siRNA沉默EGFR基因对ACHN肾癌细胞恶性生物学行为及放疗敏感性的影响

发表时间：2014-07-04 浏览次数：692次

引用：

褚晗.siRNA沉默EGFR基因对ACHN肾癌细胞恶性生物学行为及放疗敏感性的影响[J].中华整形外科杂志.2014, 30(3):246-250

关键词：

肾癌;表皮生长因子受体(EGFR) : RVAi;放疗

作者：

褚晗

作者单位：

安徽医科大学，外科学， 2013，硕士

出版年份：

2013

期刊页数：

246-250

收录者：

知网

摘要：

肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）是泌尿系常见肿瘤,其发病率呈上升趋势，2010年其发病率约占成人恶性肿瘤的3.8%，占肾脏肿瘤的90%-95%。随着影像学技术水平的提高，提高了部分早期肾癌患者的预后生存率，但仍有一部分晚期及发生转移的肾细胞癌患者治疗预后并不理想。肾癌细胞对放化疗均不敏感，这一难题已成为当今肾癌治疗的热点。表皮生长因子受体EGFR已被证实在肾癌中超表达，其表达可能与肾癌对放化疗不敏感有关系，针对EGFR的治疗有望改善肾癌对放化疗不敏感的现状，为晚期肾癌患者带来了希望。RNAi作用机制是由互补的内源或外源RNA形成的双链RNA诱发基因沉黙。RNAi具有高特异性、高效性、高稳定性、可遗传性等特点，其在肿瘤的基因的研究和治疗方面已表现出了强大的潜力。RNAi给肿瘤的治疗带来了广阔的前景，将RNAi技术联合放疗以增加对肿瘤细胞的杀伤力，且毒副作用小，为肿瘤的治疗开辟一条新途径。本实验课题，利用RNAi技术沉默ACHN肾癌细胞中的EGFR基因，抑制了ACHN肾癌细胞株的增殖、迁移、侵袭能力，并增加了其对放疗的敏感性，为临床肾癌的治疗提供了新的途径，并奠定了理论基础。【方法】免疫组化及细胞免疫荧光技术证明组织水平及细胞水平EGFR的表达，体外培养肾癌ACHN细胞，化学合成针对EGFR的小干扰RNA,通过脂质体转染法转染进ACHN肾癌细胞中，利用Western blot技术检测细胞中EGFR蛋白的敲除效率，通过台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线，用MTT比色分析法检测细胞增殖抑制率，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，transwell检测细胞侵袭能力。然后分别用0、2、4、6、8Gy剂量的X线对5组肾癌细胞（每组包含空白对照组、非异性RNA干扰组、特异性RNA干扰组）进行照射，光学显微镜下观察细胞凋亡情况，采用台盼蓝据染法检测细胞凋亡率。【结果】肾癌组织及ACHN肾癌细胞均可见EGFR呈高表达状态，特异性siRNA可显著抑制EGFR的表达；生长曲线提示，siRNA组细胞生长明显减慢，在24h、48h、72h、96h增殖抑制率分别为15.6%、38.4%、64.1%、68%，均高于空白组及阴性对照组（P

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