新型表达骨形态发生蛋白2腺病毒真核细胞载体的构建和鉴定
发表时间:2010-06-04 浏览次数:495次
骨形态发生蛋白2基因;绿色荧光蛋白;腺病毒载体;同源重组;成骨诱导
张正,刘丹平
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知网,万方
目的 构建同时表达具有抗原表位FLAG标记的骨形态发生蛋白2(BMP2)目的蛋白和报告分子绿色荧光蛋白(GFP)的新型腺病毒真核细胞表达载体。方法 将去除翻译终止密码子并添加新的酶切识别位点XhoⅠ的BMP2基因定向连入腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-IRES-hrGFP-1。携带BMP2+基因的重组腺病毒穿梭质粒经酶切鉴定、PmeⅠ酶切线性化后转化BJ5183-AD-1大肠杆菌,利用细菌内同源重组机制将BMP2+和GFP基因连同其顺势表达元件重组入腺病毒基因组质粒。用PacⅠ酶切去除其质粒成分,