VEGF和MVD在乳腺疾病血管生成中的意义

　　作者：武变荣 李积德 郭振昌 骆玉霜 沈存芳 作者单位：(1.青海大学医学院;2.青海大学附属医院)

　　【摘要】 目的 探讨VEGF和MVD在乳腺疾病血管生成中的意义。 方法 采用免疫组化染色法(S-P法)检测70例乳腺疾病患者(乳腺良性疾病患者28例，乳腺癌患者42例)术后标本中VEGF表达水平和MVD值。结果 乳腺癌组VEGF高表达比例和MVD值均较乳腺良性疾病组高，差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌组VEGF表达与年龄、肿块大小、HER2相关，与腋淋巴结、临床分期、ER、PR无关，而MVD仅与肿瘤大小和HER2相关。VEGF高表达组MVD值显著高于VEGF低表达组MVD值，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 联合检测VEGF和MVD对预测乳腺疾病预后有积极意义。 武变荣(1979～)，女，汉族，山西籍，青海大学医学院2005级研究生

　　【关键词】 乳腺癌 VEGF MVD 免疫组化染色法

　　THE VALUE OF VEGF AND MVD IN BREAST

　　DISEASES ANGIOGENESIS

　　Wu Bianrong1, Li Jide2, Guo Zhenchang2, et al.

　　(1.Qinghai University Medical College;2.Qinghai University Affiliated Hospital)

　　Abstract Objective To detect the value of MVD and VEGF in breast disease angiogenesis. Methods The expression of VEGF and MVD in 70 cases of breast diseases was examined by immunohistochemistry staining (SP-method). Results VEGF expression and MVD value in breast cancer were much higher than benign breast disease, there was a correlation between VEGF expression and age, tumor size and HER2 in breast cancer and there was no correlation between other clinical parameters, but MVD was correlated with tumor size and HER2. MVD valve in VEGF high expression group was higher than VEGF low expression group (P <0.05). Conclusion It shows positive significance in detection of MVD and VEGF both in breast disease angiogenesis.

　　Key words Breast Cancer VEGF MVD Immunohistochemistry staining

　　乳腺癌与所有实体肿瘤一样, 其肿瘤细胞旺盛的代谢、增殖需要充足的血液供应, 其肿瘤新生血管形成与肿瘤的发生、发展密切相关。促血管形成因子的表达能促进肿瘤新生血管形成, 为肿瘤的生长、浸润及转移创造条件，血管内皮生长因子(VEGF)是已知作用最强、活性最高的促血管形成因子;微血管密度(MVD)是显示肿瘤血管形成活性的重要指标。我们分别应用抗Ⅷ因子抗体和VEGF单克隆抗体染色免疫组化方法检测乳腺疾病患者病例中MVD和VEGF表达情况, 旨在探讨其在乳腺疾病血管生成中的作用和意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 临床资料

　　收集2006年～2007年于我院外科行手术治疗乳腺疾病病例70例;年龄32～64岁，中位年龄47岁;其中乳腺良性疾病患者28例，经病理证实的乳腺癌患者42例;乳腺癌组中无淋巴结转移者19例, 有淋巴结转移者23例;年龄小于45岁者16例，大于45岁者26例。早期(Ⅰ-Ⅱa期)病例16例，中晚期(Ⅱb-Ⅲ期)病例26例。因Ⅳ期患者未行手术治疗，故本资料中无Ⅳ期病例。

　　1. 2 主要试剂

　　第Ⅷ因子抗体、抗VEGF单克隆抗体及SP试剂盒购自福州迈新生物有限公司。

　　1. 3 染色方法

　　采用免疫组织化学染色法(S-P法), 将标本做常规石蜡包埋后连续切片(4μm), 脱蜡，水化，用PBS冲洗(10min×3次);滴加一抗(VEGF抗体和第Ⅷ因子抗体)，4℃孵育过夜，PBS冲洗(10min×3次);滴加二抗[辣根过氧化物酶(HRP)]，37℃孵育30min，PBS冲洗(10min×3次);DAB显色，37℃孵育30min，PBS冲洗(10min×3次);自来水冲洗，苏木精浅染，自来水冲洗反蓝，梯度酒精脱水，透明，中性树胶封固。用已知阳性切片做阳性对照，用PBS液代替一抗做阴性对照。

　　1. 4 判断标准

　　VEGF表达以细胞质出现棕黄色或棕褐色颗粒者为阳性细胞，在低倍镜(×40)下观察切片并选择阳性细胞分布较密集的区域，然后在高倍镜(×400)下计数3个“热点 (hot spot)”，细胞数按染色深浅分为4个等级：(-) <5% ;(+) 6%～25%;(++) 26%～50%;(+++) >50%。(-)和(+)为低表达;(++)和(+++)为高表达。MVD记数参照Weidner [1]方法。

　　1. 5 统计学方法

　　计量资料用t检验，计数资料用χ2检验，两变量资料相关分析用Spearman's法。全部资料均用SPSS11.5统计软件分析完成。

　　2 结果

　　2.1 乳腺癌组与乳腺良性疾病组MVD值、VEGF表达的比较(见表1)

　　表1乳腺癌组与乳腺良性疾病组MVD值、VEGF表达比较

　　组 别nMVD

　　(x±S，个)VEGF低表达(例)高表达(例)乳腺癌组4256.48±14.601428乳腺良性疾病组2842.86±15.89199

　　表1显示，乳腺癌组MVD值比乳腺良性疾病组显著增高(P<0.01);乳腺癌组VEGF高表达比例比乳腺良性疾病组高(P<0.01)。

　　2.2 乳腺癌组VEGF表达和MVD值与临床相关因素关系(见表2)

　　表2显示，乳腺癌组VEGF高表达情况在两个不同年龄组间差异有显著性，在两个不同的肿块大小组间差异也有显著性，在腋淋巴结是否转移、临床分期、ER、PR组间差异无显著性。而MVD值仅在不同的肿块大小组间差异有显著性，与其他因素组间差异均无显著性。

　　2.3 HER2(人类表皮生长因子受体家族的第2个成员)表达与VEGF、MVD之间的关系

　　HER2的表达与VEGF的表达(r=0.576)以及MVD值(r=0.613)之间均呈正相关，差异有统计学意义(P<0.05)。

　　2.4 乳腺癌中VEGF表达水平与MVD值的关系(见表3) 表2乳腺癌组VEGF表达和MVD值与临床相关因素关系表342例乳腺癌中VEGF表达水平与MVD值的关系表3显示，乳腺癌VEGF高表达组的MVD值明显高于低表达组，差异有统计学意义(P<0.05)。

　　3 讨论

　　恶性肿瘤治疗的成败主要取决于肿瘤是否发生扩散、转移，而恶性肿瘤的扩散转移是一个多因素参与的极其复杂的过程。无论是原发肿瘤的生长、扩散、转移还是转移瘤的形成，肿瘤组织内血管生成均是其中的主要环节之一[2，3]。瘤组织内的血管生成及血管的多少(即MVD)又是由多个因素决定的，并反映了肿瘤组织内的血液灌注状况，影响着肿瘤的转移。乳腺肿瘤是典型的血管生成依赖性病变，Folkman[2]认为，当实体肿瘤生长超过2 mm3时即需要新生血管来维持肿瘤的生长。血管生成不仅促进肿瘤生长，还与肿瘤的浸润及转移密切相关。恶性肿瘤细胞能分泌多种血管活性物质，直接或间接作用于血管内皮细胞，促进新的血管形成，其中VEGF是作用最强、特异性最高的调控因子。VEGF在肿瘤组织中的表达高于在乳腺良性疾病和正常乳腺的组织中的表达[5，6]，且缺氧、原癌基因等可以上调肿瘤组织中VEGF的水平，VEGF与组织学分级呈正相关，随着组织学分级的增高，VEGF阳性率升高;VEGF和一些其他生长因子相似，可以在不同状态下调节本身的受体表达，以达到促进肿瘤细胞增长，临床恶性程度上升及转移的功能，即与肿瘤的生物学行为相关[7]。还有研究证实VEGF表达与血管生成及乳腺癌预后有关。

　　血管生成在相关分子病理学上表现为VEGF的表达，在组织病理学上表现为MVD增高。有研究表明，MVD可作为乳腺癌的一项独立预后因素，已成为目前评价肿瘤血管生成的金标准。MVD系用免疫组织化学方法标记肿瘤组织中的微血管，通过计数其单位面积上的微血管数目来间接判断肿瘤的血管生成能力。近年来，乳腺癌组织内微血管计数与肿瘤局部复发、转移的关系日益受到重视，并认为肿瘤组织内微血管计数比单纯测定一些血管生长因子的表达更有意义[2]，乳腺癌组织内新生毛细血管量的多少同淋巴结转移有密切的关系,即肿瘤内毛细血管数量越多淋巴结转移的机率也愈高。目前的研究表明，恶性肿瘤组织中的MVD值较高，而在正常组织和良性肿瘤组织中均较低。

　　本研究显示，乳腺癌患者MVD值及VEGF表达水平均高于乳腺良性病变患者 (P<0.05)，说明良恶性乳腺肿瘤组织的新生血管形成活性有显著差异，这对鉴别良恶性肿瘤有很大帮助。42例乳腺癌患者中VEGF表达和MVD值与淋巴结转移、临床分期无相关性，此与文献报道[9]及其他研究结果不相符，可能与样本含量较少以及手术中淋巴结清扫数目不够[淋巴结清扫数目≥14个者为17例(17/42)，占样本总量的40.5%]影响了淋巴结、临床分期与VEGF、MVD相关性的结果有关，也可能与临床分期比较粗糙有关。HER2过度表达与血管形成及VEGF表达增加有关[10，11]，本组资料结果显示，HER2与VEGF的表达及MVD值之间有相关性，与大多数研究结果一致[12]。VEGF、MVD与ER、PR无相关性，说明ER和PR对肿瘤血管生成无明显影响，激素受体的表达是肿瘤内部基因表达的产物，此结果与国内报道基本相同[14]。易文君等报道了乳腺癌青年组VEGF较绝经组高，本组资料显示，VEGF与年龄相关，与许羽[13]等的结果一致。但本实验样本含量较少，其结论待进一步验证。

　　已有研究表明，VEGF表达和MVD值呈正相关[15]，本研究中42例乳腺癌组织VEGF高表达组MVD值大于VEGF低表达组MVD值，差异有显著性，显示了肿瘤组织中VEGF状态和MVD值的密切关系，说明VEGF可以通过促进乳腺癌血管形成，从而在肿瘤发生、发展和转移过程中发挥重要作用。

　　综上所述， VEGF、MVD可作为反映乳腺癌生物学行为的指标之一。因此，我们认为乳腺癌患者联合检测VEGF和MVD的表达，对于预测预后、筛查高危患者、制定治疗计划具有积极的意义。

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