机采血小板悬液在保存过程中凝血因子Ⅷ、Ⅸ生物活性的变化

　　作者：杨江存,李凤琴,李芒会,任健康　　作者单位：陕西省人民医院输血科，西安 710068;1陕西省血液中心，西安 710061;2陕西省医院检验科，西安 710068

　　【摘要】为了研究机采血小板悬液22℃振荡保存不同时间的凝血因子Ⅷ、Ⅸ生物活性的变化，采用SYSMEX CA-1500型全自动血凝仪对用CS-3000plus血细胞分离机采集的18份血小板悬液于22℃振荡保存条件下，测定0、12、24、48、72、96、120小时 7个时间段的FⅧ∶C和FⅨ∶C的活性。结果表明： 机采血小板FⅧ∶C在0时活性为(100.51±44.02)%，保存12-120小时，其活性衰减了10%-40%;FⅨ∶C在0时活性为(120.93±20.50)%，保存24-120小时，其活性衰减了10%-35%。结论： 机采血小板悬液于22℃振荡保存时凝血因子Ⅷ、Ⅸ仍保持有较高的生物学活性。

　　【关键词】 机采血小板

　　Abstract The study was to explore the change of coagulation factorⅧ and Ⅸ activities in the platelet suspension collected by platelet apheresis during storage at 22℃. 18 samples of platelet concentrates were collected by the cs-3000 plus and stored at 22℃ and then FⅧ∶C，FⅨ∶C activities were detected at 0，12，24，48，72，96，120 hours respectively by SYSMEX CA-1500. The results showed that FⅧ∶C activity was (100.51+44.02)% at 0 hour，and then decreased dramatically to 10%-40% of primary level from 12 to 120 hours，while FⅨ∶C activity was (120.93±20.50)% at 0 hour and decreased to 10%-35% of primary level from 24 to 120 hours. In conclusion，FⅧ and FⅨ in the platelet concentrates stored at 22℃ could keep their biological activities at physilogically high levels.

　　Key words plateletapheresis;coagulation factors;FⅧ，Ⅸ;

　　近年来，随着成分输血的普及与推广，各种血液成分，特别是血小板的临床用量不断上升，而用血小板分离机采集的血小板悬液以纯度高、副作用小等优势而受到临床青睐。血小板临床输注是治疗和预防出血性疾病的主要手段，目前国内外以研究机采血小板的功效为主，而对血小板悬液中参与凝血功能的凝血因子活性改变的研究较少。由于血小板与凝血因子是止血的主要成分，观察血小板悬液中不同储存时间的凝血因子的变化对指导临床治疗、选择血液成分具有现实意义。本研究选择凝血因子Ⅷ、Ⅸ为观察指标研究凝血因子的变化，现报道如下。

　　材料和方法

　　主要仪器和试剂

　　SYSMEX CA-1500型全自动血凝仪，标准血浆(LOT 502585B)、活化部分凝血活酶时间(APTT)试剂(LOT 527170)、乏凝血因子Ⅷ血浆(LOT 503816C)、乏凝血因子Ⅸ血浆(LOT 500889)，试剂均为Dade Behring公司生产。

　　机采血小板制备

　　用CS-3000plus血细胞分离机采集血小板，操作按照收集血小板程序说明书进行。ACD-A抗凝剂和全血比例1∶11，处理血量3 500 ml，时间不超过2小时，将获得的血小板悬液置入22℃血小板水平振荡保存箱中保存。

　　取样方法

　　将机采后的血小板悬液水平振荡1小时，使其充分混匀，然后抽取50 ml血小板悬液注入另一无菌血小板储存袋内，22℃振荡保存，并于0、12、24、48、72、96和120小时7个时间点抽取血样0.5 ml注入1.0 ml离心管内，-30℃冷冻保存。测定时置37℃迅速将其融化，2小时内测定完毕。

　　凝血因子测定方法

　　测定严格按照SYSMEX CA-1500全自动血凝分析仪操作说明书和试剂要求进行。采用凝结光学检测法原理，对不同的检测项目利用不同稀释度标准血浆凝结时间与相应的凝血因子活性率，取对数后标绘于对数图上，绘制成标准曲线，然后测定受检者血浆凝结时间与相应因子活性率所获数据按内插法带入回归方程，计算受检者血浆中凝血因子活性水平。观察指标是FⅧ∶C、FⅨ∶C的活性。FⅧ∶C及FⅨ C衰减率的计算见文献〖1]，其计算公式为：

　　衰减率=(某时间段因子活性-0时间段因子

　　活性/0时间段因子活性)×100%

　　统计学处理

　　所测数据用x±SD表示，采用配对资料t检验。

　　结 果

　　机采血小板悬液不同储存时间凝血因子Ⅷ、Ⅸ活性的变化

　   0时FⅧ∶C为(100.51±44.02)%，存放12小时衰减12%，24小时衰减33%，120小时衰减44%，12小时以后各时间点与0小时比较，P<0.05;0时FⅨ∶C活性为(120.93±20.50)%，12小时衰减0.68%，24小时衰减13%，120小时衰减35%，24小时以后各时间点与0小时比较，P<0.05。

　　不同血型机采血小板悬液FⅧ、FⅨ活性比较

　　O型献血员FⅧ∶C为(61.63±19.21)%，而A型和B型均值均在120%以上，说明O型FⅧ：C较其他血型低。

　　讨 论

　　血小板与凝血因子是止血的重要成份，在止血、凝血的过程中，既发挥各自的独特作用，又有相互之间多重促进作用，共同完成凝血的全过程[2]。机采血小板在治疗与预防出血性疾病中因纯度高(2.5×1011/ 袋)、副作用小受到临床欢迎。资料显示，血小板的寿命为9-12天[3]。血小板由于有易黏附、聚集的特性，因而对其悬液的保存有一定的条件要求，只有在22℃水平振荡的条件下血小板的破坏才能减少，FⅧ的体外半减期8-12小时是全血ACD保养液4℃储存条件检测的数据[4]，而22℃水平振荡的条件下FⅧ的衰减情况如何未见有研究报道。由于血小板与凝血因子的密切关系，研究高纯度血小板在22℃水平摇动保存条件下凝血因子Ⅷ 和Ⅸ不同时间段的活性变化，能为指导临床应用血小板及补充凝血因子提供理论依据。

　　本研究显示，血小板悬液于22℃水平振荡保存条件下FⅧ活性衰减情况为：12小时衰减12%、24小时衰减33%，120小时衰减44%，与全血4℃保存条件下半减期为8-12小时结果不相符。这说明，血小板悬液22℃水平振荡保存条件下凝血因子Ⅷ具有较高的凝血活性;而FⅨ∶C衰减情况为：12小时衰减0.68%，24小时衰减13%，120小时衰减35%，这证明血小板悬液22℃水平振荡保存条件下凝血因子Ⅸ活性同样有衰减。

　　本研究显示，机采血小板悬液0时FⅧ∶C活性为(100.51±44.02)%，FⅨ∶C为(120.93±20.50)%，与正常全血分离血浆测试值相同[5]，均值在参考值70%-150%范围之内，但也有3例小于70%，这可能是个体差异所致，也就是说机器采集的血浆对FⅧ∶C和FⅨ∶C无影响，这和文献[6]结果一致。

　　机采血小板悬液临床输注，主要应用于防治血小板减少导致的临床出血。近几年研究结果表明，血小板与凝血因子有着重要的相互关系，血小板表面的膜磷脂酰丝氨酸的外露及血小板膜糖蛋白的存在，成为许多凝血因子激活的场所，为凝血因子Ⅷ、 V 提供了结合活化的平台，进一步放大了凝血因子的活性，促进了凝血过程[7]。本研究资料显示，机采血小板悬液22℃振动条件下，FⅧ∶C 和FⅨ∶C活性与全血分离的新鲜冷冻血浆融化后4℃保存24小时活性[5]相比，具有较高的活性，这是否由于血小板α颗粒含有丰富的纤维蛋白原、因子Ⅴ与因子Ⅷ等多种凝血因子，在血小板活化时释放的结果[8]或是血小板具有分泌保护FⅧ∶C和FⅨⅨ∶C的物质，有待进一步研究。

　　本研究同时对18例机采血小板的FⅧ∶C和FⅨ∶C活性根据不同血型进行比较，发现FⅧ∶C活性在O型献血者中只有(61.63±19.21)%，而A型和B型均值均在120%以上，说明O型FⅧ∶C较其他血型低，这与文献[9]一致;而FⅨ∶C活性在各血型间基本无差异。本研究因例数较少，未对资料进行统计学处理，有待扩大例数验证。

　　综上所述，机采血小板悬液在22℃振荡保存条件下，不仅可使血小板保持良好集聚活性和止血功效，而且可使FⅧ∶C和FⅨ∶C有较高的生物学活性，这样使临床输注机采血小板悬液以补充血小板时，同时也补充了高活性的凝血因子，从而达到临床止血的目的。

　　【参考文献】

　　1胡丽华，曹奎杰，陈汉华等.库存全血凝血因子Ⅷ改变的研究.临床血液学杂志，2000;13:21-22

　　2王兆钺.血小板与凝血因子的相互作用及意义.中华血液学杂志，2003;25：187-189

　　3杨成民，李家增，季阳.基础输血学.北京：中国科学技术出版社，2001：115-118

　　4柏乃庆.血液保存.上海：上海科学技术出版社. 1981：253-253

　　5杨江存，李芒会，于青等.新鲜冰冻血浆融化后不同放置时间凝血因子的变化. 中国输血杂志，2005;3：211-212

　　6吴征，周静宇，蔡莉.单采新鲜冰冻血浆含量监测结果分析.临床输血与检验，2003;5：57-58

　　7Ahmad SS，London FS，Walsh PN. The assembly of the factor X-activating complex on activated platelets. J Thromb Heamost，2003;1: 48-59

　　8 Heemskerrk JW，Bevers EM，Lindhout T. Platelet activation and blood coagulation. Thromb Haemost，2002;88:186-193

　　9Kraaijenhagen RA，Anker PS，Koopman MM，et al. High plasma concentration of factor ⅧC: a major risk factor for venous thromboembolism. Blood，1998;Suppl 1: 501a