玻璃珠微柱法与凝聚胺法在疑难配血中的应用分析

　　玻璃珠微柱卡检测技术是近年来由美国强生公司开发用于输血前的血型与配血检验方法。我院血库自2010年2月～2012年10月对住院患者输血前采用美国强生OrthoBivue血型诊断系统，采用玻璃珠微柱法进行血型复检、抗体筛查及交叉配血试验，现报告如下。

1　资料与方法

11　一般资料：本组1800例患者中男1000例，女800例;其中0～1岁50例，1～15岁100例，16～35岁450例，36～55岁700例，55以上500例，均为我院住院患者。

12　试剂：玻璃珠微柱血型卡(抗A、抗B、Rh抗D)、玻璃珠微柱抗人球蛋白IgG、抗C3d多特异卡、ORTHOBLISS低离子液、离心机、孵育箱均由美国强生公司提供。A、B、O反定型细胞，抗筛谱细胞从上海血液制品研究所购置。凝聚胺套装试剂由珠海贝索公司提供。

13　检测方法

131　血型鉴定：①凝聚胺法正定型：取二支试管标记A、B，各管加入被检者5%红细胞悬液2滴(100μl)，依次加入抗A、抗B标准血清，低离子强度液06ml及2滴(100μl)凝聚胺溶液，4000/min离心15s，取出分别加入2滴(100μl)再悬液，轻轻摇动观察结果;反定型：取三支试管标记A、B、O，各管中加入100μl患者血清，依次加入100μl5%A、B、O反定标准红细胞，低离子强度液06ml及2滴(100μl)凝聚胺溶液，4000/min离心15秒，取出分别加入2滴(100μl)再悬液，轻轻摇动观察结果;②玻璃珠微柱法：ORTHOBLISS50μl、08%患者红细胞悬液分别加入博唯优血型正定卡中;专用离心机离心5min，判读结果。

132　不规则抗体筛查：①玻璃珠微柱法：三支微柱中依次加入ORTHOBLISS50μl、谱细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ50μl(08%);各加入50μl被检者血浆;37℃ 孵育10min，专用离心机离心5min，判读结果。②三支试管中依次加入谱细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 50μl(08%);各加入患者血浆100μl、低离子强度液06ml及2滴(100μl)凝聚胺溶液，4000/min离心15s，取出分别加入2滴(100μl)再悬液，轻轻摇动观察结果。

133　交叉配血玻璃珠微柱法：主侧微柱加入ORTHOBLISS50μl、08%献血者红细胞10μl及50μl受血者血浆;次侧微柱加入ORTHOBLISS50μl、08%受血者红细胞10μl及50μl献血者血浆;37℃孵育10min，专用离心机离心5min，判读结果。

134　凝聚胺交叉配血：①主侧管加入100μl受血者血清及100μl、5%献血者红细胞;次侧管加入100μl献血者血清及100μl、5%受血者红细胞。②主、次侧管分别加入06ml低离子强度液及2滴(100μl)凝聚胺溶液，混匀后易4000n/min离心15s，取出分别加入2滴(100μl)再悬液，轻轻摇动观察结果。

2　结果

血型鉴定共900例，正反定型不一致10例(其中年龄0～1岁7例，1～15岁1例，55岁以上2例);其中Rh(-)5例、P(+)1例。不规则抗体筛查共900例，其中阳性11例(其中多次输血者7例无输血史或不详者4例)，抗-E1例。交叉配血玻璃珠微柱卡交叉配血1050例，其中主侧不合而次侧良好1例，主侧良好而次侧不合2例，主、次侧均凝集1例(此例为慢性肾炎伴肾功能衰竭，确定是自身凝集素引起的不配合)，此4例血样，其中3例盐水法及凝聚胺法交叉配血主次侧均不凝集。

3　讨论

玻璃珠微柱凝集技术作为一项免疫学检测技术，是美国强生医药公司开发独创的用于血型及配血检测技术，我国近10年来也逐渐被各医院及供血机构广泛使用。玻璃珠微柱法其基本原理是利用玻璃珠微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂(抗-IgG和抗补体C3)[1]，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，玻璃珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。玻璃珠微柱凝集技术血型正定型检测敏感性高、特异性强、结果准确、易于观察、结果能够较长时间保存，影响因素少，尤其适用于抗原性较弱的婴儿红细胞抗原检测[2]。原因在于婴幼儿的ABO血型抗原仅有成人的1/4，恶性肿瘤基因突变导致的血型变异，骨髓瘤、白血病、慢性肾炎等免疫性疾病容易产生免疫抗体IgG，都会造成血型鉴定和交叉配血困难。用凝聚胺法鉴定血型时，不易观察判定结果，甚至需要借助显微镜观察，敏感性低。同时玻璃珠微柱凝集技术可作血型复检、疑难交叉配血及新生儿血型检测的有效方法[3]。本试验中正反定型不一致及其年龄分布也反映了这一现象。综上所述，玻璃珠微柱凝集技术安全性高、灵敏度强，其充分结合了免疫血清学技术与玻璃珠分子筛选技术的优点，使得操作过程得以大大简化，结果准确度高。其与凝聚胺等配血法相比灵敏度更高、假阴性率更低，可作为血型鉴定、抗体筛查和交叉配血的常规指导性试验方法。

4　参考文献

[1]　汪德清，于　洋.输血相容性检测实验室质量控制与管理[M].北京：人民军医出版社，2011：210-218.

[2]　李　勇，杨贵贞.人类红细胞血型血清学实用理论与实验技术[M].北京：中国科学技术出版社，1999：251.

[3]　陈才生，王雷萍，翁　彬，等.新生儿脐血ABO血型正反定型及交叉配血实验结果分析[J].现代检验医学杂志，2007，22(1)：61.