全自动血液分析工作站血片复检规则的探讨
发表时间：2014-05-12 浏览次数：978次
近年来，血细胞分析仪的不断升级和普及使用，为临床检验工作的便利和快捷创造了条件，但迄今为止血细胞分析仪在形态学及计数检查方面仍只能作为一种筛查工具[1]，无法代替人工镜检，尤其是在病理条件下惟有人工镜检才能保证结果的准确性。2005年国际血液学学会(ISLH)推荐的41 条自动血细胞分析的复检规则[2]，但对于不同的仪器或不同的实验室，由于筛选目的不同，特异性也存在差异，必须自行制定适用于本实验室的复检标准，参照国际41条复检规则，结合XE2100的性能特点，拟定了适合本实验室的复检规则，并通过1226份标本的验证，无漏检情况发生。
1 材料与方法
1.1 标本 随机检测本院2008年10～11月的血常规标本1226份，所有标本均采用EDTAK2 抗凝，其中儿科211 份，血液科171 份，肿瘤科345 份，内科179 份，外科233份，感染科87份。
1.2 仪器与试剂 日本sysmex生产的XE2100全自动血细胞分析仪和SP1000 全自动制片染色仪。XE2100 全自动血细胞分析仪所使用试剂均为sysmex公司生产的原装配套试剂;SP1000所用染料为BASO 瑞氏姬姆萨染色液。评估前由sysmex公司提供的配套校正品SCS1000进行校正，每天使用eCHECK(level2/3)进行质控。
1.3 方法
1.3.1 人员培训 有过6个月以上血细胞形态学培训经历的2位主管技师和1 位副主任技师，根据《全国临床检验操作规程》[3]中制定的血涂片检测操作程序，对参加人员进行培训，并统一涂片镜检阳性判断标准。
1.3.2 涂片镜检阳性判断标准[4] (1)红细胞明显大小不等(细胞大小相差1倍以上)中空淡染(淡染区大于1/2)的红细胞多于30%;(2)巨大血小板多于15%;(3)见到血小板聚集;(4)Dohle小体的粒细胞大于10%;(5)中毒颗粒中性粒细胞大于10%;(6)空泡变性粒细胞大于10%;(7)原始和幼稚细胞大于或等于1%;(8)早幼粒细胞大于或等于1%;(9)中幼粒或晚幼粒细胞大于或等于2%;(10)异形淋巴细胞大于或等于5%;(11)有核红细胞大于或等于1%;(12)浆细胞大于或等于1%;(13)血液寄生虫及其他异常细胞(如分类不明细胞)。
1.3.3 复检标准设置 根据ISLH 推荐的“41 条复检规则”， 结合XE2100的报警信息，制定了本实验室的复检规则，见表1(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)。
1.3.4 检验方法 由培训过的2 位主管技师，对1226 份血片进行显微镜双盲检查，按美国临床和实验室标准化委员会(CLSI)推荐的镜检方法进行血涂片的白细胞分类，同时观察血细胞学形态，细胞形态学的异常信息判断标准为血涂片镜检下查见相关的异常为存在阳性，反之为假阳性。细胞计数采用《全国临床检验操作规程》推荐的方法，偏差允许范围采用CLIA′88推荐标准，在细胞数允许偏差范围内的为阳性，超出允许偏差范围的为阴性。
2 结 果
从表2可以看到细胞计数(WBC、RBC、Hb)真阴性率均在99%以上，但PLT 计数真阴性率为90.5% 左右。从复检阳性率分布来看，主要表现为幼稚细胞、异型淋巴细胞、PLT 聚集及有核红细胞，分别为8.46%、8.73%，7.26%，5.79。在上述评估过程中，按仪器设置的复检规则共复检327例，复检率为26.7%，略低于国际血液学复检专家组的29.8%[2]，其中假阳性率为17.8%，假阴性为1.1%。
3 讨 论
本科在2009初通过了CANS认可，血细胞分析仪每年至少2次校准，而且每天的室内质控结果都参与Sysmex公司的全球在线质控比对系统，每年4 次全国室间质量评价PT 为100%，因此细胞计数的准确性应该有比较好的保证，但由于仪器检测结果的阳性报警率很高(若按41 条复检规则会达50%)，工作量很大，无法做到疑难标本重点镜检，因此根据仪器检测特点，结合血细胞三个系统的检测要点拟定了本实验室的复检标准，通过验证假阴性率小于5%(1.1%)，符合专家组确定5%的可接受限[5]，但复检率只为26.7%，在不降低准确性的情况下提高了工作效率[67]。实验结果显示，除PLT 计数外，WBC、RBC、Hb准确性均在99%以上，这与XE2100 血细胞分析仪采用鞘流阻抗法进行计数，不仅提高了细胞计数的准确性，同时也扩展了线性范围;但由于某些不明原因导致血小板聚集或病理情况下巨大血小板的存在直接影响血小板的计数，这要引起高度重视，尽可能提高镜检率。从实验结果可以看出，出现WBC 假阳性报警的主要有：原始或幼稚粒细胞的假阳性报警率为7.3%，异型淋巴细胞假阳性报警率为5.0%，有核红细胞假阳性报警率为1.7%，这与仪器采用核酸荧光染色结合侧向散射光分析技术[8]，当外周血中形态产生变异的细胞，其DNA/RNA 含量增高，仪器会将其定义为未成熟细胞、异型淋巴细胞或有核红细胞。由于XE2100采用了流式细胞通道，利用核酸荧光染色技术对幼稚细胞进行分析，提高了幼稚细胞的镜检率(10.9%)，但从复检情况来看，假阳性为7.2%，主要是核左移，如感染患者、肿瘤化疗患者等，但无漏检情况发生，有很好的实用价值。另外，由于仪器复查规则设置上的不足，为了保证结果准确性以及与临床的相符性，在报告审核过程中有四条复查规则：(1)近两次细胞计数相差较大，尤其是血小板计数，考虑到分析前对其存在较大影响，在镜检的同时，必要时要进行临床联系。(2)检测结果与临床诊断不符者。(3)不明原因发热者。(4)白血病患者复片。根据临床经验镜检对血细胞分析至关重要，可以为临床诊断提供非常重要的信息，条件允许时应尽可能提高镜检率;同时在规范操作流程的过程中还应加强细胞形态学方面的培训以及相关知识的学习与交流，不断积累和提高人员素质，才能保证检验质量。
参考文献
[1] 丛玉隆，乐家新.再论血细胞分析技术进展及临床应用[J].中华检验医学杂志，2007，30(4)：365370.
[2] BamesPW，MacFaddenSL，MachinSJ，etal.Theintemationalconsensusgroupforhematologyreview：suggestedcriteriaforactionfollowingautomationCBCandWBCdifferentialanalysis[J].LabHematol，205，11(2)：8390.
[3] 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程式[M].3 版.南京：东南大学出版社，2006：126137.
[4] 中华检验医学杂志编辑委员会.全国血液学复检专家组工作会议纪要暨血细胞自动计数复检标准释义[J].中华检验医学杂志，2007，30(1)：380382.
[5] 卢兴勇，丛玉隆.应重视和提升传统血液细胞学检验水平[J].中华检验医学杂志，2006，29(1)：481482.
[6] 孙莉.浅谈应用血液分析仪后的血片复检工作[J].襄樊职业技术学院学报，2010，9(6)：3435，44.
[7] 姚惠英.自动化血细胞分析后血片复检的重要性[J].医学信息：下旬刊，2011，24(10)：340.
[8] 范华杰，凌励，周道银.全自动血细胞分析仪sysmexXE2100 与AbottCD3700的比较分析[J].检验医学，2006，21(2)：164166.
(收稿日期：20131220)
