贫血病人的血液标本对两种配血方法的影响

　　作者：邓光权　　作者单位：广东省粤北人民医院，韶关 512026

　　【摘要】为了比较贫血病人低红细胞浓度对盐水介质配血及改良聚凝胺配血的影响，将30例贫血病人每人抽取的静脉血4 ml，注入干试管2 ml，另外2 ml注入38%枸橼酸钠管作为交叉配血标本。干试管和枸橼酸钠管标本分别用离心机2500r/分钟离心10分钟，分离出血清尽量取足量的红细胞50 μl进行稀释，病人红细胞以盐水稀释成3%作为原液进行不同的稀释并与O型血的血清作盐水介质配血及改良聚凝胺配血，测试两种方法出现凝集反应。 结果表明： 从观察结果看，盐水配血法在红细胞较高浓度时比聚凝胺的凝集结果难以观察，红细胞相对低浓度时聚凝胺配血比盐水配血结果难以观察。有2例在各个浓度的血球配血时都出现溶血，而干试管取血时，有部分标本没办法得到足量的红细胞。结论： 由于贫血病人的标本红细胞很少，红细胞量不足会使配血结果难于观察，容易造成配血假阴性。如果用干燥试管抽血样，则血块凝结，有时很难分离到红细胞，如果用竹签挤压获取红细胞，则会造成标本溶血，同样也会造成溶血性假阴性反应。所以给贫血病人配血只能用枸椽酸钠管采血。黄疸及溶血病人标本应把红细胞洗涤后再配血。

　　【关键词】 贫血

　　Abstrat To compare the influence between physiological saline cross-matching and modified polybrene cross-matching for low concentration erythrocytes in anemia patients，4 ml venous blood was take out separately from each of 30 anaemia patients. 2 ml was injected to dry test tube，the other 2 ml to the tube with 38% of sodium citrate for the sample of cross-matching.All samples had been centrifugated for 10 minutes at 2500r/min.The sera were separated adn 50 ul of erythrocytes were aspirated. The erythrocytes of the patients were diluted to 3% with physiological saline as stock solution.After these solutions being diluted with serum of O blood group using physiological saline and polybrene as medium matching blood，the occurrence of agglutination reaction would be tested.The results showed that reactionsof physiological saline cross-matching is more difficult to be observed than that of the polybrene cross-matching while erythrocytes with high concentration，however，it is opposite at low concentration of erythrocytes.Hemolysis appeared in two patients at cross-matching erythrocytes with different concentrations.Some of samples could not reach to enough erythrocytes with dry tubes.It is concluded that because of less erythrocytes in the sample of anaemia patients，it is more difficult to observe the results in cross-matching，and easy to get false negative reaction.Sometimes it is difficult to get enough erythrocytes by centrifugating as blood sampting with dry tubes.There would be hemolysis and false negative reaction，if you take out erythrocytes by extruding with bamboo.The only right way is using the tubes of sodium citrate for cross-matching of anemia patients.

　　Key words anaemia modified polybrene cross-matching; physiological saline cross-matching hemolysis

　　对贫血病人来说，输血是非常重要的，配血自然也必不可少，如果配血中出现假阴性，则临床输血后会引起不堪设想的后果。假阴性的表现可以有凝集反应不出现或观察不到和溶血反应不能反映，因此要保证配血的质量对标本的要求不容忽视。现将我们对贫血病人的配血结果和应注意环节报告如下。

　　材料和方法

　　试剂

　　配血用的生理盐水为本院药厂生产的注射用生理盐水;改良凝聚胺试剂盒，由中山市生科试剂仪器有限公司生产，产品标准号：YZB/国1262-2003。产品注册号：国食药监械(准)2003第3400180号。枸椽酸钠管是38%枸橼酸钠(使用时加病人静脉血2 ml)。

　　方法

　　将30例贫血病人(男25人，女15人，年龄2-60岁;17例A型、10例B型、3例AB型;Hb: 40-60 g/L，RCT: 0.14-0.20 L/L)，抽取静脉血4 ml，2 ml注入干试管，另外2 ml注入含38%枸橼酸钠管作为交叉配血标本，干试管和枸橼酸钠管标本分别用离心机2500r/分钟离心10分钟，分离出血清尽量取足量的红细胞50 μl稀释，病人红细胞(有3例病人的血液标本肉眼可以观察到黄疸，经过盐水洗涤后吸取红细胞)以盐水稀释成3%作为原液进行不同的稀释并与O型异型血型的血清作盐水配血及聚凝胺配血，测试两种方法出现凝集反应。

　　本试验全部在室温20-28度下进行。盐水介质配血法是在1支试管中加入病人3%红细胞悬液1滴及O型血清1滴混匀以1000r/分钟离心1分钟，轻摇试管观察凝集反应结果。改良凝聚胺配血方法是加受血者血细胞1滴及献血者血清1滴，加低离子介质3滴混匀静置30秒钟，加凝聚胺1滴混匀，以3500r/分钟离心15秒钟，扣摇，肉眼见明显凝集，再加1滴假凝集清除液于管底，轻摇，凝集1分钟内消失呈均匀悬液，再倒于玻片显微镜观察镜下墙角凝集红细胞为阴性，1分钟内凝集不能消除为阳性。盐水配血的方法和凝集反应判读阳性的结果是根据《全国临床检验操作规程》的标准[1]。

　　统计学处理

　　由于在检测过程中不同病人标本红细胞出现阳性反应的稀释度不同，把稀释度数据均用均数±标准差表示表示，应用SPSS 10.0软件进行数据处理。

　　结 果

　　贫血病人3%盐水稀释红细胞作为原液后，再以不同盐水稀释度的盐水配血法(A)和改良聚凝胺配血法(B)凝集反应的结果两种配血方法的结果。

　　讨论

　　改良凝聚胺法中由于凝聚胺是一种多价阳离子溴化己二甲胺多聚物，具有中和肝素的作用，溶解后产生许多正电荷，能中和红细胞表面唾液酸所带的负电荷，使红细胞的Zeta电位降低，红细胞相互间容易接近，外加离心力的作用易诱发红细胞产生可逆的非特异性凝集，反应体系中的低离子介质能大大促进抗原抗体反应，若反应过程中有IgG分子直接与红细胞搭桥，则当非特异性的红细胞凝聚消散后，只有由抗原抗体反应引起的特异性凝聚仍存在。该法既能检测IgM抗体，又能检测IgG抗体，比酶法、抗球蛋白法的灵敏度要高出2-250倍，并且假阳性少，能检出单纯IgG型冷自身抗体，而在盐水介质中无反应[2]。贫血标本对凝聚胺方法和盐水介质配血方法有着部分不同的影响，我们平时配血时没有准确地稀释红细胞，而是凭经验判断红细胞的稀释比例，本研究中用准确的稀释方法做配血试验。在相关的资料[1]和改良凝聚胺试剂盒操作说明书上都标明配血用的抗体是用血清而不是血浆。如果采用血清配血，只有用干试管试验，这样一来，会有部分的标本根本不能取得足够的红细胞，配血所需用的红细胞浓度就会降低，观察配血结果时，盐水介质配血的结果呈现出比较均匀的凝集块，而凝聚胺方法就显得比较大块的凝集块，相对好观察;但如果红细胞浓度太低，凝聚胺法由于加了低离子介质、凝聚胺和假凝集清除液，自然就会稀释红细胞凝集块，这样就会造成观察配血结果困难。所以，不管是盐水介质配血还是凝聚胺方法配血都必须有足够的红细胞浓度，为了取得红细胞的浓度，本研究采取的是枸椽酸钠管方法，因为有试验证明枸椽酸钠对配血无干扰[3]。枸橼酸钠抗凝剂能与血浆中的钙离子形成螯合物，从而阻止血液凝固，它不影响交叉配血中抗原与抗体间结合[4]。

　　配血检查因为要做ABO血型检查、Rh血型检查及配血用的3%红细胞悬液，因此红细胞量至少也要50 μl满足配血检查的需要。用干试管试验时要把上面的血清吸出，然后轻轻搅动血块吸取下面的红细胞。30例中有4例用棉签挤压才能取得足量的红细胞，其余2例根本没办法得到足量的红细胞。本试验中枸椽酸钠管的标本配血中有2例病人标本出现溶血，说明其中有溶血的抗原抗体反应。而4例采取挤压方式获取红细胞的配血试验中有不同程度的溶血现象，其他没有挤压取红细胞的标本除2例病人标本(与枸椽酸钠管抽血的标本一致)出现不同程度的溶血外没有溶血现象。如果靠挤压取得红细胞，势必容易造成标本溶血，影响配血结果的观察，即使是由于配血不合造成的溶血也不易看出，这样也会造成假阴性反应，临床输血的会产生不堪设想后果。所以只能用枸椽酸钠管，这样才能得到需要量的红细胞，保证交叉配血的进行。此外在取红细胞的过程中不能过于激烈地搅动，以免造成溶血。如果病人标本出现黄疸、溶血的现象，应将病人红细胞进行洗涤后才能进行配血。

　　【参考文献】

　　1中华人民共和国卫生部医政司.血型血清学检查.全国临床检验操作规范.第2版.南京:东南大学出版社.1997，89-102

　　2王良华.凝聚胺试验在抗体检测和交叉配血中的应用概况.中国输血杂志，2002;125:433

　　3姜华，付军，李晓艳.3种抗凝剂对手工凝聚胺配血的影响.中国输血杂志，2003; 16:410

　　4门守山.一种少量血样本交叉配血试验方法.中国实验血液学杂志，　2001; 9:73-74