抗-HIV临界值质控血清的制备与应用

　　作者：黄晓群，庞栋 作者单位：1.广西中医学院附属瑞康医院，广西南宁530011;2.广西南宁市中心血站，广西南宁530000

　　【摘要】 目的 探讨抗-HIV临界值质控血清实验室制备和应用的简易实用方法。方法 将经确认的高效价抗-HIV阳性血清用小牛血清按1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64稀释并测定OD值，计算其平均值()、标准差(s)及变异系数(CV)。结果 20个测定值S/CO值的相关值=1.91，s=0.155，CV=8.1%。结论 实验室自制抗-HIV临界值质控血清可用于监测抗-HIV试验的稳定性、重复性、准确性。

　　【关键词】 抗-HIV 质量控制 分析样品制备方法

　　目前，ELISA是公认的抗-HIV较好的筛选方法[1]，在日常抗-HIV检测过程中，要求设空白、阴阳性对照且通过阴阳性对照值计算出临界值(Cut off)，据此判断阴阳性结果。但在实际工作中，抗-HIV的检测受诸多因素影响，有系统误差(包括试剂盒质量问题、移液器和酶标仪的准确性、水浴箱及环境温度的波动等)和随机误差(加样不准甚至漏加或误加等)，导致检测结果出现较大偏差。因此，在实验中再加入一个临界值质控血清对实验进行动态质控，建立较为完善的质量控制体系是确保实验质量关键步骤。笔者采用阳性对照血清自制临界血清，在实践中取得了较为满意的效果。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 试剂

　　抗-HIV ELISA试剂盒，抗-HIV阳性血清由北京万泰生物药业有限公司提供，批号：20071201。

　　1.1.2 仪器

　　美国宝特Bio-Tek ELX800型酶标仪，ELX50自动洗板机，电热三用水箱，德国Eppendorf加样枪。

　　1.2 方法

　　将高效价抗-HIV阳性血清用小牛血清按1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64稀释，并测定OD值，以超过试剂盒临界(Cut off)值约1倍的稀释度(1∶16)作为稀释浓度对阳性对照品进行稀释。将稀释好的血清进行分装，每支200μl，注明名称批号置于-20℃冰箱保存，每天检测样品前取一小支融化后充分混匀。严格按试剂盒说明书操作，取连续20天，得到20个OD值和Cut off值计算S/CO值的平均值()和标准差(s)及变异系数(CV)，对数据进行异常值检验，如果发现异常值，将此数据剔除，再重新计算余下数据的和s。

　　2 结果

　　2.1 计算20个测定值S/CO值的相关值=1.91，s=0.155，CV=8.1%。

　　2.2 绘制质控图

　　用Levey-Jennings质量控制方法，绘制质控图[2]。以S/CO值为纵坐标，以次数或日期为横坐标，建立以为中心线，以(±2s)为警告线(用红线画出)，以(±3s)为失控线(用蓝线画出)，作出该批次试剂的质控图框架，每天将随患者样本测定的质量控制物结果标在质量控制框架上，将它们连成线即为质量控制图。

　　2.3 实验质控的建立

　　在每次实验中，严格按试剂盒说明书操作，设定空白、阴、阳性对照孔，将临界值质控血清与实验标本一同测定。实验结束后算出质控血清的S/CO值，在质控图上找到其相应位置，如果该点落在(±2s)范围内，本次实验有效，可发出报告。如果在(±2s)范围外，则认为存在显著性误差，本次实验无效，查找原因后重做本实验。

　　3 讨论

　　近年来我国发现的HIV感染者和AIDS患者逐年增加，《中国遏制艾滋病行动计划(2001～2005)》明确指出，我国目前已经进入HIV感染的快速增长期[3]，且艾滋病已由高危人群向普通人群扩散。为防漏检误检建立外部质量控制尤为重要。在商品试剂盒内仅配有阳性、阴性对照样品(内部对照)是不够的。为此，建立外部质控(外部对照)以监测本次试验的稳定性、重复性、准确性及提示样品处于临界状态时的检验操作情况十分必要。由于ELISA法灵敏度高，在加样、温育、洗涤、显色读数等步骤中出现任何误差，则可使临界值结果发生较大变化，而同批样本可发生同样的变化，特别是OD值靠近Cut off值或一些处于灰区的样本有可能被错定为假阳性或假阴性[4]。特别要注意向负值偏移的同批样品，可能导致假阴性结果，造成漏检。作为血站初筛抗-HIV实验室检测质控的建立，笔者在最佳条件下获得20个OD值，这些值呈正态分布，其变异系数为8.1%，说明该血清具有良好的重复性，(±s)(1.76～2.07)可信区间为68%，(±2s)(1.600～2.220)可信区间为95%，(±3s)(1.445～2.375)可信区间为98%。选择(±2s)作为限定外部对照的可接受范围，落在(±2s)以外的外质控值将认为实验失效。这一质控标准仅对该批试剂是确定的，在改变批号以后必须重新使用该血清制定相应的质控标准。

　　【参考文献】

　　[1]邹雄.关于免疫学质控问题的讨论[J].中华医学检验学杂志，1992，16(2):218.

　　[2]郑怀竞，韩松.临床检验ELISA指南[M].北京:北京医科大学、中国协和医科大学出版社，1994:53.

　　[3]王德文，刘赴平.东莞地区无偿献血者HIV感染状况[J].临床输血与检验，2005，7(1):53-54.

　　[4]文进，张斌，吉天鹏，等.ELISA法抗-HIV灰区标本的再检测分析[J].临床输血与检验，2005，7(2):121.