Secretagogin在神经内分泌肿瘤组织的表达
发表时间：2009-09-28 浏览次数：629次
作者：林万润 刘雯 马金龙 刘署亮 葛兴平 桂婷 秦小敏 周庚寅 作者单位：1山东大学附属省立医院 病理科 (山东 济南 250012) 2烟台市肿瘤医院 普外科 (山东 烟台 264000) 3山东大学齐鲁医院 病理科 (山东 济南 250012)
【摘要】 目的：通过检测Secretagogin(SCGN)在神经内分泌肿瘤组织中的表达，与神经内分泌肿瘤标志物进行比较， 探讨SCGN作为临床病理诊断神经内分泌肿瘤标志物的可能性。方法：收集神经内分泌肿瘤181例(包括类癌、小细胞肺癌、肾上腺皮脂腺瘤等共14种)和非内分泌肿瘤198例(包括肺肿瘤共39种)。所有标本分别用SCGN、CD56、Svn、CgA和NSE抗体进行免疫组织化学染色。结果：181例神经内分泌肿瘤中115例SCGN表达阳性，而且在类癌、小细胞肺癌、大细胞神经内分泌癌、癌伴神经内分泌分化、胰腺内分泌肿瘤、垂体腺瘤和甲状腺髓样癌中均呈持续阳性表达，阳性率均高于80%，明显高于CD56、CgA、SYN、NSE。而SCGN在非神经内分泌肿瘤中表达仅为3%。结论： SCGN对神经内分泌肿瘤具有高度特异性和敏感性，可能成为神经内分泌肿瘤标志物。
【关键词】 Secretagogin·神经内分泌肿瘤·肿瘤标记，生物学·癌，小细胞
Expression of Secretagogin in neuroendocrine tumors
LIN Wan-run1， LIU Wen1, MA Jin-long1, LIU Shu-liang2, GE Xing-ping2, GUI Ting3, QIN Xiao-min3, ZHOU Geng-yin3
1Department of Pathology, Shandong Provincial Hospital of Shandong University (Jinan 250012, China)
2Department of General Surgery, Yantai Tumor Hospital (Yantai 264000, China)
3Department of Pathology, Qilu Hospital of Shandong University (Jinan 250012, China)
【ABSTRACT】 Objective: To study the possibility of Secretagogin(SCGN) as clinical pathological markers in the neuroendocrine tumors compared with previous neuroendocrine tumour markers. Methods: 181 cases were diagnosed the neuroendocrine tumours,including 14 types in all ,such as carcinoid，small cell lung cancer， adrenal cortical adenoma, etc. All were IHC stained with SCGN，CD56，Syn，CgA and NSE antibody and compared with the results of non-neuroendocrine tumors. Results: 115 cases expressed SCGN positively. The percentages of positive expression were more than 80% in the carcinoid carcinomas, small cell pulmonary carcinomas, large cell neuroendocrine carcinomas, carcinomas with neuroendocrine differentiation, pancreatic endocrine tumours, pituitary adenomas and medullary thyroid carcinomas, respectively. Especially, the percentages of positive expression were 90% in small call pulmonary carcinomas. The positive rate was markedly higher than the ones of CgA,Syn and NSE. Conclusion: SCGN is a new kind of highly specific markers of neuroendocrine tumours, and can be applied to clinical pathology diagnosing of the neuroendocrine tumours.
【KEY WORDS】 Secretagogin·Neuroendocrine neoplasms·Tumor markers, biological·Carcinoma, small cell
神经内分泌肿瘤是一组来源于神经内分泌细胞的异源性肿瘤，神经内分泌细胞广泛存在于机体内分泌组织和器官，也可见于非内分泌器官和肿瘤，可以分泌特殊胺或肽类物质。神经内分泌肿瘤多发生于胃、肠、胰腺，近些年有增多的趋势[1]。目前常用的非激素类神经内分泌肿瘤免疫标志物有神经特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase，NSE)、触突素(synaptophysin，SYN)、嗜铬蛋白A(chromogranin A，CgA)和 CD56等。SCGN是近年来发现的一种钙结合蛋白， 分布于神经、神经节以及胰岛等神经内分泌组织和细胞中。本研究通过检测SCGN在神经内分泌肿瘤和非神经内分泌肿瘤中的表达，探讨其作为临床病理诊断神经内分泌肿瘤标志物的可能性。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2005年6月—2008年10月山东大学齐鲁医院病理科诊断为神经内分泌肿瘤的患者181例，其中男87例，女94例，平均年龄51岁。类癌22例，小细胞肺癌29例，肾上腺皮质腺瘤10例，神经节细胞瘤16例，肾上腺嗜铬细胞瘤18例，小细胞癌(肺以外)13例，大细胞神经内分泌癌10例，癌伴神经内分泌分化14例，垂体腺瘤20例， 胰腺内分泌肿瘤9例， 甲状腺髓样癌6例，甲状旁腺腺癌3例，甲状旁腺腺瘤9例，肾上腺皮质腺癌2例。
198例非神经内分泌肿瘤亦取自同期行病理检查者，其中男106例，女92例，平均年龄47岁。包括来自不同组织的39种非神经内分泌肿瘤(如肺鳞状细胞癌、肺腺癌、胃腺癌、乳腺浸润性导管癌、乳腺小叶癌、甲状腺滤泡腺瘤、甲状腺滤泡癌、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤等)。
1.2 主要试剂与方法 鼠抗人SCGN单克隆抗体由浙江大学医学院病理教研室来茂德教授提供，鼠抗人CgA单克隆抗体和鼠抗人SYN单克隆抗体购于北京中杉生物技术有限公司。鼠抗人CD56单克隆抗体和鼠抗人NSE单克隆抗体购于福州迈新生物技术开发公司。
所有神经内分泌肿瘤标本均行SCGN、CD56、SYN、 CgA和NSE免疫组织化学染色。非神经内分泌肿瘤仅行SCGN免疫组织化学染色。石蜡组织块4 μm连续切片，65 ℃温箱烘烤2 h 后，存放于干燥处备用。载玻片APES防脱处理。采用Envision加强法行免疫组织化学染色，步骤按试剂说明书进行，采用DAB染色。每次染色均设阳性对照，用PBS 代替一抗做阴性对照。
1.3 判定标准 SCGN、CD56、SYN、CgA和NSE阳性染色均表现为细胞膜和(或)细胞质棕黄色颗粒沉淀。阳性表达判断：每张切片随机观察具有代表性的10个高倍视野，计算阳性细胞百分率。未被染成棕黄色视为阴性(-)，阳性细胞≤5%为弱阳性(±)，阳性细胞在6%～为阳性(+)，其中阳性细胞≥25%为强阳性(++～+++)。
1.4 统计学处理 结果利用SPSS软件进行统计分析，采用χ2检验。P≤0.05具有统计学意义。
2 结果
各检测指标在神经内分泌肿瘤中的表达见表1。181例神经内分泌肿瘤中115例SCGN表达呈阳性，阳性率为63.5%。其中类癌、大细胞神经内分泌癌、癌伴神经内分泌分化、垂体腺瘤和甲状腺髓样癌的阳性率分别为81.8%、80.0%、85.7%、80.0%、100.0%，均高阳性率表达;在肾上腺嗜铬细胞瘤、甲状旁腺腺瘤、甲状旁腺腺癌、肾上腺皮质腺瘤、肾上腺皮质腺癌中绝大部分呈阴性表达。18例肾上腺嗜铬细胞瘤中SCGN低表达，阳性率仅为27.8%(图1)。29例小细胞肺癌中SCGN阳性/强阳性表达为26/20例，CD56为27/19例;而SYN、CgA、SYN分别为12/5、14/9、20/9例，且强阳性表达比较低(图2);而在13例肺外小细胞癌中SCGN仅有4/1例。198例非神经内分泌肿瘤中仅有6例SCGN阳性，分别为胃腺癌、结肠直肠腺癌、胰腺腺癌、前列腺腺癌。
3 讨论
SCGN首先在人类胰腺cDNA文库中用免疫筛选法被发现[2-3]，基因定位于染色体6p22.32p22.1，为六聚体左旋蛋白。左旋蛋白由钙感受器和钙缓冲器2部分组成[4]，SCGN属于钙结合蛋白中的感受器家族，可能与调节细胞的增殖和分化有关。SCGN定位于正常黏膜隐窝的神经内分泌细胞核，可在所有肿瘤细胞的细胞质中检测到。SCGN在疾病中的作用机制尚不清楚，但已有报道表明SCGN通过调节脑内钙代谢来作用于各种脑肿瘤[5]，在海马中的表达与抵制阿尔茨海默病中的神经退行性变有一定关系[6]。
人类基因文库分析显示SCGN在胰岛中高表达，说明了这种蛋白在调节激素分泌中的潜在重要性[7]。这种蛋白可以应用免疫组织化学、免疫荧光显微镜等多种方法检测，除了在胰岛高表达外，其在神经、神经节、脑垂体、甲状腺C细胞以及胃肠道和呼吸系统散在分布的神经内分泌细胞中表达阳性;亦有研究表明，SCGN在甲状旁腺和肾上腺髓质染色呈弱阳性但在甲状腺滤泡和肾上腺皮质却呈阴性染色，不同于CgA和SYN[8]。
本研究结果显示，181例神经内分泌肿瘤总体阳性率为63.5%(115/181)，且类癌、小细胞肺癌、大细胞神经内分泌癌、癌伴神经内分泌分化、胰腺内分泌肿瘤、垂体腺瘤和甲状腺髓样癌等阳性率均≥80%，高于其他几种标志物。而39种198例非神经内分泌肿瘤，阳性率仅为3%(6/198)，说明SCGN对神经内分泌肿瘤有高度特异性，可用于临床病理诊断。29例小细胞肺癌，SCGN阳性率为89.7%，CD56阳性率为93.1%，二者均高于SYN(41.4%)、CgA(48.3%)和NSE(69.0%)，差异有统计学意义，说明SCGN和CD56是小细胞肺癌敏感性强的标志物，但由于CD56在神经内分泌组织也有广泛的免疫反应，SCGN是优于CD56的小细胞肺癌标志物。SYN、CgA、NSE在小细胞肺癌表达率不高，即使联合诊断也有一部分小细胞肺癌呈阴性[9-11]。
总之，由于SCGN对神经内分泌肿瘤具有高度特异性和敏感性，可能作为神经内分泌肿瘤尤其是小细胞肺癌的标志物。如果能与CD56联合检测，或将神经内分泌肿瘤的临床病理诊断提高到一个新的阶段。
【参考文献】 [1] Modlin IM, Lye KD, Kidd MA. 5-decade analysis of 13715 carcinoid tumors[J]. Cancer, 2003,97(4)∶934-959.
[2] Taupenot L, Harper KL, O’Connor DT. The chromograninsecretogranin family[J]. N Engl J Med, 2003，348(12):1134-1149.
[3] Wagner L, Templ E, Reining G, et al. Culture of human insulinoma cells: development of a neuroendocrine tumour cell- and humanpancreatic islet cell-specific monoclonal antibody[J]. Endocrinol, 1998,156(3):469-476.
[4] Berggard T, Miron S, Onnerfjord P, et al. Calbindin D28k exhibits properties characteristic of 50172 practolol Ca2+ sensor[J]. Biol Chem, 2002,277(19):16662-16672.
[5] Pipp I, Wagner L, Rǒssler K, et al. Secretagogin expression in tumours of the human brain and its coverings[J]. APMIS, 2007,115(4):319-326.
[6] Attems J, Preusser M, Grosinger-Quass M, et al. Calcium-binding protein secretagogin-expressing neurones in the human hippocampus are largely resistant to neurodegeneration in Alzheimer's disease[J]. Neuropathol Appl Neurobiol, 2008,34(1):23-32.
[7] Cras-Meneur C, Inoue H, Zhou Y, et al. An expression profile of human pancreatic islet mRNAs by serial analysis of gene expression (SAGE)[J]. Diabetologia, 2004,47(2):284-299.
[8] Maode Lai, Bingjian Lü, Xiaoming Xing, et al. Secretagogin, a novel neuroendocrine marker, has a distinct.expression pattern from chromogranin A[J]. Virchows Arch, 2006, 449(4):402-409.
[9] Guinee DG Jr, Fishback NF, Koss MN, et al. The spectrum of immunohistochemical staining of small-cell lung carcinoma in specimens from transbronchial andopen-lung biopsies. Am [J]. Clin Pathol, 1994,102(4):406-414.
[10] Patriarca C, Pruneri G, Alfano RM, et al. Polysialylated N-CAM, chromogranin A and B, and secretogranin II inneuroendocrine tumours of the lung[J]. Virchows Arch, 1997,430(6):455-460.
[11] Senden NH, Timmer ED, de Bruine A, et al. A comparison of NSP-reticulons with conventional neuroendocrine markers in immunophenotyping of lung cancers[J]. Pathol, 1997,182(1):13-21.
