PTDp53 融合蛋白的表达、纯化及其对肝癌细胞的转导活性
发表时间:2010-08-05 浏览次数:273次
PTDp53融合蛋白;表达;纯化;肝癌
丁忠阳,蔡兵
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知网,万方
目的:原核表达野生型p53与PTD的融合蛋白,检测 PTD介导p53进入肝癌细胞的效率。方法:利用RTPCR方法从A549细胞系中分离野生型p53基因,将该基因分别克隆入pTATHA和pET 32a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内诱导表达并进行纯化。以纯化的p53蛋白经腹腔免疫BALB/c小鼠,制备高效价的抗血清。将PTDp53融合蛋白加入HepG2 细胞培养上清,利用间接免疫荧光法检测PTDp53融合蛋白导入HepG2 细胞的效率。结果:成功地构建了含有野生型p53基因的原核表