乌鲁木齐地区汉族与维吾尔族人血浆组织因子途径的初步观察△

　　作者：王蕊,温丙昭,李辉,钟笛　　作者单位：上海市杨浦区中心医院内科,上海 200090

　　【摘要】目的了解乌鲁木齐市地区健康中老年人汉族、维吾尔族人群新鲜血浆中组织因子途径的变化。方法 血浆中的组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)、凝血因子Ⅶ抗原(FⅦAg)、激活的FⅦ(FⅦa)及D二聚体(Ddimer)检测采用酶联免疫吸附法(ELISA);凝血因子Ⅶ促凝活性(FⅦ:C)测定采用一期凝固法。观察对象包括40名汉族正常人和40名维吾尔族正常人。结果 (1)汉族人群、维吾尔族人群其TF抗原、总TFPI(tTFPI)、全长TFPI(fTFPI)、TF/ tTFPI、TF/ trTFPI、trTFPI/ fTFPI比值差异无显著性 (P>0.05); (2)与汉族比较，维吾尔族血浆中截短TFPI (trTFPI)含量、TF/fTFPI及trTFPI/ tTFPI比值明显降低(P<0.05)，但fTFPI/ tTFPI比值明显升高(P<0.05);(3)FⅦAg、FⅦa、FⅦ:C和三者之间比值差异无显著性(P>0.05);(4)血浆Ddimer差异无显著性(P>0.05)。结论 与汉族健康中老年人相比，维吾尔族人血浆组织因子途径成分并无明显差别，但trTFPI较低。

　　【关键词】 组织因子途径; 组织因子; 组织因子途径抑制物; 凝血因子Ⅶ

　　A Preliminary Observation of the Plasma Tissue Factor Pathway in the Han and Uygur Nationality in Urumqi, China

　　WANG Rui, WEN Bingzhao, LI Hui, ZHONG Di, LI Ling

　　(First Affiliated Hospital, Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, China)

　　Abstract： Objective In order to investigate the changes of fresh plasma tissue factor pathway (TFP) in the healthy volunteers of Han nationality and Uygur nationality. in Urumqi, China.Methods Plasma tissue factor (TF)? TF pathway inhibitor (TFPI) antigen and FⅦ:Ag and activated FⅦ (FⅦa) and DDimer were measured with enzyme linked immunoabsorbent assay (ELISA). Plasma FⅦ coagulation activity (FⅦ:C) was developed in the onestage syetem. Blood samples were from 40 individuals of Han nationality and 40 individuals Uygur nationality.Results (1)The antigen levels of TF and tTFPI and fTFPI TF/ tTFPI,TF/trTFPI,trTPFI/ fTFPI ratios were not significantly difference in the general populations of Han and Uyger nationalities(P>0.05). (2) Compared with the Han nationality, the levels of plasma trTFPI and TF/fTFPI and trTFPI/tTFPI ratios in Uyger nationality were markedly lower (P<0.01; P<0.05),but compared with the Han nationality, the fTFPI/ tTFPI ratios was remarkably higher(P<0.05). (3)FⅦ:Ag,FⅦa and FⅦ:C and ratios were not signifiacant difference(P>0.05). (4) Plasma Ddimer was not significantly different(P>0.05). Conclusion The results of this study demonstrated that Uyger nationslity circulating blood is in hypercoagulable state than that Han notionslity healthy volunteers. Compared with th Han nationality, the ingredients of plasma TFP in Uyger nationality were not signifiacant difference, but the trTFPI was markedly lower.

　　Key words: Tissue factor pathway; Tissue factor; Tissue factor pathway inhibitor; Coagulation factor Ⅶ.

　　关于血液凝固，经典的凝血学说提出内、外两个启动途径，目前盛行的是两阶段学说，强调体内凝血过程是组织因子途径(TFP)启动的，即重新确认生理止血中凝血过程是由外在途径启动的[1]。而其中组织因子(TF)与组织因子途径抑制物(TFPI)活性平衡情况决定体内凝血过程的阶段性。近年来，国内外一些研究表明，TFP的改变与心脑血管血栓性疾病相关[2,3,4]。因此，研究健康人群中TFP的水平，对了解不同人群中TFP的变化有重要意义。我们重点检测了乌鲁木齐地区健康中老年人汉族及维吾尔族各40名的TFP各指标及比值的变化，并对其进行了比较分析。

　　1 对象与方法

　　1.1 标本来源 乌鲁木齐地区汉族及维吾尔族健康中老年体检者各40人，均排除患有心、脑血管疾病、糖尿病、肝、肾疾病、高脂血症及周围血管疾病者。检测前2周内未服用抗凝剂及降脂药，均为无亲缘关系的个体。按WHO标准，被检汉族人的体重超重率为25%(10/40)，肥胖率为7.5%(3/40);维吾尔族的超重率为60%(24/40)，肥胖率为20%(8/40)。两组资料比较见表1。 表1 两组一般情况及生化资料比较

　　两组比较P<0.05

　　1.2 主要试剂及仪器 TF抗原(TFAg)、FⅦ抗原(FⅦ:Ag)试剂盒为Assaypro产品。Truncated TFPI、FⅦa试剂盒为American Diagnostic Inc(ADI)产品。乏FⅦ血浆为Pacific产品。Ddimer为Biopool试剂盒。ELX800型酶标仪为美国BioTek instruments Ins产品。

　　1.3 检测方法 80例标本采集均取静脉血(空腹)，以0.109 mol/L枸橼酸钠与静脉血1∶9混合，置于硅化管中，以3 000 r/min 离心10 min，取分离血浆置-75℃待测，保存不超过2个月。

　　1.3.1 TF检测 血浆中TF:Ag采用双夹心ELISA法。具体操作过程依据试剂盒说明进行。TF:Ag检测的原理是孔板内预先包被上TF的特异性鼠源单抗。标准品或样本中的TF:Ag与固化的抗体和生物素化的多克隆抗体组成类似三明治的结构，TF夹于其中。该三明治结构再被链亲和素过氧化酶连接物所辨认结合，未结合的物质则被冲洗掉，再加入酶底物，最后终止显色，在酶标仪上测定含量读取颜色的光密度值。

　　1.3.2 TFPI检测 采用ELISA法，具体操作依ADI公司的试剂盒说明进行。全部TFPI(包括全长与截短型TFPI)的包被抗体都是针对第1个 Kunitz功能域单抗的。检测抗体都是多抗，其中测定fTFPI的检测抗体是针对第3个Kunitz功能域的。测定总的TFPI(tTFPI)的检测抗体是针对第1个 Kunitz功能域的。tTFPI总量与fTFPI的差值即trTFPI含量。

　　1.3.3 FⅦ检测 血浆中因子Ⅶ促凝活性(FⅦ：C)测定采用一期凝固法[5]。以正常人混合血浆不同稀释倍数作为受检血浆与乏FⅦ：C基质血浆混合作凝血酶原时间测定，绘制标准曲线。受检血浆(1∶20稀释)、乏FⅦ：C基质血浆、兔脑浸出液各0.1 ml混合，37℃温育30 s，加0.025 mol/L CaCl2 0.1 ml，37℃下计血浆凝固时间，根据标准曲线推出相对活性。激活的FⅦ(FⅦa)水平测定所用试剂盒为ADI公司产品，采用ELISA法进行检测。首先通过孵育让待测液中FⅦa或标准品FⅦa与FⅦa生物素化酶抑制物形成二元复合物，其后将含此复合物的样本加入已用FⅦa单抗包被的微孔，使形成酶抑制物/FⅦa/FⅦa单抗三元复合物。然后用链亲素结合的辣根过氧化物酶(HRP)与该三元复合物连接，并以TMB作为HRP的底物，依其生色吸光度通过标准曲线求出FⅦa的含量。关于FⅦ：Ag测定，试剂盒为Assaypro产品，采用双夹心ELISA法，其原理为孔板内预先包被上FⅦ的多抗，标准品或样本中的FⅦAg与固化的抗体和生物素化的多克隆抗体组成类似三明治的结构。FⅦ夹于其中，该三明治结构再被链亲和素过氧化酶连接物所辨认结合，未被结合的物质则被冲洗掉，再加入酶底物，最后终止显色，由光密度值推算FⅦ：Ag含量。

　　1.3.4 D二聚体(Ddimer)检测 采用ELISA法双抗体夹心定量快速检测试剂盒(Biopool产品)，其原理是以定量法特异地检测交联纤维蛋白降解的特征性产物Ddimer。具体操作过程依Biopool试剂盒说明进行。

　　1.4 数据处理 两组计量资料均服从正态分布，用±s表示，比较采用t检验。以P<0.05表示差异有显著性意义。

　　2 结 果

　　2.1 血浆中TF与TFPI的变化 两组相比，TF抗原、tTFPI、fTFPI以及TF/tTFPI、trTFPI/fTFPI比值差异均无显著性(P>0.05);而fTFPI/tTFPI比值维吾尔族高于汉族，trTFPI、trTFPI/tTFPI及TF/fTFPI维吾尔族低于汉族，两组相比差异有显著性(P<0.05)。虽然维吾尔族TF/trTFPI比值升高，但与汉族相比差异无显著性(P>0.05)。见表2。表2 两组血浆中TF、TFPI抗原含量及比值注：两组比较* P<0.05,**P<0.01

　　2.2 血浆FⅦAg、FⅦa及FⅦ:C水平差异均无显著性(P>0.05)。FⅦa/FⅦAg、FⅦ:c/FⅦ:Ag及FⅦa/FⅦ:C比值在两组差异也均无显著性(P>0.05)。见表3表3 两组血浆FⅦAg、FⅦa及FⅦ:C含量与比值凝血因子汉族健康中老年组

　　2.3 血浆Ddimer 40例汉族健康中老年人Ddimer(mg/L)为0.27±0.12，40例维吾尔族健康中老年人Ddimer为0.26±0.15，两组间差异无统计学意义(P>0.05)。

　　3 讨 论

　　综合国内主要文献[513]报道TF为30～220 ng/L或下限值为10 ng/L;TFPI为61.58±27.90～97.5±26.6 μg/L;FⅦ:C范围86±22%～124.63±28.29%[511];Ddimer为0～0.256 mg/L[5, 12, 13]。本文报道与文献基本一致。关于FⅦa和FⅦ:Ag，国内报道较少，其检测方法和报告单位也不统一，正常值范围还有待于大宗统计资料予以完善。

　　TFP是否启动凝血过程取决于TF促凝与TFPI抗凝力量的平衡状态。文献报道急性冠脉综合征患者血栓形成过程中，TF和TFPI的平衡决定血栓形成的活动[14]。

　　血浆TFPI依其是否已与脂蛋白结合，分为结合型TFPI与游离型TFPI，结合型TFPI抗凝能力很弱，而游离型TFPI则有较强的抗凝能力。依其合成情况而言，TFPI分为TFPIα和TFPIβ，TFPIα是全长的，即经典意义上的TFPI;TFPIβ缺乏第3个kunitz功能域，且C末端不同于TFPIα。由于TFPIβ能够通过葡糖脂酰肌醇(GPI)直接结合细胞膜上，故具有较强的抗凝作用。TFPIα不能直接(可间接)与细胞膜结合，故抗凝作用远弱于TFPIβ[15]。本文使用ADI检测盒得到的trTFPI实质上是游离型TFPI，其中以TFPIβ为主，因此血浆中trTFPI的含量反映循环血液中抑制组织因子途径启动的主要力量。

　　文献报道低密度脂蛋白在动脉硬化中起关键作用，其有害的低密度脂蛋白被氧化后形成动脉粥样斑块，造成动脉阻塞，发生在脑动脉内可导致脑卒中[16]。乌鲁木齐地区汉族居民膳食以碳水化合物为主，蔬菜水果的摄入量较多。维吾尔族人群的饮食习惯造成高蛋白、高脂肪的饮食结构，总热量摄入明显高于汉族居民，以致于超重及腹型肥胖者居多[17, 18]。本研究的一般资料显示维吾尔族人群的低密度脂蛋白高于汉族人群，结合维吾尔族人群饮食以肉类和奶类为主，提示维吾尔族居民的超重和肥胖与遗传相关外，与该民族的膳食结构及高热量的摄入也有关系，因此导致其血脂的变化。维吾尔族中老人超重和肥胖的患现率明显增加与年龄因素共同增加了其2型糖尿病和心脑血管疾病的危险性[17, 18]。本文资料显示除低密度脂蛋白高于汉族居民外，其TFP的检测资料显示，trTFPI、trTFPI/tTFPI又明显低于汉族，是trTFPI因抗凝而消耗较多所致还是其它原因。因本文检测的样本数还比较少，结论还有待于进一步做大样本的调查研究。

　　TFP是否有效启动，还取决于FⅦ有多少被活化为FⅦa以及FⅦ：Ag的表达，因TF启动凝血是以TF与FⅦa结合为标志的。本组资料同时还对FⅦa、FⅦ:C及FⅦ：Ag以及三者间比值进行了检测，并对两民族进行比较分析，均未发现明显差异。

　　Ddimer是交联纤溶蛋白纤溶酶水解的特异性产物，因此它是继发性纤溶的标志物，它反映体内产生了凝血过程，并引起了纤溶增强。正常健康人群存在一定水平的Ddimer，表明在健康人体内也存在低水平的凝血与纤溶过程，但汉族与维吾尔族比较无明显差异。

　　本文首次报道健康中老年人血浆中tTFPI、fTFPI及trTFPI水平以及三者间比值，并同时又检测了FⅦa、FⅦ:C及FⅦ：Ag三者的血浆浓度以及三者间的比值，认为比值的变化可能更有益于判断体内TFP启动的标志;并首次报道维吾尔族健康中老年人血浆中TFP途径各指标浓度，同时与汉族还进行了比较分析，在某些方面发现了两民族间差异。然而本研究样本相对较小，且受地区局限性，无法真实反映民族间的确切差异，因此，尚需进行多中心大样本观察。

　　致 谢：中南大学湘雅医学院生理学系止血生理实验室在实验技术上所给予的支持，特此致谢!参考文献

　　【参考文献】

　　[1] 贺蓉, 贺石林. 凝血抗凝血系统与血栓[M]. //: 刘泽霖, 贺石林, 李家增, 主编. 血栓性疾病的诊断与诊断与治疗。第2版. 北京：人民卫生出版社,2006：100115.

　　[2] MEIXIA He, ZHI BIN wen, XIAO FAN HE, et al. Observation on tissue factor pathway and some other Coagulation Parameters during the onset of acute cerebrocardiac thrombotic diseases[J]. Thromb Res, 2002, 107:223228.

　　[3] STEPPICH B, MATTISEK C, SOBCZYK D, et al. Tissue factor pathway inhibitor on circulating microparticles in acute myocardial infarction[J]. Thromb Haemost, 2005,93:3539.

　　[4] BENNERMO M, HELD C, ERICSSON CG, et al. Genotypespecific increase in plasma concentrations of activated coagulation factor Ⅶ in response to experimental inflammation. A link between infection and acute myocardial infarction[J]? Thromb Haemost, 2005, 94:427431.

　　[5] 王鸿利. 凝血因子功能活性检测; 汉建忠, 等. 凝血因子激活标志物检测. 邵慧珍. 纤溶降解产物检测方法[M]. //李家增, 王鸿利, 韩中朝主编. 血液实验学. 上海： 上海科学技术出版社, 1997：357370,377380,428.

　　[6] 王学峰. 凝血系统的实验室检查; 凝血因子的实验室检查[M]. //王振义, 李家增, 阮长耿主编. 血栓与止血基础理论与临床. 上海： 上海科学技术出版社, 2004：903914.

　　[7] 文志斌, 熊石龙, 何晓凡, 等. 急性脑梗 死发作期间组织因子途径改变的观察[J]. 中国危重病急救医学, 2003,9:529531.

　　[8] 何美霞, 文志斌, 李程, 等. 急性心肌梗死发作期间组织因子途径变化的观察[J]. 中华心血管病杂志,2001,10:587590.

　　[9] 刘敏涓, 周立红, 董临江, 等. 血浆凝血因子Ⅶ测定在缺血性心脑血管病中的临床意义[J]. 中华血液学杂志, 2000,3:152153.

　　[10] 刘立根, 段磊, 朱宏钧, 等. 腔隙性和动脉粥样硬化性脑梗死急性期患者血浆组织因子的检测[J]. 中华血液学杂志, 2002, 9:488489.

　　[11] 康文英, 王鸿利, 熊立凡, 等. 冠心病患者血浆凝血因子Ⅶ水平及其基因多态性研究[J]. 中华血液学杂志, 2002,9:457459.

　　[12] 窦红菊, 胡钧培,邹丽芳, 等. 急性脑梗死患者血栓前体蛋白凝血酶抗凝血酶复合物和D二聚体的检测及其临床意义[J]. 血栓与止血学, 2004,10(3):115116.

　　[13] 陈南, 华守明, 卢辉和, 等. D二聚体与纤维蛋白质在冠心病中的临床意义[J]. 中国微循环, 2006,10:143145.

　　[14] STEFFEL J, ISELI S, ARNET C, et al. Cocaine unbalances endothelial tissue factor and tissue factor pathway inhibitor expression[J]. J Mol Cell Cardiol, 2006, 40:746749.

　　[15] PIRO O, BRPGE GJ Jr. Comparison of CellSurface TFPI α and β[J]. J Thromb Haemost, 2005, 3:26772683.

　　[16] 陈敏. 血脂水平与脑梗死的关系[J]. 上海医学, 2004, 10:772773.

　　[17] 祁燕, 谢自敬, 阿不力克木. 乌鲁木齐市维吾尔族成年人代谢综合征流行病学调查[J]. 中国现代医学杂志,2004,19:155156.

　　[18] 曾小云, 谢自敬, 伊力哈木. 乌鲁木市维吾尔族成年人超重和肥胖的流行病学调查[J]. 中国临床康复,2005,3:1719.