实验室内质量控制与食源性致病菌盲样分离鉴定
发表时间：2014-04-08 浏览次数：790次
能力验证是检查实验室内部质量控制是否有效的一项重要活动，在提高实验室检验水平和发现实验室存在问题，保证微生物检验质量等方面均有重要意义。为此本中心检验室参加了湘粤两地疾控系统2012年度食源性致病菌能力验证活动，取得满意结果。现将实验室内质量控制与盲样分析结果报告如下。
1实验室内质量控制
1.1仪器设备监控：水浴箱、培养箱按要求调至所需温度至±1℃范围内。生物安全柜经计量部门检定合格，每天开始前检验并做好记录。
1.2高压蒸气灭菌器：每次清毒时放置化学指示胶带，以条带显色为灭菌符合要求[1]。
1.3对所有自配培养菌和商业成品培养基都做了无菌记录，并用阳性菌株和阴性菌株进行验证试验，达到预期要求方可使用。
1.4诊断血清和染色液：都用阳性标菌株和阴性菌株进行验证，并做好记录，每次使用血清前，观察是否透明，色泽是否浑浊。
2盲样检验方法及步骤
2.1质控样品：半固体样品1支，编号为G-16，要求进行沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、腊样芽胞杆菌、大肠埃希菌O157、单核增生性李斯特菌检验。
2.2检验依据：食品微生物学检验国家标准检验方法和卫生防疫细菌的检验方法[2-4]。
2.3培养基及试剂：营养肉汤、GN增菌液、Sc增菌液、TTB增菌液、7.5%NaCl肉汤、改良EC肉汤、LB1增菌液、LB2增菌液、血平板、普通营养琼脂、HE琼脂、XLD琼脂、三糖铁培养基、沙门显色平板、CT-MAC琼脂、Baird-parKer平板、大肠埃希菌O157显色平板、MYP琼脂、PALCAM琼脂及各种成套细菌微量生化鉴定盒，均由广东环凯生物科技有限公司提供;所用诊断血清均由宁波天润生物药业有限公司提供。所有培养基试剂、诊断血清均在有效期内。
2.4方法
2.4.1用无菌手续打开质控盲样半固体，用接种环混均样品，取样品分别接种营养肉汤、GN增菌液、Sc、TTB、改良EC肉汤、7.5%NaCl肉汤、LB1、LB2进行增菌，结果见表1。
2.4.2取半固体盲样直接革兰染色，镜检可见革兰阴性杆菌和革兰阳性短杆菌。
2.4.3取增菌后的培养液，按照食品微生物检验方法，分别接种沙门菌显色平板、HE琼脂平板、XLD琼脂平板、大肠埃希菌O157显色平板、CT-MAC琼脂、血平板、Baird-parker平板、MYP琼脂、PALCAM琼脂，作分离培养，平板分离结果见表2。
2.4.4从沙门菌显色平板、HE平板、XLD平板上挑取疑似沙门菌菌落接种三糖铁琼脂斜面和营养琼脂平板，经36℃18 h培养后，在三糖铁琼脂平板上生化反应为：斜面不变色(-)、底层变红(+)、产气、H2S(+).挑取营养琼脂纯培养物接种沙门菌生化鉴定盒，生化结果为：甘露醇(+)、赖氨酸(+)、尿素(-)、山梨酸(+)、KCN(-)、ONPG(-)、定基质(-)、H2S(+)。沙门菌血清学诊断鉴定结果：A-F多价：(+++)、O9：(+++)、Hp：(+++)、hm：(-)、vi：(-)、Hg：(+++)、盐水对照：(-)，根据革兰染色、平板菌落特点、生化试验、血清学诊断结果，判定从该质控盲样中检出都柏林沙门氏菌。
2.4.5根据PALCAM琼脂平板上菌落特点，挑取疑似单核增生性李斯特菌菌落，革兰染色为革兰阳性短小杆菌。用TSA-YE平板划线分纯后，动力试验为伞状生长;接种单核增生性李斯特菌生化鉴定管，生化结果为：葡萄糖(+)、鼠李糖(+)、麦芽糖(+)、VP(+)、七叶苷(+)、甘露醇(-)、木糖(-);溶血试验为：狭小、透明溶血环。根据生化结果、溶血试验，判定从该质控盲样中检出单核增生性李斯特菌。
3讨论
3.1质量控制工作在微生物检验工作中地位十分重要，它受到一系列因素的影响。从样品采集、保存运输、检验器材的验收、仪器校准、环境条件、培养基无菌验证和质控、标准菌株和诊断血清的验证，其中任何一环发生偏差，都可能导致最终结果的错误。
3.2 Baird Parker平板是金黄色葡萄球菌分离鉴定的选择培养基。质控盲样在该平板上形成极细小的黑色菌落，但无浑浊带和透明环，要注意与金黄色葡萄球菌相区别。
3.3此次质控盲样之所以选用营养肉汤、Sc、TTB、GN、7.5%NaCl肉汤、改良EC肉汤和LB1、LB2增菌液，是因为该次质控考核，只要求做沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌O157、蜡样芽孢杆菌、单核增生性李斯特菌。在实际工作中，应根据工作需要选择不同的增菌培养基，如发生食物中毒，需考虑各种致病菌时，还应当选择如小肠结肠耶尔森氏菌增菌用的改良磷酸盐缓冲液，空肠弯曲菌增用的boltou肉汤，霍乱增菌用的碱胨水，副溶血性弧菌增菌用的3%NaCl碱胨水等增菌液。
3.4对混合盲样半固体直接涂片，是为了观察细菌形态、排列方式、染色性质、初步判断可能存在的致病菌，为下步检验打好基础。
3.5显色培养基是近年来发展起来的一种新的培养基，现在大多数细菌都有其对应的显色培养基，如沙门菌显色培养基、弧菌显色培养基、大肠埃希菌O157显色培养基、致泻性大肠埃希菌ECC显色培养基、空肠弯曲菌CCDA显色培养基等，当细菌生长代谢过程中产生特异性酶分解特异性反应底物后，目标菌形成不同颜色的菌落[5]。与传统培养基相比，显色培养基更容易观察，更好辨认，大大提高了微生物检验工作效率，尤其在突发公共卫生事件中，为尽快找查致病因素发挥重要作用。
4参考文献
[1]姜瑞霞，张岩.供应室的感染管理及控制[J].吉林医学，2013，34(2)：359.
[2]卫生部GB/T4789-2003食品微生物检验[S].北京：中国标准出版社，2003：1-35.
[3]卫生部GB/T4789-2008食品微生物检验[S].北京：中国标准出版社，2008：1.
[4]卫生部GB4789-2010食品安全国家标准食品微生物检验[S].北京：中国标准出版社，2010：1.
[5]王晓梅.微生物实验室盲样考核质控报告[J].内蒙古中医药，2013，(6)：124
