慢性应激抑郁复合皮肤创伤对大鼠行为及体重的影响

作者：周明芳 【关键词】  皮肤损伤；动物模型

　　摘要：  目的  观察慢性应激抑郁复合皮肤创伤对大鼠行为及体重的影响，探讨建立躯体损伤复合心理应激动物模型的可行性和有效性。方法  SD大鼠38只，随机分为对照组（正常对照组、单纯创伤组）和模型组（创伤复合抑郁组、抑郁复合创伤组），将9种不同的应激刺激随机作用于模型组动物18天后，采用旷场实验观察大鼠的情绪及行为变化，并比较实验前和建模后大鼠体重的变化情况。结果  （1）模型组大鼠与对照组相比，水平运动得分、垂直运动得分、总得分均显著降低，旷场实验箱中央格停留时间明显延长（P<0.01，P<0.05），大小便次数减少（P<0.05），修饰次数和修饰时间各组间无统计学意义（P>0.05）；（2）模型组大鼠在18天的慢性刺激过程中，体重增长缓慢，有的甚至不升反降，与对照组相比差异非常显著（P<0.01）。结论  该模型是较稳定的皮肤创伤复合心理应激动物模型。

　　关键词：皮肤损伤；动物模型

　　Effects of chronic stressinduced depression combined with skin injury　on behaviour and body weights of rats

　　ZHOU Mingfang,FENG Zhengzhi,CHENG Tianmin

　　（Institute of Combined Injury,Third Military Medical University,Chongqing  400038,China ）

　　Abstract:  Objective  To observe the effects of chronic stressinduced depression combined with skin injury on the behaviour and body weights of rats,and to investigate the feasibility and availability of establishing an animal model of traumatic injury combined with mental stress.Methods  SpragueDawley rats were randomly allocated to 4 groups as follows: the control,single wound,wound plus depression,depression plus wound.Nine different stimulus were played to the rats for 18 days,then the changes of rats’ mood,behaviour and body weights were observed in the condition of open field test.Results  (1)Most indexes of the open field test in the model groups changed significantly as compared with that of the control group: crossing score,rearing score and total score were decreased significantly（P<0.01）.Latency time were obviously extended(P<0.05）.The frequency of urination and defecation were decreased（P<0.05）.The rats’ action frequency and time were not statistically significant in all the groups（P>0.05）.(2)The body weights of the model group increased slowly as compared with the control groups,but decreased in some rats.Conclusion  The model established in this study is ideal  for the study on the combined effect of skin wound combined with psychotic stress.

　　Key words：skin injury;animal models    　　随着医学模式的转变，心理、社会因素对健康的影响受到广泛重视。临床发现，精神病患者的创伤愈合延缓； 焦虑、抑郁患者创伤愈合时间可4倍于正常人群［1］，但目前国内外这方面的研究报道极少。由于伦理道德和方法学上的种种限制，要深入探讨心理因素，尤其是焦虑、抑郁对创伤修复的影响、作用机制与治疗护理策略，许多实验不能也不应以病人作为试验对象。因此，建立有效而稳定的慢性应激复合躯体创伤动物模型是开展相关研究所不可缺少的。本研究旨在探讨建立此模型的可行性与有效性。

　　材料与方法

　　1  实验动物及分组体重170~200g，健康SpragueDawley雌性大鼠38只，由第三军医大学野战外科研究所实验动物中心提供，随机分为正常对照组、单纯创伤组、创伤复合抑郁组及抑郁复合创伤组。前2组为对照组，喂养方式为群养，给予自然光照，自由饮食；后2组为模型组，均为单只饲养。

　　2  皮肤创伤的制作10g/L戊巴比妥钠（30mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠，电动推剪剃净背部毛发后，常规消毒背部皮肤，采用自制圆形不锈钢打孔器切除背部直径约2.2cm全层皮肤，裸露创面。

　　3  模型制作创伤复合抑郁组致伤后次日与抑郁复合创伤组一同开始接受随机安排的慢性刺激18天。包括：电击足底（36V交流电，每隔1分钟刺激1次，每次刺激10秒，共20次）、4℃冰水游泳5分钟或45℃热刺激5分钟（创伤组不接受冰水游泳）、水平摇晃15分钟、夹尾1分钟；禁食24小时、禁水24小时、束缚24小时、昼夜颠倒共9种刺激，平均每种刺激不超过2次。除刺激顺序随机安排外，每天的刺激时间也各不相同，使刺激具有不可预见性。抑郁复合创伤组则在完成18天慢性刺激后，于第19天行皮肤造创，进行其他指标的观察。

　　4  观察指标

　　4.1  旷场试验  根据文献［2］采用自制旷场实验观察箱（100cm×100cm×50cm），箱壁及箱底均为银灰色，箱底用墨线分为25个20cm×20cm的方格。模型组刺激18天后，各组分别于第19天行旷场试验（正常对照组适应性饲养1周后进行）。抓住鼠尾根部三分之一处提起，轻轻放入旷场实验箱正中格并开始记时，记录5分钟内大鼠的活动情况。设2位观察者分别观察记录不同指标。以穿格次数（四爪均进入的方格方可记数）为水平活动得分，直立次数（两前爪腾空或攀附箱壁）为垂直活动得分，记录中央格停留时间（沿墙格为外周格，其余为中央格）、修饰次数（理毛、洗脸、舔足的次数）、修饰时间和排便粒数、排尿次数等。每只大鼠试验完毕被取出后，清洗旷场周壁及底面，以免上次动物余留的信息影响下次测试结果。

　　4.2  大鼠体重  分别在实验的第1及第19天测量并记录各组大鼠体重的变化情况。

　　5  统计学处理采用SPSS10.0统计软件行单因素方差分析、t检验和秩和检验，数据资料用±s表示，P<0.05为有统计学差异。

　　结  果

　　1  各组大鼠旷场试验水平、垂直运动得分比较  结果如表1所示。模型组大鼠水平运动得分、垂直运动得分、总得分均显著低于对照组，差异非常显著(P<0.01) ，而模型组间比较，差异无显著性（P>0.05）。正常对照组虽各项得分均高于单纯创伤组，但并无统计学意义（P>0.05）。

2  各组大鼠旷场试验中央格时间、修饰次数、修饰时间、大小便次数比较结果如表2所示。模型组与对照组相比，中央格停留时间显著延长（P<0.01，P<0.05）、大小便次数明显减少（P< 0.05），而对照组及模型组内部间的比较差异无显著性，且修饰次数和修饰时间在各组间均无统计学意义（P>0.05）。

　　3  各组大鼠体重变化情况结果如表3所示。刺激前各组大鼠体重无显著差异（P>0.05），模型组大鼠在18天的慢性刺激过程中体重增长缓慢，有的甚至不升反降，与对照组相比差异非常显著（P<0.01）。对照组组间自身前后对照差异有显著性（P<0.01），而模型组大鼠的体重在刺激前后差异无统计学意义（P>0.05）。各组刺激后与刺激前体重差值（第19天-第1天）的秩和检验结果显示，模型组大鼠的体重增长显著差于对照组（P<0.01）。

　　表1  各组旷场试验水平、垂直运动得分比较　略

　　表2  各组中央格时间、修饰次数/时间、大小便比较　略

　　表3  各组大鼠体重变化情况　略

　　讨  论

　　应激是机体受到各种内外环境因素的刺激后产生的全身非特异性反应，慢性应激一般是指＞24小时的持续或反复应激［3］。由于慢性应激可模拟抑郁症发生的环境诱因，致使动物的行为特征改变、血浆皮质激素升高等均与内源性抑郁的症状相似，所以用慢性应激制作抑郁模型具有较高的应用价值［4］ 。自1981年Katz等［5］提出慢性应激模型后，得到了广泛应用并有了较大发展。但以往研究中所采用的应激模型多为单一形式的应激，如束缚、强迫游泳等。为避免动物对同一应激原产生适应，本研究采用了多因素的慢性应激模型，每天随机将不同的应激刺激作用于动物，使其不可预测应激的发生时间和类型，与人类抑郁症中慢性、低水平的应激源促进抑郁症的发生及发展的机制更为接近。如何评定动物情绪，目前尚无统一意见。旷场试验可较为经典地反映大鼠在新环境的探究行为及情绪，其可用来测试动物中枢神经系统的“兴奋”或“抑郁”状态［6］。本实验正是采用此法观察大鼠的行为改变情况。中央格停留时间是动物对空间认知能力的反映［7］，正常动物会避开空旷环境，迅速离开中央格，沿周边活动。如果对新环境的认知能力差，则大鼠停留在中央格的时间延长。水平得分反映动物的兴奋性，垂直得分反映动物的探索行为，而修饰则反映动物对新环境的满意程度，排便反映动物的紧张程度。本研究结果显示，与对照组比较，模型组大鼠在中央格停留时间显著延长，水平活动和垂直活动得分显著降低，排便粒数、排尿次数明显减少，体重增长缓慢甚至不升反降，此说明模型组大鼠的空间认知能力、兴奋性及探究行为均降低，紧张程度低于正常。此模型较好地模拟了人类抑郁症的核心症状，是一个较好的慢性应激抑郁复合皮肤创伤动物模型，为开展相关研究奠定了基础。

　　参考文献：

　　［1］程天民,胡友梅.创伤难愈的主要原因与发生机制［J］.中华创伤杂志,2004,20(10):577-580.

　　［2］于志杰,程义勇,李树田,等.补充烟酰胺对束缚应激大鼠旷场行为的影响［J］.营养学报,2004,26(4):222-226.

　　［3］郑丽芳,阚红卫,尹艳艳,等.BCPT对慢性应激抑郁大鼠下丘脑、垂体AVP含量及下丘脑AVP mRNA表达的影响［J］.中国药理学通报,2005,21(10):1234-1237.

　　［4］Willner P.Validity,liability and utility of the chronic mild stress model of depression: a 10year review and evaluation［J］.Psychopharmacology,1997,34(4):319-329.

　　［5］Katz RJ,Roth KA,Carroll BJ.Acute and chronic stress effects on open field activity in the rat: implications for a model of depression［J］.Neurosci Biobehav Rev,1981,5(2):247-251.

　　［6］王天芳,张翠珍,王琳,等.慢性疲劳综合征的中西医病理机制及其研究思路［J］.北京中医药大学学报,1999,22(5):19-23.

　　［7］Guo DY,Chen TY,Li B,et al.Comparative study of learning and memory and on rats of different age［J］.Zhongguo Shiyan Dongwu Xuebao,1998,6(1):19-23.

　　（第三军医大学预防医学系、全军复合伤研究所，重庆  400038）