GCSF的不同方案动员正常供者外周血干细胞的效果比较

　　作者：王丹红　　作者单位：军事医学科学院附属医院血液科，北京 100071

　　【摘要】为了研究粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)动员的最佳动员方案， 对HLA完全相合的非清髓异基因外周造血干细胞移植的供者60例进行回顾性分析。结果显示： 供者rhGCSF　10 μg/(kg•d)的动员方案组所采集的单个核细胞及CD34+细胞数明显高于供者rhGCSF　5 μg/(kg•d)的动员方案组(P<0.05)。供者rhGCSF　10 μg/(kg•d)的动员方案在第4天或第5天采集时所获得的单个核细胞及CD34+细胞数无统计学差别。供者不同rhGCSF动员剂量及采集时间所获得的CD3+、CD4+、CD8+细胞的百分比无统计学差别。结论： 供者10 μg/(kg•d)的动员效果明显优于供者5 μg/(kg•d)的动员效果。供者10 μg/(kg•d)的动员方案在第4天或第5天采集时效果无统计学差异，但第4天采集可缩短动员天数，降低费用，因此对供者采用10 μg/(kg•d)动员方案时在第4天采集单个核细胞效果更好。

　　【关键词】 粒细胞集落刺激因子,动员方案,非清髓异基因外周血干细胞移植

　　Abstract The aim of study was to select the best scheme of GCSF to mobilize peripheral stem /progenitor　cells in healthy donors. The clinical data of 60 cases received nonmyeloablative allogenic hematopoietic stem cell transplantation was analyzed retrospectively. The results indicated that the counts of MNC and CD34+ cells were significantly higher in the 10 μg/(kg•d)group than that in the 5 μg/(kg•d)group(P<0.05). The counts of MNC and CD34+ cells which were collected after day 4 or 5 in the 10 μg/(kg•d) groups were not significantly different. The percentage of CD3+ cells, CD4+ cells and CD8+ cells were not different in different groups. It is concluded that the scheme using 10 μg/(kg•d) GCSF is more efficient than that in the 5 μg/(kg•d) group in mobilizing stem cells. It may reduce days for mobilization and decrease expense for collection of cells after 4 days of mobilization. Scheme using 10 μg/(kg•d) GCSF for cells collecting after 4 days is more efficient.

　　Key words GCSF; mobilization scheme; nonmyeloablative allogenic hematopoietic stem cell trausplantation

　　J Exp Hematol 2007; 15(1):165-167

　　异基因外周血干细胞移植具有造血恢复快、并发症少、供者不需麻醉和创伤小等优点，目前已被广泛应用于临床，有逐渐替代骨髓移植的趋势。外周血中干细胞数量少，有效的动员可使供者外周血干细胞数量成十倍和成百倍的增加，可获得足够的干细胞，确保移植成功。现将我们对60例粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)不同动员方案对正常供者外周血干细胞的动员效果进行了比较。

　　材料和方法

　　供者情况

　　60名供者为2001年2月至2005年5月HLA配型完全相合的同胞健康供者。供者动员方案分为3组：A组为以rhGCSF 5 μg/(kg•d)动员于5天采集的方案组，共17例，其中男10例、女7例，平均年龄39岁(24-55岁)。B组为以rhGCSF 10 μg/(kg•d)动员于第5天采集的方案组，共22例，其中男12例、女10例，平均年龄41岁(25-61岁)。C组为以rhGCSF 10 μg/(kg•d)动员于第4天采集的方案组，共21例，其中男12例、女9例，平均年龄40岁(28-56岁)。在分布上具有均衡性(P>0.05)。

　　造血干祖细胞的动员与采集

　　用日本麒麟公司生产的惠尔血(rhGCSF)做动员剂。采集干细胞均应用Baxter CS3000plus采集，1-3次。采集干细胞时每次外周血量10 L，血流速50-55 ml/min，分离干细胞终体积50 ml。对A组供者皮下注射rhGCSF　5 μg/(kg•d)，每日1次，于第5天开始采集供者干细胞。对B组供者皮下注射rhGCSF　10 μg/(kg•d)，每日2次(间隔12小时)，于第5天开始采集。对C组供者皮下注射rhGCSF　10 μg/(kg•d)，每日2次(间隔12小时)，于第4天开始采集。供者在动员中同时口服钙剂。

　　细胞标记

　　取每次采集的单个核细胞100 μl，加PE标记的抗CD34及抗CD3单克隆抗体以及FITC标记的抗CD38、抗CD4和抗CD8单克隆抗体共同避光室温孵育20分钟，裂解红细胞，洗涤，再加10 g/L多聚甲醛固定，应用流式细胞仪分析。

　　统计学分析

　　数据以均数±标准差(±SD)表示，以t检验进行分析。

　　结 果

　　各动员方案组的单个核细胞和CD34+细胞量

　　A组动员方案所采集的单个核细胞数为(2.95±0.92)×108/kg， CD34+细胞数为(2.28±1.22)×106/kg。B组动员方案所采集的单个核细胞数为(4.57±1.31)×108/kg，CD34+细胞数为(3.54±0.98)x106/kg。C组动员方案所采集的单个核细胞数为(4.39±1.11)×108/kg，CD34+细胞数为(3.79±1.20)×106/kg。B组和C组采集的单个核细胞数和CD34+细胞数明显高于A组，B组和C组与A组比较差异有统计学意义(P<0.05)。B组采集的单个核细胞数高于C组，C组的CD34+细胞数高于B组，但B组和C组之间的单个核细胞数和CD34+细胞数比较无统计学差异(P>0.05)(附表)。

　　各动员方案组的CD3+、CD4+和CD8+细胞量

　　不同的rhGCSF动员剂量及采集时间所获得的CD3+、CD4+、CD8+细胞的百分比无统计学差别。由此表明，CD3+、CD4+、CD8+细胞的百分比与GCSF呈非剂量依赖性，与采集时间无关(附表)。

　　不良反应

　　60例供者在动员中有2例自觉有骨痛，未治疗可耐受。60例供者均无发热、乏力、头痛、恶心、呕吐等不良反应。这表明rhGCSF动员剂量为5 μg/(kg•d)或10 μg/(kg•d)均是安全的，供者均可耐受。供者在分离中仅有1例出现四肢、口唇麻痹等枸橼酸盐反应，加大口服钙剂量后缓解。

　　讨 论

　　以GCSF为主的造血干细胞动员是通过影响造血干细胞和骨髓基质微环境的黏附分子表达或功能状态，降低造血干细胞与骨髓基质等的黏附作用，使造血干细胞迁离骨髓，进入外周血循环。目前异体外周血干细胞动员以单用GCSF最常见。GCSF动员CD34+细胞数随GCSF动员剂量的增加而增加，剂量在10 μg/(kg•d)以下，剂量与动员效果呈正相关，大剂量时则相关关系不明确,故目前推荐剂量为5 -10 μg/(kg•d)。动员细胞数高峰一般出现在第5、第6天，所以一般GCSF连用5天，第5天开始采集。近来研究表明，GCSF 10 μg/(kg•d)1日分2次动员(间隔12小时)比10 μg/(kg•d)1日1次动员的方案更优越，所获得CD34+细胞数更多[1，2]。而且当动员剂量增至10 μg/(kg•d)时，出现CD34+细胞的高峰提前，动员第4天就能采集高质量的干细胞且供者能较好的耐受。国外学者应用短疗程动员方案，即GCSF　10 μg/(kg•d)分为2次注射、注射3天的动员方案可使84%的患者获得目标产量，减少采集次数，降低动员费用[3]。我们对我院HLA完全相合的非清髓异基因外周造血干细胞移植的供者60例进行回顾性分析。为了达到移植成功，患者需输入供者动员后的CD34+细胞数(4-6 )×106/kg，故对A组动员方案供者常常需要采集2次以上才能达到所需的细胞数，而对B组和C组动员方案供者大多采集1次即可达到所需的细胞数。供者对3组动员方案，均可耐受，均是安全的。由此可见B组和C组的动员效果明显优于A组。B组和C组动员方案的动员效果无统计学差异，但对C组动员方案供者可在第4天采集，这样动员天数缩短，费用降低，故我们认为，以10 μg/(kg•d)(分2次注射)动员，于第4天采集的方案更好。另外，有文献报道rhGCSF动员前后的淋巴细胞比例无明显变化[4]。而我们的结果提示动员后供者CD3+、CD4+、CD8+细胞的百分比较正常值明显降低，但不同rhGCSF动员剂量及采集时间所获得的CD3+、CD4+、CD8+细胞的百分比无统计学差别。这一结果表明，CD3+、CD4+、CD8+细胞的百分比与GCSF是非剂量依赖性的，与采集时间无关，这与淋巴细胞表面未发现rhGCSF受体相符。我们发现动员后供者CD3+、CD4+、CD8+细胞的百分比较正常值明显降低，这可能是rhGCSF通过单核细胞的抑制作用而间接影响T淋巴细胞的增殖和分泌功能所致[5]。

　　【参考文献】

　　1Kroger N，Zeller W，Hassan HT，et al. Stem cell mobilization with GCSF alone in breast cancer patients：higher progenitor cell yield by delivering divided doses(2×5 μg/kg)compared to a single dose(1×10 μg/kg). Bone Marrow Transplant，1999;23：125-129

　　2肖秀斌，郭梅，乔建辉等.单次和分次应用GCSF动员供体外周血干细胞的疗效比较.解放军医学杂志，2004; 29：603-604

　　3Stroncek D, Anderlini P. Mobilized PBPC concentrates: a maturing blood component. Transfusion，2001;41：168-171

　　4黄文荣，达万明，邓新立等.中剂量rhGCSF动员对供者外周血免疫细胞组成的影响.中国实验血液学杂志，2005; 13：852-856

　　5Nawa Y, Teshima T, Sunami K. et al. GCSF reduces IFNγ and IL4 production by T cells after allogeneic stimulation by indirectly modulating monocyte function. Bone Marrow Transplant, 2000; 25:1035-1040