肝硬化组织转化生长因子β -1(TGFβ -1)的表达及临床意义

　　作者：蒋莹,赵金仙　　作者单位：新疆医科大学第二附属医院感染科， 新疆 乌鲁木齐

　　【关键词】 肝硬化

　　肝硬化是绝大多数慢性肝脏疾病终末期表现,肝硬化时纤维结缔组织的形成，是各种不同致病因子导致细胞外基质(ECM)合成与降解的失衡所致。在此过程中多种细胞因子参与了这个过程，其中组织转化生长因子β -1(TGFβ -1)起到了相当重要的作用,参与了肝硬化的发生发展过程。因此TGFβ -1与肝硬化关系的研究越来越受到关注。我们采用免疫组织化学技术对肝硬化活检肝组织进行了TGFβ -1蛋白的检测，以进一步探讨TGFβ -1在肝硬化组织中的表达情况及意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 标本

　　为新疆医科大学第二附属医院病理科1998～2005年存档蜡块，共52例。均经病理证实为结节性肝硬化。男性37例，女性15例，平均年龄45岁。病原学诊断：乙型肝炎46例，丙型肝炎6例。所有标本均经10%Formalin固定，石蜡包埋。另10例为正常肝组织对照，系尸检及外伤手术后获得。

　　1.2 方法

　　研究用蜡块切成4 μm厚,连续切片5张，在55℃烤箱内烤3 h以上,分别进行常规和免疫组织化学染色。免疫组织化学染色方法采用S-P法(链霉菌抗生物蛋白-过氧化酶联接法)。

　　1.1.2 试剂

　　一抗为兔抗人TGFβ -1多克隆抗体，购自福州迈新生物公司的即用型抗体。采用福州迈新生物公司的即用型免疫组织化学超敏(Ultrasensitive)SP试剂盒。

　　1.3 染色结果判断

　　每组设阴性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。TGFβ -1表达均位于胞浆内，有明显棕黄色颗粒状染色为阳性，免疫组化染色阳性细胞分4级。随机选择5个高倍镜视野观察，计数阳性汇管区及纤维隔数目，无棕黄染色为(-)，<10个为(+)，10～20为(++)，>20个为(+++)。

　　1.4 统计学处理

　　应用SPSS11.0软件进行统计学分析，采用秩和检验的Wilcoxon方法，检验水准α=0.05。

　　2 结果

　　TGFβ -1蛋白阳性表达均位于肝硬化组织的肝细胞胞浆中，呈棕黄色颗粒状。52例肝硬化组织中TGFβ -1蛋白表达强阳性32例(61.54%)，中等阳性表达10例(19.23%)，弱阳性表达10例(19.23%);10例正常肝组织中阳性表达3例(30%),两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。

　　3 讨论

　　在正常的肝脏组织中存在着细胞外基质(ExtracellularMatrix,ECM)的合成和降解的动态平衡。肝硬化时，肝内结缔组织的增生与沉积是各种不同的致病因子，导致ECM质和量的改变、合成、降解失衡。纤维组织形成不是一个静止过程，而是一动态过程。肝纤维化是慢性肝病共有的病理改变,细胞外基质合成增多,降解相对不足沉积在肝内引起肝硬化。肝星状细胞(Hepatic Stelate Cell,HSC)激活是肝纤维化发生的中心环节,而细胞因子在HSC的激活、调节ECM产量方面发挥着重要作用。在肝硬化发生过程中, TGFβ -1可使HSC转化为肌成纤维细胞,并分泌胶原纤维,起到关键作用[1]。

　　正常肝组织一般无或仅有极少TGFβ -1存在。在慢性肝炎、肝硬化组织中,由于病毒持续存在,引起免疫损伤和炎症反应,刺激间质细胞分泌TGFβ -1, TGFβ -1是最强的促纤维生成的细胞因子,它不但参与肝星状细胞(HSC)活化表型的维持,而且刺激活化的HSC合成、分泌大量的ECM及ECM降解蛋白酶抑制剂,抑制ECM降解,使ECM生成大于降解,增加ECM沉积。TGFβ -1作用的结果是ECM的合成增多,肝纤维化肝硬化形成[2,3]。

　　本研究结果显示，52例肝硬化患者肝组织中TGFβ -1蛋白表达的阳性率为100%，检测结果表明，肝硬化患者肝组织中存在着TGFβ -1蛋白表达。有文献报道，在慢性肝病发展过程中，TGFβ -1的升高幅度随着肝病进展而呈升高趋势，且升高程度与肝组织学的改变有正的相关性[4]。已有实验表明[5],在估计肝硬化程度时,应同时检测透明质酸(HA)和TGFβ -1。由此可见TGFβ -1在肝硬化形成过程中起了重要的作用。TGFβ -1水平可以反映肝硬化程度,寻找拮抗TGFβ -1的方法阻止肝硬化形成是值得探索的途径。因此，TGFβ -1不仅可作为肝硬化诊断及预后指标，而且为今后以TGFβ -1为靶点的肝硬化治疗提供必要的理论依据。

　　【参考文献】

　　[1]李 石.肝纤维化发生机制[J].中华消化杂志,1999,19(1):48-50.

　　[2]Tsushima H, Kawata S , Tamura S , et al. Reduce TGFβ -1 levels in patient with chronic hepatitis C after INFα Therapy association with regression of hepatic fibrosis[J]. J Hepatol ,1999,30:1.

　　[3]Schufan GG , Bachem MG . Alpha 2-macroglobulin reduces paracrine- and auticrine-stimulated matrix synthesis of cultured rat hepatic stallate cells[J]. Eur J Clin Invest , 1999,29:519.

　　[4]张愚，屈文东，黄 华.bFGF及TGFβ -1在实验性肝硬化中的免疫组化研究[J].胃肠病学和肝病学杂志,2005,14(1):40-44.

　　[5]罗瑞虹,杨绍基,谢俊强,等.肝纤维化血清五项标志物的诊断意义[J].中华肝脏病杂志,2001,9(3):148-150.