肝硬化患者转化生长因子和激活素A的检测及其意义

　　作者：王玉芳,杨广民,马寅芙,李首庆,方艳秋　　作者单位：长春市中心医院， 吉林 长春

　　【摘要】目的 探讨肝硬化患者血清转化生长因子(TGF)β1及血清激活素A的变化及其意义。方法 经病史、临床生化、B超检查确诊的35例肝硬化患者，并以35名健康人作健康对照，应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定其血清TGFβ1及激活素A的含量。结果 健康对照组血清TGFβ1〔(31.9±11.9)ng/ml vs (53.2±18.7)ng/ml〕及激活素A含量〔(0.82±0.36)ng/ml vs(1.27±0.84)ng/ml〕明显低于肝硬化组(P<0.05)。结论 测定肝硬化患者血清TGFβ1及ACT含量的变化，对肝硬化患者的早期诊断、治疗及预防有重要意义。

　　【关键词】 肝硬化 酶联免疫吸附测定 转化生长因子 激活素A

　　转化生长因子(TGF)β1与血清激活素A是两个重要的细胞因子〔1，2〕，它们具有促进间质细胞增殖、分化，增加细胞外基质(ECM)的沉积，抑制其降解的作用。本文拟探讨肝硬化患者血清TGFβ1及激活素A水平变化及其在肝纤维化形成过程中的作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 对象

　　选取2007年1～11月长春市中心医院住院肝硬化患者35例。男27例，女8例，年龄55～73(平均62)岁。全部病例均经临床明确诊断，包括B超、实验室指标，部分病例经磁共振和肝活检证实。排除恶性肿瘤、慢性肾功能不全、甲状腺功能亢进、外伤、高血压，近3个月内使用激素患者。其中乙型肝炎后肝硬化30例，丙型肝炎后肝硬化3例，酒精性肝硬化患2例。以35名健康人作对照，男25例，女10例，年龄50～70(平均61)岁。

　　1.2 主要试剂与仪器

　　TGFβ1 和激活素A ELISA试剂盒(北京鼎国生物有限责任公司);VICTOR31420多标微板测试仪(美国PE公司)。

　　1.3 方法

　　①标本收集。被检者晨6时空腹采静脉血，分2管，一管立即分离血清，-20℃保存，待测TGFβ1。另一管置37℃水浴30 min，1 500 r/min离心5 min，分离血清，-80℃冻存，待测激活素A。②标本检测。 空白、5个标准品做2个复孔、标本(患者/对照)做3个复孔;在相应孔中分别加入100 ml的标准品和血清，空白孔不加;用封口膜将条板封好，置37℃温育60 min;取出板条，甩干，每孔加入配置好的洗涤液200～300 ml，停留20～30 s，甩干;每孔加入TGFβ1 /激活素A抗体100 ml，空白孔不加;用封口膜将板封好，置37℃温育30 min;反应后再次洗涤同上;每孔加入酶联物100 ml，空白孔不加;封口膜封好，置37℃温育30 min，反应后再次洗涤拍干;每孔加入显色剂A和B各50 ml，于37℃避光显色15 min后，尽快加入50 ml终止液于各孔中。在多标微板测试仪上选定450 nm波长，测吸光度值。

　　1.4 统计学处理

　　数据用x±s表示，采用SPSS13.0统计软件进行t检验。

　　2 结 果

　　肝硬化组血清TGFβ1含量〔(53.2±18.7 ng/ml)〕明显高于对照组〔(31.9±11.9)ng/ml〕;肝硬化组血清激活素A含量〔(1.27±0.84)ng/ml〕明显高于正常组〔(0.82±0.36) ng/ml〕(均P<0.05)。

　　3 讨 论

　　TGFβ1为双硫键结构的二聚体碱性蛋白，分子量为25 kD，体内各种细胞如淋巴细胞、血小板、巨噬细胞等均可合成与分泌TGFβ1。激活素A是由两个β亚基构成的同源二聚体糖蛋白激素，是转化生长因子超家族成员之一。近年来关于细胞因子在肝纤维化发病机制方面研究极为活跃。无论什么原因的肝纤维化，最终肝星状细胞(HSC)的激活是关键。而HSC的激活与诸多的细胞因子有关。而TGFβ1与激活素A是两个重要的细胞因子。它们具有促进间质细胞的分化与增殖，增加ECM沉积，抑制其降解的作用，是肝纤维化形成过程中两个重要的调控因子。特别是TGFβ1是促进肝脏纤维组织增生的关键因子〔1〕，在肝纤维化的过程中起绝对作用。正常情况下。细胞因子处于一种网络平衡状态，共同维持肝脏内环境的相对稳定，当肝脏受到病毒、炎症、化学毒素损伤时，网络平衡被打破，使肝内炎症细胞、星状细胞、内皮细胞、枯否细胞及其他间质细胞自分泌或旁分泌TGFβ1，非活性的TGFβ1被炎症环境中的各种酶和细胞因子激活，再以纤维蛋白溶解酶介导的自身调节机制，刺激上述细胞进一步产生，形成逐级放大的效果，导致TGFβ1的大量生成和激活。激活素A与TGFβ1的功能大体相同，它们均可通过诱导肝细胞凋亡抑制肝细胞再生，活化肝星状细胞，增加细胞外间质的合成，抑制ECM降解，调节ECM受体的表达，促进肝纤维化及肝硬化的发生与发展〔3〕。临床可通过检测TGFβ1及激活素A的水平，可直接了解肝纤维化的程度〔4，5〕。肝纤维化是肝硬化发生前奏和必经的中间环节，所以测定患者血清TGFβ1与激活素A的水平可能是早期诊断肝硬化的一个良好的指标〔6〕，这对于早期诊断肝纤维化大有益处〔7〕。另外，也为早期肝纤维化的治疗开辟了一个新的用药途径，可以选择拮抗TGFβ1及激活素A的药物来治疗和阻止肝纤维化的发生和发展，对防治肝硬化具有重要的意义，减少了病理检查给患者带来的痛苦。

　　【参考文献】

　　1 Ray S,Broov SL，Vaishnav Y.Transforming growth facor beta in hepatitis C virus infection in vivo and vitro findings〔J〕.J GastroenteroI Hepatol,2003;18(4):393403.

　　2 Kogure K，Zhang YQ，Maeshima A,et al.The role of activin and transforming growth factorbeta in the regulation of organ mass in the rat liver〔J〕. Hepatology,2000;31(4):91621.

　　3 胡 义,王庆林.肝纤维化发病机制的研究进展〔J〕.国际病理科学与临床杂志,2007;27(1):4852.

　　4 Feng XH，Derynck R.Specificity and versatility in TGFβ1 signalling through Smads〔J〕.Annu Rev Cell Dev Biol,2005;21(7):65993.

　　5 吴义春,吴 强,杨 雁,等.大鼠中晚期纤维化肝组织NFKB、TGFβ1及其Ⅰ型受体表达的改变〔J〕.安徽医科大学学报,2004;39 (5)：3245.

　　6 Lebrin F，Deckers M，Bertolino P,et al.TGFβ1 receptor function in the endothelium〔J〕.Cardiovasc Res,2005;65(5):599608.