T细胞α型趋化因子/CXC趋化因子受体-3生物轴在结肠癌组织中的作用及其意义

本研究旨在探讨干扰素诱导的T细胞α型趋化因子(I-TAC)及其受体CXC趋化因子受体-3(CXCR3)在结肠癌肝转移中的作用.    一、材料与方法    1.材料:收集结肠癌肝转移手术标本22例(A组),以结肠癌无肝转移手术标本20例(B组)为对照组.    2.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测I-TAC及CXCR3mRNA的表达:分别收集A和B组肿瘤组织,用Trizol法提取总RNA,进行cDNA合成和PCR扩增.引物根据Medline基因文库用Primer 5.0软件自行设计,产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳、Bio-PAD凝胶成像系统分析电泳条带灰度值.目的条带mRNA表达相对强度=目的条带mRNA灰度值/β-actin条带灰度值.    3.Westernblot检测I-TAC及CXCR3蛋白的表达:收集A组和B组肿瘤组织各3份,匀浆后,磷酸盐缓冲液(PBS)调至等浓度,100℃水浴5min使蛋白变性,10%十二烷基硫酸钠聚丙烯酞胺凝胶电;水,分别加人I-1-}(及CXI:R?多屯x于几体4王孵育过夜1:,000稀释的禹称一才一:稀释液中孵育,洗膜后以二氨基联关胶(D:1B)显色试剂盒显色.    4.免疫组织化学染色及结果判定:采用链霉菌抗生物素蛋日一过}l化物酶(SP)法,随机选取10个计算踌个高倍视野(X400)下分别{敌100个钟瘤细胞,计算阳吐细胞数占=E7}E.盖‘数曰百分比,取均值,按肿瘤细抱ie性细范率和着色强度分别进行记分,其中1一3分表示弱阳性(+),4一7分表示阳性(++),8一12分为强阳性.    5.统计学方法:应用,Ps>16.0统计软件分析,采用X}检验.    二、结果    1.I-TAC,CXCR3mRN.}的表达:I-'I'ACmRNA在结肠癌肝转移组中表达为0.54士0.10,在无肝转移组表达为0.21士0.02,两者比较差异有统计学意义(P<0.O5)}CXCR3mR=V在结肠癌肝转移组中表达为0.8310.09,而在无肝转移组表达为0.49士0.06,差异有统计学意义(P<0.05).    2.I-TAC,CXCR3蛋白的表达:B组I-TAC,CXCR3蛋白的表达水平均明显比A组低.    3.免疫组织化学:肝转移组CXCR3表达阳性的16例,阳性率72.7%,无肝转移组CXCR3表达阳性有7例,阳性率35.00%.两组比较差异有统计学意义(P<0.OS);I-TAC在肝转移组有19例阳性表达,阳性率86.36%,I-TAC在无肝转移组有9例阳性表达,阳性率45.00%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)-1.CXCR3表达与结肠癌临床病理特几的关系:栩关性分析表明,CXCR3表达与结肠癌患者的组织分化程度、淋巴结转移、I-TAC呈正相关(P<0.05);与患者的性别年龄、肿瘤大小无明显相关(p>0.O5).    三、讨论    最新研究报道I-T.4C及受体CXCR在肿瘤中的作用,马向涛等fl研究结果显示结直肠癌淋巴结转移与趋化因子受体CXCR4/CXCL12信号转导通路关系密切许超等2通过体外迁移实验发现CXCL10对高表达CXCR3的结肠癌细胞S}}`620和HT29的趋化作用非常显著,而低表达CXCR3的结肠癌细胞SAX-"480趋化作用不明显,提示体内CXCL10对高表达CXCR3的肿瘤细胞具有一定趋化作用_本研究结果显示,CXCR3与I-TAC在结肠癌肝转移组中同时高表达,提示1-TAC/CXCR3生物轴在结肠癌肝转移中起一定的作用.    参考文献    马向涛,余力伟,王彬. 结直肠癌淋巴结转移与趋化因子受体CXCR4/CX-CL12信号转导通路的关系[J].中华实验外科杂志,2007,(1):60-61.doi:10.3760/j.issn:1001-9030.2007.01.024.    许超,王强,蔡清萍. CXCR3在结直肠癌组织中的表达及临床意义[J].中华实验外科杂志,2008,(5):609-611.doi:10.3321/j.issn:1001-9030.2008.05.023.