血清与卵泡液中血管内皮生长因子在控制性超排卵周期中的变化

作者：任建枝，沙爱国，王厚照，郑仁瑞，李萍，邱慧玲，黄扉    作者单位：解放军第174医院 生殖医学中心， 福建 厦门 361002

【摘要】  目的 本研究通过观察控制性超排卵患者的血清及卵泡液中血管内皮生长因子的变化，探讨血管内皮生长因子与卵泡发育的关系。方法 50 个行体外受精胚胎移植治疗周期的患者为研究对象。分别于月经周期第2天、取卵日抽取静脉血20例，收集取卵日卵泡直径≥18 mm或≤16 mm卵泡的卵泡液各25例，用酶联免疫吸附试验方法测定VEGF的浓度。结果 取卵日血清VEGF水平（116．9±17．1）ng/L较月经第2天的（92．0±17．2）ng/L 明显增高（P＜ 0．0 01）；取卵日卵泡直径≥ 18 mm卵泡液中 VEGF水平 （1630．6±144．8）ug/L 较卵泡直径 ≤16 mm （1475．9±155．5）ng/L 高 （P＜0．05）；20例取卵日卵泡液水平（1492．8±184．9）ug/L 显著高于同期血清的（116．9±17．1）ng/L（P＜0．001）。结论 控制性超排卵周期中血清及卵泡液中VEGF水平均升高，可能参与卵泡发育、卵母细胞成熟。

【关键词】  血管内皮生长因子； 控制性超排卵； 卵泡液； 卵泡发育

　　Changes of Vascular Endothelial Growth Factor in Serum and Follicular Fluid in Coutrolled Ovarian Hyperstimulation Cycles

　　Ren Jianzhi, Sha  Aiguo, Wang Houzhao,Zheng Renrui,Li Ping,Qiu Huiling,Huang Fei

　　(The reproductive medicine center,  the 174th Hospital of PLA,Xiamen, 361002,China)

　　Abstract： Objective   To investigate the regulation of VEGF on follicular fluid and serum to follicular development.Methods  Studied 50 contronlled ovarian hyperstimulation cycles of in vitro fertlization and embryo teansfer (IVFET) patients.Blood samples were collected before stimulation and oocyte retrieval in 20 cycles.Follicular fluid (FF) was obtained in 50 cycles on the day of oocyte retrieval.Enzymelinked immunosorbent assay(ELISA) was used to determine the level of VEGF in all specimens of blood and FF.Results  serum VEGF level increased with growth of follicles in controlled ovarian hyperstimulation. The mean level of VEGF in FF was singficantly higher than that in serum on the day (P＜0.001 ) .The VEGF levels in  FF from follicles where oocytes diameter 18 mm was significantly higher than those from follicles 16 mm(P＜0.05).Conclusion  Follicles are major source of VEGF in the serum.VEGF may play an important role in follicuar development and oocyte maturaton.

　　Key  words： vascular endothelial growth factor;VEGF;controlled ovarian superovulation;follicular fluid;oocyte development

　　卵泡发育是一动态和复杂的演变过程，下丘脑垂体卵巢轴的决定性作用已得到人们的普遍承认，促性腺激素直接参与卵泡发育和排卵。近年来，越来越多的证据表明[1] ，卵巢局部多因子调节系统和网络以旁分泌、自分泌形式参与卵巢周期性优势卵泡选择和排卵。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）作为一种重要的血管生长因子，能特异性促进血管内皮细胞增生。本研究通过测定控制性超排卵患者外周血及卵泡液中VEGF 变化，以了解VEGF与卵泡发育的关系。

　　1  材料与方法

　　1.1  研究对象

　　选择2002年6月—2002年11 月，因输卵管性不孕在我院生殖医学中心接受体外受精—胚胎移植IVFET）的患者50例，年龄24~38岁。应用促性腺激素释放激素激动剂（gonadotrophinreleasing hormone analogue，GnRHa）和(或)促卵泡成熟激素（follicle stimulating  hormone，FSH）或绝经期促性腺激素（human menpausal gonadotrophin,hMG)和(或)绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotrophin,hCG）超促排卵方案。

　　1．2  标本采集

　　(1) 血清：对控制性超排卵中的50例患者中的20例患者于肌注FSH前及取卵日抽取静脉血3 ml，血清于20℃保存待测。(2)卵泡液：按我院常规经阴道   B超引导下取卵，记录卵泡直径大小，卵泡直径≥18 mm定为大卵泡，卵泡直径≤16 mm定为小卵泡。取卵日根据需要在取第1个卵时，特意选择大、小卵泡各25例，留取第1管清亮卵泡液，卵泡液离心，取上清，保存20℃待测。

　　1．3  VEGF测定

　　采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法，试剂盒由深圳晶美生物提供。试剂测定敏感度为＜15 ng/L。

　　1．4  统计学方法

　　结果以±s表示，采用t检查。

　　2  结果

　　2.2  超促排卵周期中血清VEGF水平的变化  在超促排卵过程中，血清VEGF的水平随着卵泡的发育而升高。取卵日血清VEGF水平（116.9±17.1）ng/L较促排卵前的（92.0±17.2）ng/L明显高，P＜0.001。

　　2.2  取卵日血清与卵泡液中VEGF水平比较

　　20例取卵日卵泡液水平（14928±184.9）ng/L显著高于同期血清的（116．9±17．l）ng/L，P＜0．001。

　　2．3  卵泡大小与FF中VEGF水平的关系

　　留取大、小卵泡的卵泡液各25例。取卵日随着卵泡直径的增大，FF中 VEGF水平也升高，卵泡直径≥18 mm卵泡液中 VEGF水平（1630．6±144．8）ng/L较卵泡直径≤16 mm（1475．9±155．5）ng/L高，P＜0．05。

　　3  讨论

　　血管内皮生长因子（VEGF）是内皮细胞特异性的有丝分裂原，能特异地促进血管内皮增生，是相对分子质量为（30~46） ×103的肝素结合双链糖蛋白。其作为一种强效促血管生成剂，参与多种生理活动，并在一些疾病的发病机制中起重要作用。本研究结果显示：在控制性超促排卵周期中，取卵日血清VEGF较促排卵前明显增高。这可能是由于卵细胞没有直接的血供，所需的氧、营养物质及调控因子等均来自卵泡液，卵泡液中的激素、营养物质及调控因子为卵母细胞的发育和成熟提供环境，而卵泡液中的这些物质靠卵泡周围的毛细血管网弥散而来，在卵泡生长发育期间，VEGF 的增高可促使卵泡周期新血管的生成，在卵泡壁细胞层内形成的复杂而密集微血管网，使卵泡从血液中吸收到必要的营养物质而发育成熟。Agrawal等[2]也报道相似的结果，在IVF周期中，随着卵泡的发育，血清VEGF 水平也升高。Agrawal等[3]发现正常月经周期中血清VEGF从也存在卵泡早期（2．4±0．1）ng/L逐渐升高到排卵前（3．0±0．8）ng/L和黄体期（4．4±09）ng/L趋势。卵巢 VEGF周期性的在卵泡和黄体的颗粒细胞和卵泡膜细胞表达，从窦性卵泡到成熟卵泡的颗粒细胞、从中等大小卵泡到排卵前卵泡的卵泡膜细胞上，VEGF 表达强度随着卵泡发育而增强[4]。因此，认为排卵前VEGF升高可能反应了颗粒细胞和卵泡膜细胞的增殖和成熟，可能是颗粒细胞和卵泡膜细胞成熟的指标。本研究结果还显示：在促排卵周期中，卵泡液VEGF水平远远高于同期外周血的VEGF水平。尽管在成人的一些脏器如：肝、心脏等也有VEGF mRNA的表达，但没有证据表明它们与周期性或非周期性血清升高有关，而VEGF 可在卵巢上周期性表达，这说明在促性腺激素使用下，卵巢局部可产生VEGF，卵泡可能是血清VEGF的主要来源。血清及卵泡液VEGF增高的意义在于通过诱导新生血管生成，促使卵泡周期微血管生成，从而使卵泡有机会得到更多的血液中促卵泡成熟激素（FSH）和黄体生成素（LH）的作用而进一步发育。Dudey等[5]发现卵泡大小及卵泡液容量能反应卵子的成熟度。本研究结果显示：取卵日，大卵泡卵泡液中VEGF水平较小卵泡中的明显增高，提示VEGF还参与卵泡的成熟和排卵。VEGF浓度在大卵泡卵泡液升高，一方面可能VEGF使膜层微血管渗透性增高导致血浆外渗，卵泡液快速积聚，与优势卵选择、发育有关[6]。另一方面可能VEGF促进纤溶激活物在内皮细胞上的表达，继而激活纤溶酶，引起卵泡基膜的降解，卵泡破裂和排卵。

【参考文献】  　　[1] Lee A,Christenon L K,Stouffer R L,et al. Vascular endothelail growth factor levels in serum and follicular fluid of patients undergoing in vitro fertilization[J]. Fertil Steril,1997, 68(2):305-311.

　　[2] Agrawal R,Conway G S,Sladkevicius P, et al. Serumvascular endothelial growth factor(VEGF) and Dopplerblood flow velocities in vitro fertilization:trelevance to overian hyperstimulation syndrome and polycystic ovaries[J] .Fertil Steril, 1998,70:651-658.

　　[3] Agrawal R, Conway G S, Sladkevicius P,et al. Serumvascular endothelial growth factor(VEGF) in the normal menstrual cycle:association with changes in ovarian and uterine Doppler blood flow[J].Clin Endocrinol,1999,50:101-106.

　　[4] Otani N,Minami S,Yamota M,et al.The vascular endothelail growth factor/fmslike tyrosine kinase system in human ovary during the menstrual cycle and early pregnancy[J].J Clin Endocrinol Metab, 1999,84:3845-3851.

　　[5] Dubey A K,Wang H A,Duffy P,et al.The correlation between follicular measurements,oocyte morhliology and fertilization rates in an in vitro fertilization program[J] .Fertil Steril, 1995,64(4):787-790.

　　[6] Kamat B R,Brown L F,Mansean E J,et al.Expression of vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor by human granulosa and the lutein cells.Role in corpus luteum development[J].Am J Pathol, 1995, 146:157-165.