高效液相色谱法测定百花定喘片中橙皮苷的含量

百花定喘片由牡丹皮、陈皮、桔梗、天冬、麦冬、苦杏仁等17味中药组成，具有疏风解热、止嗽定喘。用于咳嗽痰喘，日夜不息，不能安眠，呼吸困难、胸满不畅，咽干口渴。方中陈皮为芸香科植物橘及其栽培变种的干燥成熟果实，又名橘皮。为了有效的控制产品的质量，依据中国药典2010年版一部陈皮药材含量测定项下的方法，我们建立了用高效液相色谱测定百花定喘片中橙皮苷的含量测定方法。此方法具有分离效果好，操作简便，灵敏度高，精密度好等特点。1　仪器与试药仪器：高效液相色谱仪(SPD-10AVP型可见-紫外检测器;LC-10ATVP溶剂输液泵)(日本岛津);橙皮苷对照品(含量测定用，中国生物制品检定所);百花定喘片(公司自制);甲醇和醋酸均为色谱纯，水为公司自制。2　方法和结果2.1　色谱条件色谱柱：YMC C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相：甲醇-醋酸-水(35：4：61);流速：1.0ml/min;检测波长为283nm;理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。2.2　溶液的制备对照品溶液的制备 取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品20片，研细，混匀，取约6.5g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60-90℃)100ml，加热回流3小时，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇80ml，再加热回流至提取液无色，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.3　阴性干扰试验按处方制备不含陈皮的样品，按照供试品溶液的制备方法，制备阴性对照溶液，精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1-3。结果表明阴性对照溶液在橙皮苷出峰处没有吸收峰，说明该测定方法不干扰百花定喘片中橙皮苷含量测定，专属性良好。2.4　线性关系试验精密称取芍药苷对照品10mg，置25ml容量瓶中，用稀甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准品贮备液，精密量取标准品贮备液0.25ml、0.5ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、1.6ml、1.8ml，分别置10ml容量瓶中，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，制成10、20、32、40、48、56、64、72μg/ml的溶液，精密量取上述溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，以峰面积为横坐标，以浓度为纵坐标进行线性回归，回归方程为Y=0.000109X+0.00202，说明橙皮苷对照品浓度在10μg/ml-72μg/ml范围内，浓度和峰面积呈良好的线性关系。2.5　精密度试验精密吸取同一对照品溶液，连续进样6次，结果各次测得峰面积的RSD为0.60%。2.6　溶液稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、8、12、16、24小时，分别进样，测得峰面积的RSD为0.53%，说明供试品溶液在24小时内基本稳定。2.7　重复性试验分别精密称取同一批号的样品6份，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，精密量取供试品和对照品溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，结果RSD为1.13%，说明该测定方法重复性良好。2.8　准确度试验取已知含量的样品约3.25g，共9份，精密称定，分别置索氏提取器中。取橙皮苷对照品适量，精密称定，用甲醇溶解并定量稀释成每1ml含3.9mg的溶液，作为标准品贮备液，每三份分别加入标准品贮备液0.5ml、0.8ml、1.2ml，按照供试品溶液制备方法制备样品溶液，精密量取样品溶液和对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，计算回收率，结果平均回收率98.26%，RSD为0.89%。说明该测定方法具有良好的准确性。2.9　样品测定取10批样品，按照上述条件与方法进行测定，结果见表1。表1　含量测定结果3　讨论3.1　在样品的提取过程中，我们比较了超声法和索氏提取法，试验表明索氏提取法的收率比较高，且简便，因此采用索氏提取法。3.2　利用高效液相色谱法可测定百花定喘片中主要成分橙皮苷的含量，且该方法简便，准确，灵敏度高，可以有效的控制该产品的质量。