200例HBeAg阳性血清样本的HBVDNA分析
发表时间：2010-05-25 浏览次数：497次
作者：张韶斌，陈斯亮，罗莞超，高映萍，罗秋红 作者单位：广东省深圳市龙岗中心医院暨深圳市第九人民医院检验科，广东深圳518116
【摘要】目的 了解乙肝血清学标志物HBeAg与HBVDNA水平的临床关系。方法 对200例用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果为HBeAg阳性的乙肝患者的血清用荧光定量PCR(FQPCR)法进行检测，并对结果进行分析。结果 200例HBeAg阳性的血清样本中有195例HBVDNA检测阳性，阳性率为97.5%。200例中有115例(占57.5%)HBVDNA为(1～9)×107 copies/mL，70例(35.0%)为(1～9)×104 copies/mL，10例(5.0%)为500～1 000 copies/mL，5例(2.5%)未检测到。结论 HBeAg与HBVDNA的检测都能反映乙肝病毒在人体内复制活跃程度。
【关键词】 乙肝病毒 HBV DNA ELISA 荧光定量PCR 相关性
HBeAg是HBV核心抗原的成份，其阳性表明病毒复制活跃，传染性强。因此，HBeAg可作为病毒复制的有效指标。本文对先用ELISA方法筛选出的200例HBeAg阳性的血清样本，用荧光定量PCR(FQPCR)法定量检测其HBVDNA含量，探讨其相互间的关系。
1 材料和方法
1.1 标本和来源
2007年7-11月在我院检查HBeAg阳性的门诊和住院患者200例，男女各100例，年龄18～65岁。
1.2 方法
1.2.1 HBeAg定性检测 采用中山生物工程有限公司乙型肝炎病毒e抗原试剂盒，按试剂盒说明书操作。
1.2.2 HBVDNA定量检测 采用深圳匹基公司的乙型肝炎病毒(HBV)FQPCR检测试剂盒，用MJ Research 公司 OPTICON 2 FQPCR扩增仪。HBVDNA>500 copies/mL为阳性。
1.3 统计学处理
采用PEMS 3.0统计软件进行统计分析。采用等级相关分析。
2 结果
200例HBeAg阳性者中有195例HBVDNA阳性，5例阴性，HBVDNA阳性率为97.5%(195/200)。200例中有115例(占57.5%)HBVDNA为(1～9)×107 copies/mL，70例(35.0%)为(1～9)×104 copies/mL，10例(5.0%)为500～1 000 copies/mL ，5例(2.5%)未检测到。HBeAg与HBVDNA呈正相关(r=0.988，P<0.01)。
3 讨论
本组200例HBeAg阳性者血清HBVDNA的阳性率为97.5%，HBeAg与HBVDNA含量密切相关，HBVDNA高复制区(>1×104)占92.5%，低复制区(<1×104)占7.5%,与彭树道等的报道相近[12]。国内外已有研究[34]报道血清HBVDNA载量可预测HBV慢性感染者的肝硬化发病率，是慢性乙肝患者发生肝细胞癌敏感预测指标，肝硬化的发病率以剂量依赖方式随HBVDNA水平的增加而升高。
本组200例HBeAg阳性的血清中HBVDNA的阴性率为2.5%，造成阴性的原因可能为：(1)由于乙型肝炎病毒发生变异[5]，与设计的引物不匹配而检测不出，如患者可能服用拉米夫定进行治疗。拉米夫定为一种双脱氧胞嘧啶核苷类似物，可与HBVDNA聚合酶结合抑制多聚酶活性，同时还可与dCTP掺入HBVDNA链显著抑制HBV的复制而迅速降低血清中HBVDNA的水平，获得一定比率的HBeAg消失及转换，促进血清丙氨转氨酶正常化，并改善组织学活动指数。但长期使用拉米夫定后会使HBVDNA聚合酶P基因区发生突变，而此区的酪氨酸甲硫氨酸天冬氨酸天冬氨酸(YMDD)是所有逆转录酶的高度保守区及HBV进行逆转录的生物活性点。YMDD变异与服药时间长短有关，服药时间越长，变异率越高，虽然YMDD变异与病情轻重无关，但却会影响HBVDNA的检测。(2)可能由于试剂质量或操作误差引起。
本组还有5%的HBVDNA复制数呈低水平状态，造成这种结果的原因可能有：(1)患者使用干扰素等抗病毒药物进行治疗。干扰素是机体免疫细胞产生的一种具有抗病毒﹑抗细胞增殖和免疫调节等生物活性的细胞因子，是当前治疗慢性肝炎的主要药物。其可与细胞膜接触并促进细胞内产生一种特殊的蛋白质抗病毒蛋白，该蛋白可抑制病毒mRNA信息的传递而阻止病毒在细胞内繁殖。干扰素在病毒感染的细胞中还能诱导产生蛋白激酶及2'5' 寡腺苷合成酶(2'5'AS)，2'5'AS可激活一个内源性核酸内切酶降解病毒RNA，同时，蛋白激酶能灭活核糖体合成所必需的酶，共同使蛋白合成减少来抑制病毒的生长。(2)患者可能是经母婴垂直感染的HBV。HBV能经胎盘感染胎儿，经此途径感染HBV的胎儿其HBVDNA含量较低。(3)由于试剂质量或操作误差引起。
临床上多依据HBeAg的检测来判断患者的传染性，但因为HBeAg易受人体免疫功能及变异等因素的影响，如 HBV发生前C区基因突变可阻止前C区序列的表达而妨碍了HBeAg的分泌，导致ELISA法检测为阴性，所以单以HBeAg的检测结果评价HBV在人体的感染情况是不够全面的。而HBVDNA的定量检测也只能测定出与其模板相对的HBVDNA，而检测不出产生变异的HBVDNA。因此，用PCR方法检测HBVDNA也不能完全代替血清标志物检测。临床对HBV感染的判断及行抗病毒治疗时最好综合两种方法所得出的结果，分析其含量才会得到较好的结果。
【参考文献】
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