急性白血病患者血清及骨髓TGF－β1水平测定的临床意义
发表时间：2010-10-15 浏览次数：510次
作者：万楚成， 夏云金， 刘 瑜， 章正华， 张 霞， 龙志国， 胡明均， 杨华强， 郭仁慈 作者单位：郧阳医学院附属太和医院血液科，湖北 十堰 442000
【摘要】 目的： 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在急性白血病中的临床意义。方法：采用酶联免疫法(ELISA)测定68例急性白血病患者血清及骨髓中TGF-β1水平。结果：急性白血病初诊患者血清及骨髓TGF-β1水平明显低于正常对照组(P<0.05)，完全缓解期TGF-β1水平恢复正常，未缓解和复发患者TGF-β1水平与初诊患者无明显差异(P>0.05)。结论：检测TGF-β1水平变化有助于急性白血病病情判断，可作为疗效观察的辅助指标。
【关键词】 急性白血病
Clinical significance of serum and bone marrow levels of TGF-β1 in patients with acute leukemia WAN Chu-cheng, XIA Yun-jin, LIU Yu, et al (Department of Hematology, Taihe Hospital, Yunyang Medical College, Shiyan， Hubei 442000)
Abstract： Objective To investigate clinical significance of TGF-β1 in patients with acute leukemia. Methods Serum and bone marrow levels of TGF-β1 in 68 patients with acute leukemia were determined by ELISA. Results The serum and bone marrow levels of TGF-β1 in initial patients with acute leukemia was significantly higher than of control (P<0.05), and decreased to normal in the patients at complete remission period . There were no difference in TGF-β1 between non-remission and relapse and initial patients(P>0.05). Conclusion To determine serum and bone marrow levels of TGF-β1 in the patients with acute leukemia is useful to judge state of illness, and TGF-β1 was regarded as assistant index of curative effect.
Key words: Acute leukemia; Transfroming growth factor β1; ELISA; serum; bone marrow
急性白血病患者存在细胞因子调控异常，转化生长因子β1(Transfroming growth factor-β1,TGF-β1)是具有强大生物活性的细胞因子，是造血系统重要的负调节因子，对造血细胞有显著抑制作用，TGF-β1可抑制白血病细胞的生长[1]。我们用ELISA方法检测急性白血病患者缓解前后血清及骨髓中TGF-β1水平，探讨TGF在急性白血病中的临床意义。
1 材料与方法
1.1 病例选择2000年1月~2002年6月在我院住院的初诊急性白血病68例，年龄13~65岁，中位年龄33岁，所有患者均经临床、血象、骨髓象确诊，部分病例经免疫组织化学及染色体检查确诊。按FAB分型，急性非淋巴细胞白血病(ANLL)45例，其中M13例，M215例，M38例，M45例，M511例，M62例，M71例;急性淋巴细胞白血病(ALL)23例。ANLL采用DA、DAE方案治疗，ALL用VDLP、VDCP方案治疗。疗效评定按文献[2]的标准判定。45例ANLL中30例达到完全缓解(CR)，其中13例复发，未缓解及部分缓解(NR+PR)15例;23例ALL有16例CR，其中9例复发，(NR+PR) 7例。
1.2 正常对照正常血清标本24例，正常骨髓18例，均来源于正常志愿献血员。
1.3 标本采集所有患者首先在化疗前采集外周血及骨髓标本，在化疗疗程结束后再次采集外周血及骨髓标本，在达到完全缓解或复发时第3次采集外周血及骨髓标本，取血清及骨髓上清液标本保存于-20 ℃备用。
1.4 血清及骨髓上清液TGF水平测定TGF-β1试剂盒为美国Genzyme公司产品，采用双抗体夹心ELISA法，按照说明书配制不同浓度的标准品(2 000 pg/ml、1 000 pg/ml、500 pg/ml、125 pg/ml、50 pg/ml、0 pg/ml)、生物素抗体工作液和酶结合工作液。激活标本，在酶标板中，除空白孔外，分别将标本或不同浓度标准品(100 μl/孔)加入相应孔中，封板、孵育，加入生物素抗体工作液(100 μl/孔)、酶结合物工作液(100 μl/孔)、显色剂(100 μl/孔)，避光室温10～15 min，加入终止液(100 μl/孔)，混匀后即刻应用MK-3酶标测试仪测定，所测结果乘以稀释倍数(50×)即为实际浓度。
1.5 统计学处理数据以x±s表示，组间比较用方差分析。
2 结果
2.1 治疗前白血病患者血清及骨髓上清液中TGF-β1水平68例急性白血病患者与正常对照血清及骨髓上清液中TGF-β1水平检测结果见表1。从中可以看出，治疗前急性白血病患者血清及骨髓上清液中TGF-β1水平较正常对照组显著降低(P<0.05)，骨髓上清液中TGF-β1与血清水平无明显差异(P>0.05)。
2.2 白血病治疗后CR、复发时血清及骨髓中TGF-β1水平在30例CR的 ANLL及16例CR的ALL患者中，血清及骨髓中TGF-β1水平与治疗前明显升高，而未达到完全缓解及复发者血清及骨髓中TGF-β1水平仍然处于较低水平，与治疗前无明显变化(见表1)。表1 急性白血病患者治疗前后血清及骨髓中TGF-β1水平(μg/L)情况注：与对照组比较，*P<0.05;与治疗前比较，△P<0.05， #P>0.05。
3 讨论
急性白血病细胞因子水平的改变是近年临床研究的热点之一，TGF因能使大鼠肾脏成纤维细胞发生表型转化而得名，机体多种组织和细胞如淋巴细胞、单核细胞及血小板等均能产生，TGF-β1是其在人体内的主要存在形式，其主要功能是调节细胞增殖、分化，细胞外基质形成，细胞的移动、粘附，肿瘤转移。有研究认为TGF-β1可以明显抑制血细胞增殖，可抑制CD34+细胞克隆形成，TGF-β1及其相应受体在正常造血细胞生长分化的各个阶段均有表达[3~5]。体外培养证实TGF-β1对各种类型的ANLL及B-ALL细胞有抑制作用[6]。TGF-β1的功能通过与特异性受体结合才得以完成。有证据表明，TGF-β1信号主要由Ⅰ型和Ⅱ型受体介导，TGF-β1通过下调细胞周期素A抑制肿瘤细胞的生长[7]。本研究表明ANLL和ALL初诊时血清和骨髓中的TGF-β1水平明显降低，与正常对照有显著性差异(P<0.05)，ANLL与ALL之间无明显差异，血液与骨髓之间无明显差异。表明一方面急性白血病患者血清及骨髓中TGF-β1生成减少，对白血病细胞的抑制作用减弱，白血病细胞得以增殖;另一方面有研究证实TGF-β1在Fas诱导的细胞凋亡过程中起重要的调节作用，TGF-β1通过下调bcl-2、C-myc表达诱导白血病细胞凋亡[8,9]。由于TGF-β1在血清及骨髓中含量较低，难以有效诱导白血病细胞凋亡。我们的观察显示，在ANLL和ALL治疗后，其血清和骨髓中的TGF-β1水平随临床情况不同而显示出明显差异，在CR患者中TGF-β1水平与治疗前相比较有明显升高，已达到或接近正常水平;而未能达到CR及复发患者其水平与治疗前相比无明显变化，在治疗后TGF-β1水平仍然较低，难以发挥其对白血病细胞的抑制作用，白血病难以达到CR或CR后复发。说明在临床上通过TGF-β1的检测对急性白血病的疗效和预后进行判断有一定意义，可作为疗效观察的辅助指标。根据血清和骨髓中TGF-β1水平情况，在临床上选择适当时机应用TGF-β1，将有助于发挥其抑制白血病细胞增殖并诱导白血病细胞凋亡的作用，为白血病的治疗提供新的思路和方法。但是，由于TGF-β1功能的复杂性，其受体的异常及信号传递通路的异常也是肿瘤细胞逃逸TGF-β1生长抑制作用的重要机制[10]。即使在某些TGF-β1水平正常的白血病中，由于其TGF-β1Ⅰ型和Ⅱ型受体均存在缺陷，使白血病细胞逃脱了TGF-β1的抑制作用，得以增殖。因此，对TGF-β1在急性白血病中的情况尚需进行更深入的研究，才能更好地将其应用于临床。
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