(73.11±9.17)%；BP由(128.38±25.48)mm Hg降至(56.19±19.36)mm Hg,下降(54.90±16.41)%；LVEDP由(10.19±2.71)mm Hg升至(15.34±3.27)mm Hg,上升(54.55±27.04)%；R-dp/dtmax由(72.00±9.38)ms增至(83.62±9.37)ms,增加(17.06±12.33)%；HR由(171.29±24.11)次/min减慢至(127.81±17.80)次/min,减慢(24.54±11.50)%；CO由(1.47±0.50)L/min下降至(0.83±0.38)L/min,下降(43.48±22.15)%；LVMCF由(16.59±2.00)mm减至(10.32±2.66)mm,下降(37.66±14.99)%。    结果表明,静脉恒速输入一定浓度戊巴比妥钠,麻醉犬出现典型的心力衰竭,持续时间达3 h以上。　　3.2  心喘胶囊水提液对犬心肌细胞β受体密度的影响　　(见表1)表1  心喘胶囊水提液对犬心肌细胞β受体密度的影响(略)注：与空白对照组比较,★P<0.05；与心衰模前组比较,△P<0.05。　　3.3  心喘胶囊水提液对犬血浆去甲肾上腺素的影响　　(见表2)表2  心喘胶囊水提液对犬血浆NE的影响(略)注：与空白对照组比较,★P<0.05；与本组药前比较,*P<0.05。　　3.4  心喘胶囊水提液对犬血浆肾上腺素的影响　　(见表3)表3  心喘胶囊水提液对犬血浆E的影响(略)注：与空白对照组比较,★P<0.01。　　3.5  心喘胶囊水提液对犬血浆血管紧张素转换酶活性的影响

　　(见表4)表4  心喘胶囊水提液对犬血浆ACE活性的影响(略)注：与空白对照组比较,★P<0.05；与阳性对照组比较,☆P<0.05；与本组药前比较,*P<0.01。4  讨论    中医认为心力衰竭乃本虚标实之证,心气心阳亏虚是其病理基础。由于心气虚,心阳不振,鼓动力减弱,影响血脉运行,久之则致血瘀水停而产生。因而,目前中医对心力衰竭的治疗主要集中在益气、温阳、活血、利水范围,这与西医传统的强心、利尿、扩血管、减轻心脏前后负荷的治疗原则相似。但是,中医认为心的生理功能主要有2个：一是“心主血脉”,一是“心藏神”,两者密切相关,互为因果,功能失调时也相互影响。    心喘胶囊系以本院已故著名老中医岳美中教授和著名中西医结合专家陈可冀院士的经验方“人参三七琥珀末”为基础,结合本院老中医李春生教授的临床体会研制而成,具有益气活血、宁心安神之功效,临床长期用于治疗心力衰竭,疗效满意。本实验表明,心喘胶囊具有明显提高犬心力衰竭模型中衰竭心脏心肌细胞β受体密度,降低血浆NE、E水平的作用；心喘胶囊还具有明显降低血浆ACE活性的作用,与β受体阻滞剂倍他乐克加血管紧张素转换酶抑制剂开博通作用相似。交感神经过度紧张可使肾上腺素能神经末梢释放NE增多,同时,可激活交感-肾上腺系统,促进NE、E的合成与释放。交感神经过度紧张,一方面可引起心肌细胞β受体下调,另一方面可激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS),而RAAS激活后,血管紧张素Ⅰ在ACE转换酶的活化作用下转化为血管紧张素Ⅱ,后者刺激醛固酮分泌。血管紧张素Ⅱ、醛固酮及NE等均为心室重塑的促进因子,心室重塑是导致心力衰竭不断进展的病理生理基础。因此,可以认为心喘胶囊对心力衰竭时神经内分泌过度激活具有调节作用。据此也提出宁心安神法应列为中医治疗心力衰竭的一个重要法则。【参考文献】  　[1] 张幼怡.大鼠α1肾上腺素受体及其亚型影响β肾上腺素受体介导心肌正性变力效应的途径[J].中国药理学与毒理学杂志,1995,9(4)：258－261.　　[2] 金 律,肖素珍.高效液相色谱法测定血浆去甲肾上腺素、肾上腺素及多巴胺[J].中国循环杂志,1988,3(2)：107－109.