通脉益智方对痰凝血瘀症模型大鼠血液流变学的影响

　　作者：朱志平　,姜淼　,李磷　,蒋凤荣　,过伟峰　,程雪琴　,江沛 作者单位：(1. 溧阳妇幼保健院,江苏 溧阳 213300; 2. 南京中医药大学，江苏 南京 210046)

　　【摘要】 目的：通过观察通脉益智方对痰凝血瘀症模型大鼠学习记忆能力和血脂、血液黏度和血小板聚集率的影响,探讨其防治血管性痴呆(VD)的作用。方法：采用空白对照组和应用高脂血症大鼠,以脑缺血再灌注的方法建立VD动物模型,随机将VD动物模型分为假手术组、模型组、通脉益智方组。假手术组、模型组灌服蒸馏水,通脉益智方组灌服通脉方15.66 g·kg-1;灌服30 d后观察比较各组的总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、血液黏度和血小板聚集率的水平。结果：空白对照组、假手术组、模型组、通脉组的TG分别为(0.379±0.104)、(0.385±0.161)、(0.485±0.223)、(0.285±0.154) mmol·L-1，TCHO分别为(1.319±0.242)、(4.338±1.574)、(4.942±1.468)、(3.351±1.098) mmol·L-1，血液黏度分别为(23.43±5.08)、(17.05±1.34)、(17.56±2.44)、(16.51±1.811)s-1，血小板聚集率1、5 min分别为(29.73±15.10)%、(40.62±13.46)%、(52.40±21.02)%、(30.00±12.23)%和(40.18±20.72)%、(37.02±25.47)%、(58.26±23.19)%、(29.25±23.98)%。通脉益智方组血清3个指标与模型组相比差异有统计学意义(均P<0.05)。结论：通脉益智方可调整和改善痰凝血瘀症模型大鼠的高脂血症引起的高黏、高聚状态,可调节血脂、改善血液流变性。

　　【关键词】 通脉益智方; 高脂血症; 血液流变性; 痰凝血瘀症; 大鼠

　　Effect of Tongmaiyizhi decoction on bloodlipid changes in model ratswith phlegm stagnation and blood stasis

　　ZHU Zhiping1, JIANG Miao2, LI Lin2, JIANG Fengrong2, GUO Weifeng2,

　　CHENG Xueqin2, JIANG Pei2(1. Liyang Maternal and Child Health Centre Hospital, Liyang 213300, China; 2. Nanjing University of Traditional

　　Chinese Medicine, Nanjing 210046, China)

　　[Abstract] Objective: To explore the influence of Tongmaiyizhi decoction on bloodlipid changes in ischemia reperfusion model rats with hyperlipemia. Methods: Animal models with vascular dementia were prepared by cerebral ischemiareperfusion in hyperlipidemia model rats. We observed the levels of total cholesterol, triglycerides, blood viscosity and platelet aggregation rate between model group and administration group. Results: The levels of serum TG in four groups, i.e., blank control group, shamoperated group, model group and Tongmaiyizhi group, were(0.379±0.104), (0.385±0.161), (0.485±0.223), (0.285±0.154) mmol·L-1, respectively. The levels of serum TCHO were(1.319±0.242), (4.338±1.574), (4.942±1.468), (3.351±1.098) mmol·L-1. Blood viscosity were(23.43±5.08), (17.05±1.34), (17.56±2.44), (16.51±1.811) s-1. Platelet aggregation rate in 1 min were(29.73±15.10)%, (40.62±13.46)%, (52.40±21.02)%, (30.00±12.23)%, and in 5 minute were(40.18±20.72)%, (37.02±25.47)%, (58.26±23.19)%, (29.25±23.98)%. The levels of serum TG, TCHO, blood viscosity and platelet aggregation rate in administration group were obviously lower than those in the model group(all P<0.05).Conclusions: Tongmaiyizhi decoction can adjust and improve blood lipid, hemorrheology, and the status of hyperviscosity and hyperaggregation caused by hypirlipidemia that is in the range of turbid phlegm and blood stasis syndrome.

　　[Key words] Tongmaiyizhi decoction; hyperlipidemia; hemorrheology; phlegm and blood stasis syndrome; rats

　　血管性痴呆(vascular dementia,VD)好发于老年患者,多继发于中风之后,但目前对其仍缺乏有效的预防和治疗手段。有文献报道,血浆脂质水平对VD的发病有重要影响[1-3]。中医在高血压病、脑动脉硬化、中风研究中发现,多种老年血管性疾病的发生均与肝肾下虚、痰瘀痹阻有关。鉴此,我们对高脂血症脑缺血再灌注的痰凝血瘀症的大鼠模型应用益肾化痰祛瘀药通脉益智方,观察其总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、血液黏度和血小板聚集率变化及与学习记忆的相关性,探讨通脉益智方对防治血管性痴呆的作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验试剂与仪器

　　LDZ522离心机,北京医用离心机厂生产;Spectra MAX酶标仪,Molecular Device Co.提供;大鼠跳台记录仪DTT22,张家港市生物仪器厂生产;总胆固醇(TCHO)试剂盒,上海荣盛生物技术有限公司提供,批号为20060819;甘油三酯(TG)试剂盒,上海荣盛生物技术有限公司提供,批号为20060805。

　　1.2 中药及制备

　　主要成分为熟地、制首乌、益智仁、石菖蒲、川断、天麻等中药,由南京中医药大学门诊部提供,经中药教研室鉴定。经水浸泡后,取全方药材煎煮30 min后纱布过滤,所得药液即为头煎药液;将剩余药材加水继续煎煮后纱布过滤,所得药液为二煎药液。将二煎药液浓缩,在浓缩过程中不断加入头煎药液混匀,生药药物的终质量浓度为1.566 g·ml-1。

　　1.3 高脂饲料组成

　　81.3%普通饲料,5%胆固醇,0.5%胆酸钠,0.2%丙基巯氧嘧啶,0.5%白糖,10%猪油。

　　1.4 实验动物分组与模型的制作

　　清洁级SD雄性大鼠40只,240～280 g,由上海斯莱克动物有限公司提供,先以高脂饲料喂养30 d,测定血脂证实已升高后,随机分为假手术组、模型组、通脉益智方组(通脉组)。将以上模型及药物组的大鼠以10%水合氯醛麻醉,3 ml·kg-1腹腔注射,麻醉后仰卧位固定,颈部正中切口,分离双侧颈总动脉并阻断血流30 min再复流后缝合皮肤,术后大鼠仍喂以高脂饲料。其中假手术组只进行颈总动脉分离,不阻断血流,术后也喂以高脂饲料。于造模后第2天开始灌胃给药,灌胃给药容积为10 ml·kg-1,假手术组和模型组用蒸馏水,1次·d-1,共30 d;通脉组用通脉方15.66 g·kg-1,1次·d-1,共30 d。先作行为学指标观察,然后第30天取血,作血液分析。

　　1.5 实验方法

　　1.5.1 血脂测定 于给药30 d后眼眶静脉丛取血,按试剂盒说明书测定TG及TCHO。

　　1.5.2 血液黏度测定 大鼠颈动脉放血,用LGR80电脑血液黏度测试仪测定全血黏度和血浆黏度。

　　1.5.3 血小板聚集率的测定 于给药30 d后颈总取血,3.8%枸橼酸纳1∶9抗凝,以1 000 r·min-1离心10 min,取富血小板血浆(PRP),剩余部分以3 000 r·min-1离心,取贫血小板血浆(PPP),聚集诱导剂用ADP。然后在250 μl已温育3 min血浆中加入10 μg·ml的ADP 10 μl,检测血小板1 min、5 min、最大聚集率,血小板聚集抑制率(%)=(对照组血小板聚集率-给药组血小板聚集率)/对照组血小板聚集率×100。

　　1.5.4 行为学变化 跳台实验：于给药前、给药15 d采用跳台法观察通脉益智方对痰凝血瘀症模型大鼠学习记忆能力的改善作用。具体方法为：将大鼠放入跳台放射箱内的橡皮垫上适应环境3 min,然后立即通以36 V交流电,大鼠受到电击,跳回平台(安全区)以躲避伤害性刺激。从大鼠跳到安全台上开始计时,并记录5 min内每只大鼠受到电击的次数,同时记录第一次从安全台上跳下的时间作为潜伏期,此为学习成绩。于24 h后按同样方法测定电击次数和潜伏期,作为记忆成绩。

　　1.6 统计学处理

　　运用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析及t检验。计量资料以±s表示,各组内比较用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。组间比较应用单因素方分析,各实验组间的两两比较采用q检验,P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 通脉益智方对大鼠血脂和血液黏度的影响

　　给高脂饲料后各组胆固醇均明显升高,从表1可以看出，模型组与正常组比较，TCHO、TG浓度差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,通脉组大鼠血清TG含量降低,同时大鼠血清TCHO含量表现显著性降低。

　　通脉益智方能明显降低1 s-1切变率下的全血黏度,与模型组大鼠的全血黏度相比有明显差异(表1)。表1 通脉益智方对大鼠血脂和血液黏度的影响

　　与模型组相比，a P<0.052.2 通脉益智方对痰凝血瘀症模型大鼠血小板聚集率的影响 模型组与通脉组相比,血小板1 min、5 min、最大聚集率均显著降低(P<0.05)(表2)。表2 通脉益智方对痰凝血瘀症模型大鼠血小板聚集率的影响

　　与模型组相比,a P<0.05, b P<0.012.3 给药15 d后痰凝血瘀症模型大鼠跳台实验的影响 重复测量的方差分析结果显示:(1) 与空白对照组(259.48±86.19)比较,模型组逃避潜伏期(146.76±140.36)明显缩短,P<0.05;(2) 通脉组的逃避潜伏期(258.75±92.81)明显长于模型组，两者逃避潜伏期差异具统计学意义(P<0.05)。

　　3 讨 论

　　流行病学研究发现,高脂血症是阿尔茨海默病和血管性痴呆的危险因素[3]。血液流变学异常也是VD受关注指标之一,血液黏度升高使血流阻力增加,血流减慢,血流量减少,降低脑血流,而血液流速减慢又可导致血黏度成倍增高,易导致血栓形成,对血液循环产生显著影响。临床观察显示,脑缺血梗死的发生与血液黏度升高有密切关系[4]。血小板的聚集率是血液流变学的另一个重要指标。血小板是一种多功能细胞,具有黏附聚集和释放功能,并且具有较强的促凝活性,与缺血性脑血管病有密切的关系。因此降低血小板的聚集率,抑制血小板活化将有助于改善血液的凝聚状态,对脑血管疾病所致血管性痴呆的防治具有积极的作用。

　　通脉益智方是由制首乌、益智仁、石菖蒲、水蛭、天麻等药物组成的纯中药制剂,具有补肾益髓、祛瘀逐痰、醒脑开窍等功效。本实验结果显示与模型组相比,给药组大鼠TG、TCHO、血浆黏度、血小板聚集率显著降低,行为学检测也显示在给药15 d后记忆的潜伏期明显延长,表明血脂、血液流变学改变的同时学习记忆能力也有改善。这与文献[5]报道一致。本课题组在临床上用中药通脉益智方治疗血管性痴呆,结果显示在改善患者智能障碍、减轻症状、提高生活质量等方面取得较为满意的疗效[6]。

　　本实验结果表明,通脉益智方具有调节高脂模型大鼠血脂水平,降低TCHO、血浆黏度的作用,并可抑制血小板聚集。高脂模型大鼠血脂降低可减少血管的损伤,血浆黏度、血小板聚集率的降低,有助于减少血栓形成,改善微循环,维持组织的正常代谢,减少或延缓脑血管系统疾病的发生和发展,对于防治血管性痴呆有积极的意义。该药调节血脂、改善血液流变性的作用可能是其改善学习记忆能力、防治血管性痴呆的作用机制之一。

　　【参考文献】

　　[1] CASSERLY I, TOPOL E. Convergence of atherosclerosis and Alzheimes disease: inflammation, cholesterol and misfolded proteins[J]. Lancet, 2004,363:11391146.

　　[2] ELKINS J S, OM EARA E S, LONGSTRETH W T Jr, et al. Stroke risk factors and loss of high cognitive function[J]. Neurology, 2004,63:793799.

　　[3] 吴琪,方莹莹,高玲.阿尔茨海默病和血管性痴呆的血脂分析[J].中国神经精神疾病杂志,2005,31(5)：389.

　　[4] 王颖,赵德山,何邦平.脑中风高危人群血液流变学的改变[J].中华内科杂志,1995,34(4):252.

　　[5] 李长生,李军,关新华,等.首乌益智胶囊治疗血管性痴呆80例临床研究[J].中国老年学杂志,2008,28(4):369371.

　　[6] 过伟峰,尚文斌,王龚春.通脉益智胶囊对血管性痴呆患者血脂血黏度的影响[J].辽宁中医杂志,2007,34(3):262263.