汇集滤白细胞血小板的研制及临床应用

　　作者：陈龙菊,　程亚媛，刘义明，梁其隆，孙天钢，周明欣 作者单位：(1.广东省茂名市中心血站，广东茂名 525000;2.广东省湛江市第二人民医院，广东湛江 524003;3.广东省高州市人民医院输血科，广东高州 525200;4.广东省高州市中医院血库，广东高州 525200)

　　【摘要】 目的 评价汇集滤白细胞血小板的质量和临床效果。方法 用白膜层法制备手工浓缩血小板，再以60～70 mL/min的速度对汇集血小板进行白细胞过滤。30袋汇集滤白细胞血小板过滤前后分别进行血小板含量、白细胞残留量检测和细菌培养，并观察87例出血患者(血液病16例、非血液病71例)输注后24 h疗效。结果 30袋汇集滤白细胞血小板过滤前后血小板含量差异无统计学意义(P>0.05)，白细胞残留量差异有统计学意义(P<0.01)，细菌培养均为阴性。非血液病出血患者输注汇集滤白细胞血小板的有效率是85.9%，而血液病患者输注有效率是75.0%。结论 汇集滤白细胞血小板质量指标均达到单采血小板国家质量标准，临床应用效果良好。

　　【关键词】 白细胞过滤;汇集血小板;临床应用;白膜层法

　　Preparation and clinical application of leukocytefiltrated platelet concentrate

　　CHEN Longju1,CHENG Yayuan1,LIU Yiming2, LIANG Qilong1, SUN Tiangang3, ZHOU Mingxin4　(1.Central Blood Station of Maoming, Maoming 525000,China)

　　Abstract: Objective To evaluate the quality and clinical effectiveness of leukocytefiltrated platelet concentrate. Methods The platelet concentrate was prepared manually by buffy coat, and then filtrated at the speed of 70 mL/min for removal of leukocyte.Thirty bags of platelet concentrates were detected by platelet and WBC count and bacterial culture before and after leukocyte filtration.The 24h clinical efficacy in 87 patients with hemorrhagic disease (hematologic diseases, 16; nonhematologic diseases, 71)was observed after infusion of leukocytefiltrated platelet concentrate. Results Platelet count remained intact (P>0.05)and bacterial culture was negative, but WBC count decreased obviously (P<0.01)after leukocyte filtration in 30 bags of platelet concentrates.The effective rates were 85.9% and 75.0% in nonhematologic and hematologic patients, respectively.Conclusion The quality of the leukocytefiltrated platelet concentrate meets the state criterion for singlesampling platelet, and its clinical efficacy is satisfactory.

　　Key words: leukocyte filtration; platelet concentrate; clinical application; buffy coat

　　浓缩血小板(platelet concentrates，PCs)主要是指单采血小板、手工分离浓缩血小板(手工PCs)和冰冻血小板。我国临床应用的主要是单采血小板，手工PCs和冰冻血小板因临床疗效等原因在临床上较少使用。国外对汇集血小板的质量、体外功能活性、临床输注效果等进行了研究，证明其安全有效[1]，已在临床上广泛应用。目前，我国大部分地区的单采血源不足、单采血小板远不能满足临床用血的需要，急诊状态下的血小板供需矛盾尤为突出。笔者根据本市单采血源不足的情况，利用现有的血液资源，研制了汇集滤白细胞血小板，并对其质量指标和临床输注效果等进行观察，现报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 血液来源 血液来源于本市无偿献血者，按卫生部《献血者健康检查要求》体检合格后采血，采血严格执行无菌操作规程。

　　1.1.2 临床资料 2008年在高州市人民医院住院输注汇集滤白细胞血小板的患者共87例，其中血液病16例，非血液病71例，非血液病患者均为产科、外科急症出血或手术出血患者。每次输入剂量为1个治疗量。

　　1.1.3 实验材料 带有15mL样品采集袋的一次性使用塑料四联血袋(广州华南医疗用品有限公司);一次性血液增菌培养基(杭州微生物试剂有限公司)。37℃生化培养箱(广东省医疗器械厂);J6MI低温离心机(美国贝克曼公司);CompoDock全自动无菌接管机(德国费森尤斯公司);PTSPL310滤除白细胞输血器(南京双威实业公司，批号070126);F820血细胞计数仪(日本Sysmex);显微镜和Nageotte细胞计数板。

　　1.2 方法

　　1.2.1 制备PCs的全血采集方法 对肘部皮肤无或存在瘢痕增生和皮肤皱折的献血者，分别采用碘伏消毒法、过氧化氢+碘伏消毒联合消毒法消毒皮肤后采血，采血均用带血样采集袋的一次性四联血袋，并弃去最初采集的约10 mL血液(弃于样品采集袋中)，采集的200或400 mL新鲜全血保存于(22±2)℃贮血箱内备用。

　　1.2.2 白膜层法制备手工PCs 将用于制备手工PCs的新鲜全血在6 h内离心(2100 g，19 min)分离出白膜层，轻轻混合均匀后再次离心(280 g,10 min), 分离出富含血小板血浆即为手工PCs，将手工PCs于(22±2)℃血小板振荡保存箱内保存备用。

　　1.2.3 汇集滤白细胞血小板的制备 将按国家标准检验合格、ABO同血型的12～14U的手工PCs，应用CompoDock全自动无菌接管机汇集成一袋汇集血小板，再无菌接驳PL310滤除白细胞输血器、采用60～70 mL/min过滤速度进行白细胞过滤，过滤结束后混合均匀，即为1个治疗量的汇集滤白细胞血小板;随机抽取2007年2-10月检测合格的手工PCs，按上述方法制成30袋汇集滤白细胞血小板，过滤前后均留样用于血细胞计数和细菌培养。

　　1.2.4 汇集滤白细胞血小板输注方法 ABO同型、以患者可以耐受的速度尽快输注完毕。

　　1.2.5 血小板(PLT)和白细胞(WBC)的检测 按照F820血细胞计数仪使用说明书的操作，对过滤前后的每袋汇集血小板进行PLT计数;用Nageotte大容量计数池检测过滤前后汇集血小板中的WBC残留量。

　　1.2.6 细菌培养方法 样本在无菌室接种于一次性血液增菌培养基，接种后于37℃生化培养箱培养，每天观察1次，连续培养7d，有菌生长判为阳性，无菌生长判为阴性。

　　1.2.7 汇集滤白细胞血小板输注有效性观察 对87例患者分别输注汇集滤白细胞血小板，输注前、输后24h分别进行血小板计数检测，以输注后24h时实际血小板增高指数(CCI)>7.5×109判定为血小板输注有效。

　　1.2.8 统计学处理 采用配对t检验。

　　2 结果

　　2.1 过滤前后汇集血小板的主要质量指标检测结果

　　过滤后的WBC残留量明显低于过滤前(P<0.01),PLT含量过滤前后差异无统计学意义(P>0.05)，细菌培养阴性。PLT、WBC、细菌培养结果详见表1。表1 滤过前后汇集血小板主要质量指标比较 **　阴性单采血小板国家标准≥2.5≤50.0 阴性与过滤前比较：*P>0.05，** P<0.01。

　　2.2 不同疾病输注汇集滤白细胞血小板的效果观察

　　87例患者输注汇集滤白细胞血小板的总有效率为80.5%，详见表2。表2 不同疾病输注汇集滤白细胞血小板效果 与输注前比较：*P<0.05，**P<0.01。

　　3 结论

　　手工PCs是从常规采集的全血中分离制备，其全血可分散在各地采集，故手工PCs容易获得;而单采血小板必须到指定献血场所用特殊仪器采集，献血过程较长(全程需2～4h)，因而影响了单采血小板捐献者的积极性，本省大部分地区都存在单采血源不足的现象;但由于一个治疗量的手工PCs需要多人份(6～12人份)的PCs，污染了较大量的白细胞(106～1011)[2]，易引发同种免疫、血小板输注无效等不良输血反应，因此手工PCs存在输注疗效差、配血和输注环节繁琐，临床难以推广应用。目前血小板的供需现状是手工PCs贮备充足，临床使用只有少数;单采血小板因血源缺乏而供不应求，需预约排队等候。

　　本研究是以汇集血小板为研究对象，观察其过滤前后质量指标的变化和临床输注效果。由表1可知，30袋过滤后汇集血小板的PLT计数、WBC残留量、无菌试验特定指标均符合GB 184692001《全血及成份血质量要求》中单采血小板的质量标准，其中WBC残留量已达到或接近避免同种免疫、防止或延缓血小板输注无效的预期值(<5×106/袋)[3]。本研究选择60～70 mL/min的速度对汇集血小板进行白细胞过滤[4]，过滤前后WBC含量比较差异有统计学意义(P<0.01)，PLT含量则无明显变化，结果显示，本法既能获得高质量的PLT，又能大部分清除白细胞。目前血小板制品细菌污染最主要的原因是在采血时细菌经针头进入血袋[5]，多人份的PCs混合受污染的机率更大，本研究针对采血部位皮肤的不同情况选用不同的采前皮肤消毒方法和弃去采血最初10 mL血液，能有效降低血液制品中细菌的污染率[5]。本文结果显示：30袋汇集滤白细胞血小板无菌试验均为阴性，表明所制备的汇集滤白细胞血小板是安全的。

　　由表2可知，临床输注汇集滤白细胞血小板共87例，非血液病组输注有效率是85.9%，血液病组输注有效率是75.0%，与相关报道相近[6]。87例患者输注汇集滤白细胞血小板后均无输血性发热反应生，输注后皮肤、黏膜出血点明显减少或伤口渗血明显改善的，血液病组11例、非血液病组68例，输注后无明显变化的血液病组5例，非血液病组3例。据资料显示，血小板输注无效，约80%为白细胞的HLA抗体所致[7]，本研究的汇集滤白细胞血小板去除了绝大部分的白细胞，滤后白细胞达到5.3×106/袋，大大降低了同种免疫、血小板输注无效和非溶血性发热反应等不良输血反应，提高了输注疗效。

　　汇集滤白细胞血小板，与手工PCs相比，具有疗效好、使用方便、快速、降低输注环节细菌污染风险等优点，与单采血小板相比，具有一血多用、节约血源、不需专用仪器采集、制品容易获得、供应及时、解决了急诊状态下的供需矛盾等优点。目前，我省大部分地区存在无偿捐献单采血小板血源不足的事实，综合利用、开发现有的血液资源制备汇集滤白细胞血小板，既补充了单采血小板血源的不足，又解决了供需矛盾(特别是急诊状态下的供需矛盾)，这对临床抢救大出血患者有重要意义，具有较好的经济效益和社会效益，值得推广应用。

　　【参考文献】

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　　[2]石田明,杨国荣.去除白细胞的血小板输血的临床实用性[J].日本医学介绍,1998, 19(4):157159.

　　[3]阎石,韩平,陈雅勇.血小板输注无效的临床问题[J].中华血液学杂志, 1993, 14(12): 659660.

　　[4]陈龙菊,梁其隆,甘芳香.滤过速度对混合血小板过滤效果的影响[J].广东医学院学报, 2008, 26(2):132134.

　　[5]陈龙菊,梁其隆,高艳,等.采血前不同皮肤消毒方法降低献血者血液细菌污染率的比较[J].中国输血杂志, 2007,20(4):328329.

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　　[7]Rogers S E, Edmondson D, Goodrick M J.Prestorage white cell reduction in saline adenine glucose mannitol red cells by use of an integral filter:evaluation of storage values and in vivo recovery[J].Transfusion,1995,35(9):727.