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《微生物学与免疫学》

幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备

发表时间:2012-12-28  浏览次数:1016次

引 用:

田树伟,邵世和,韩军,黄河,黄世腾.幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备[J].江苏大学学报(医学版),2010,20(3):239-243

关 键 词:

幽门螺杆菌,Ⅳ型分泌系统,cagM基因,抗体

作者:

田树伟,邵世和,韩军,黄河,黄世腾

作者单位:

出版年份:

2010

期刊页数:

收录者:

知网,万方

摘要:

目的: 构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori) NCTC 11637 IV型分泌系统cagM(HP0537)全长编码基因的原核表达载体,分析其抗原性并制备抗体。方法: 应用PCR技术从H.pylori基因组扩增 cagM基因片段,TA克隆后测序分析,并构建表达载体pET28a(+)cagM,转化 E.coli BL21,IPTG诱导表达,SDSPAGE及鉴定表达蛋白,表达蛋白以 Ni2+NTA 柱进行纯化,用软件分析其抗原性后,免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA检测多克隆抗体效价。结果: 测序结果表明cagM基因全长1 131 bp(基因库登录号为GU269568),编码376个氨基酸,与基因库中已知菌株J99,26695和G27的氨基酸同源性为98%~99%;诱导表达后经SDSPAGE检测表明,在43 700处发现一条新生条带,Ni2+NTA柱纯化后为单一条带,软件分析表明其抗原性较强,免疫家兔制备的多克隆抗体效价为1∶1.6×105。结论: 首次成功克隆并表达了H.pylori pNCTC 11637 cagM基因,并制备了其抗

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