C反应蛋白及其多态性与冠心病

    作者：韩轩茂（HAN Xuanmao），徐 宁（,XU Ning）综述，贺其图（He Qitu）审校    作者单位：包头医学院 第一附属医院 血液科，包头 014010     【关键词】  冠心病； C反应蛋白； 多态性

    冠心病（coronary heart disease，CHD）是人类发病率和死亡率最高的疾病之一。研究显示，炎症反应与CHD的发生、发展密切相关，而C反应蛋白（Creactive protein，CRP ) 是系统性炎症的一个标志物，现仅就其多态性与冠心病的相关性予以综述。

    1  CRP的特性

    CRP 于1930年被发现，是一种能与肺炎球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白。CRP 检测在上世纪80年代以前作为炎症和组织损伤的非特异性标志物大量应用于临床。

    在兔模型通过 Northern blot 和 RTPCR，对CRP  mRNA进行检测发现，CRP  mRNA 只能在肝脏中检测到，而血细胞或巨噬细胞中都没有。人体组织中，这个结果也得到确认，血清 CRP 由肝脏合成。白细胞介素1b、6 以及肿瘤坏死因子为 CRP 合成的最重要的调节因子［13］。CRP 分子质量105 500 u，由5个相同的未糖基化的多肽亚单位组成，每个亚单位含有187个氨基酸，这些亚单位通过非共价键连结成环状的五聚体，并有一个链间二硫键。CRP 不耐热，66℃、30 min 即可被破坏。

    CRP与磷酸胆碱及半乳糖残基结合，可激活补体的经典途径并充当调理素的作用。CRP还有调节炎症过程和防御感染性疾病的作用。正常健康人血清CRP值较低，一般＜0.8 g/L，90%的正常人＜0.3 g/L，99%的正常人CRP＜1.0 g/L［4］。而在炎症或急性组织损伤后，CRP 的合成则在 4～6 h 内迅速增加，36～50 h 达高峰，峰值可为正常值的100～1 000倍，半衰期较短，约4～6 h［1］。经合理治疗后，3～7 d 降至正常。CRP 的水平与组织损伤后修复程度密切相关。

    2  CRP 与 CHD

    CRP 是炎症和组织损伤的标志物，也是心血管疾病的标志物。而且，CRP不仅是一个危险性指标，还是心血管病发生中起作用的一个因素。动脉粥样硬化演化过程中 CRP 的生物学效应包括免疫和炎症多方面的复杂相互作用，如补体系统，它同样也是斑块发展和演变的病变部位细胞产生的 CRP 的直接效应。 Sun等［3］在兔动脉硬化模型上检测了CRP 的作用。选择兔模型的原因是，它们能很快对高血脂有反应，形成动脉硬化斑块，且兔 CRP 与人 CRP 有70%的同源性。经研究发现，血液中 CRP 水平与斑块大小具有相关性。CRP 能够在斑块形成的不同时期发现，而且 CRP 与巨噬细胞无关。在人体内也有相同发现。这些资料表明，肝脏生产 CRP 与动脉硬化损害是有相关性的。而 CRP 本身不只是一个指标，其本身就直接参与血管内皮细胞的数种附着蛋白质的基因表现过程。CRP 会影响到这些血管内皮细胞的特性，更明确地说，它会直接引起动脉硬化。据研究，CRP 会增加 vascular cell adhesion molecule (VCAM1)， intercellular adhesion molecule (ICAM1)，和 Eselectin 等3种不同蛋白质血管内皮细胞分子的基因表达。人类 CRP 增高可使患心脏病的实验模型组织受到严重损伤。这些疾病的一个重要特征就是 CRP 与受损细胞结合，引起其补体介导的炎症，这些炎症会引起组织的缺血坏死加剧。部分研究显示，内皮细胞也能够制造CRP， CRP 能够进入人类动脉内皮细胞。Devaraj等［5］的研究进一步发现了CRP影响内皮细胞的机制：CRP能与Fcγ受体的免疫球蛋白加工受体家族结合。即 CRP 能够与 Fcγ 受体家族的 CD 64 和 CD 32 结合，并通过用特定的抗体来抑制这些受体能够逆转CRP对内皮细胞的有害作用。CRP 激活／调节补体的能力可能是联系 CRP 与动脉粥样硬化炎症的重要特性。最近的发现表明，除了经典的五聚体 CRP  外，另一种 CRP 异构体即 CRP  亚基（mCRP）在动脉粥样硬化过程中可能也发挥着重要作用。mCRP与纯化的 C1q 具有很强的亲和力，此结合主要由 C1q 的胶原样区域介导。游离状态的 mCRP 可以通过阻止 C1q与其他补体激活物的结合来抑制补体链的激活。而如果与经过氧化或酶解修饰的氧化低密度脂蛋白结合，则 mCRP 可以激活经典的补体途径。值得注意的是，在这种条件下只会产生很低水平的 sC5b9［6］。

    许多前瞻性研究发现，在健康个体，CRP 水平与其后来发生的冠状动脉事件有很强的相关性[79] 。可以说，CRP测定是冠心病危险性评估的一个有用的辅助指标，CRP可能参与了动脉粥样硬化[10]。但是，CRP浓度与年龄、性别、吸烟、血压、肥胖、糖尿病、生理活性、出生时低体重、激素替代治疗和炎症反应的其他产物有关；心血管病患者 CRP 水平也升高[1114]。尽管如此，仍然有许多研究证实，个体血浆 CRP  浓度具有遗传特性。估计遗传率对CRP 水平影响范围在 27% 40% 之间，也即 DNA 序列的变化可影响血浆 CRP 水平[15,16]。

    3  CRP 基因多态性与血浆 CRP 水平及 CHD  相关性

    已明确编码 CRP 基因总长度为 6.8 kb，包括所有外显子、内含子、1.7 kb上游区和 2.8 kb下游区。现发现 CRP 基因的30多个位点单核苷酸多态性（singlenucleotide polymorphisms，SNPs），如rs3093058、rs3091244、rs1417938、rs3093066、rs1205、rs2808630、Leu184Leu （rs1800947）、Pro133Lys（rs34200896）和Gly166Glu （rs34340208）等。这些多态性中，无论是正常人群还是血栓性疾病患者，部分SNPs或其单倍型都与血浆 CRP 水平有相关性。这种相关性已在一些大样本的研究中得到证实，而 CRP 基因  SNPs与 CHD 的关系尚未完全明了[1720]。Casas等[18]通过对有 6 201 例欧洲男性参加的6个研究行meta分析发现， CRP/+1444C>T (rs1130864) 多态性与血浆CRP有相关性，但不增加非致命性心肌梗死的危险性。Kathiresan等[19]对3 301例个体CRP基因13个SNPs位点（rs3116653、rs3116654、rs2794517、rs3122012、rs3091244、rs1417938、rs1800947、rs1130864、rs1205、rs2808630、rs3093077、rs12029262和rs876538）检测，发现其中的9个 SNPs（rs3116653、rs3116654、rs3122012、rs3091244、rs1417938、rs1130864、rs1205、rs3093077和rs12029262）与血浆CRP浓度相关；而 SNP rs3091244 （C→T→A）与血浆CRP浓度关系更密切，且 SNP rs3091244与另外2个 SNPs （rs1205和rs2808630）组成的单倍型有很高相关性。SNPs rs1205和rs2808630与血浆CRP浓度也相关。Crawford等[20]在 7 159 例不同种族组成的正常人群中，对CRP基因6个SNPs（rs3093058、rs3091244、rs1417938、rs1800947、rs3093066、rs2808630）与血浆  CRP水平的关系进行了分析，其中，在非西班牙裔黑种人，SNPrs3093058 和 SNPrs3091244（2者存在紧密连锁不平衡）与血CRP 水平升高有相关性；在非西班牙裔黑种人及墨西哥美洲人 SNP rs3091244 （C→T→A）与血CRP水平升高有相关性；非西班牙裔黑种人 SNPrs1205、SNP rs2808630，墨西哥美洲人 SNP rs1205与血浆 CRP 水平升高有相关性；非西班牙裔黑种人3个 SNPs（ATTGCGA、TTAGCGA，和AAAGAGA）组成的单倍型与血浆 CRP  水平升高有相关性；墨西哥美洲人2个单倍型（ATTGCGA 和 AAAGCGA) 与血浆 CRP 水平增加有相关性；非西班牙裔白种人1 个单倍型(AAAGCGA) 与血浆 CRP 水平增加有相关性，SNP rs3091244 中AA单倍型在可能与冠心病相关。国内方发面的相关研究较少，多数研究样本量不大，且SNPs位点较单一，尚未见大样本、多位点的相关报道。

    4  展    望

    由于种族、民族和地域的差异，在不同种族正常人群中，血浆 CRP 水平可能不尽相同，CRP 基因  SNPs分布也存在差异，目前这方面的大样本研究尚少，有待进一步加强流行病学调查，以丰富人类基因库，为研究 CRP 基因 SNPs 相关的疾病提供基础资料。而在血浆 CRP 水平及其基因 SNPs 与疾病的研究中，还要严格选择病例，排除混杂因素，尤其是引起血浆CRP水平升高的亚临床疾病；通过多中心、大样本的临床研究，筛选与疾病相关的  CRP基因 SNPs  及其单倍型；对 CRP 基因 SNPs 研究也应该多个位点同时检测，才能对 CRP 基因SNPs 与疾病的相关性有更全面的了解，筛选出疾病的易感 SNPs。目前，关于血浆 CRP 水平及其基因 SNPs 与疾病种类的研究，大多集中于冠心病，而与高血压、周围动脉血栓性疾病、缺血性脑卒中和静脉血栓栓塞的相关研究较少，相信随着研究的深入，这些研究会得到加强。也许会出现随机控制的临床研究，选择性地降低 CRP 浓度，为研究  CRP水平和疾病的相关性提供无偏倚的结果；同时通过 CRP 基因 SNPs 与疾病研究，提供某种位点靶向治疗的药物。

【参考文献】［1］STEEL DM,WHITEHEAD AS.The major acute phase reactants:Creative protain,serum amyloid P component and serum amyloid A protein[J]. Immunol Today,1994,15:8188.

［2］BUCK C,BUNDSCHU J,GALLATI H,et al.Interleukin6:a sensitive parameter for the early diagnosis of neonatal bacterial infection[J]. Pediatrics, 1994,93:5458.

［3］SUN H, KOIKE T, ICHIKAWA T, et al. Creactive protein in atherosclerotic lesions: its origin and pathophysiological significance[J]. Am J Pathol, 2005,167:11391148.

［4］TEJANI NR,CHONMAITREE T,RASSIN DK,et al.Use of Creactive protein in differentiation between acute bacterial and viral otitis media[J]. Pediatrics,1995,95:664669.

［5］DEVARAJ S, DU CLOS TW, JIALAL I.Binding and internalization of Creactive protein by Fcgamma receptors on human aortic endothelial cells mediates biological effects[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2005,25:13591363.

［6］JI SR, WU Y, POTEMPA LA, LIANG YH,et al. Effect of modified Creactive protein on complement activation: a possible complement regulatory role of modified or monomeric Creactive protein in atherosclerotic lesions[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2006,26:935941.

［7］RIDKER PM, CUSHMAN M, STAMPFER MJ, et al.Inflammation, aspirin, and the risk of cardiovascular disease in apparently healthy men[J]. N Engl J Med,1997，336:973979.

［8］RIDKER PM, HENNEKENS CH, BURING JE, et al. Creactive protein and other markers of inflammation in the prediction of cardiovascular disease in women[J]. N Engl J Med,2000,342: 836843.

［9］KULLER LH, TRACY RP, SHATEN J, et al. Relation of Creactive protein and coronary heart disease in the MRFIT nested casecontrol study. Multiple Risk Factor Intervention Trial[J]. Am J Epidemiol, 1996,144:537547.

［10］ PEARSON TA, MENSAH GA, ALEXANDER RW, et al. Markers of inflammation and cardiovascular disease: application to clinical and public health practice: A statement for healthcare professionals from the Centers for Disease Control and Prevention and the American Heart Association[J]. Circulation ,2003,107:499511.

［11］ PEPYS MB, HIRSCHFIELD GM. Creactive protein: a critical update[J]. J Clin Invest, 2003,111:18051812.

［12］ DANESH J, WHINCUP P, WALKER M, et al. Low grade inflammation and coronary heart disease: prospective study and updated metaanalyses[J]. BMJ, 2000,321:199204.

［13］ FREEMAN DJ, NORRIE J, CASLAKE MJ, et al. West of Scotland Coronary Prevention Study. Creactive protein is an independent predictor of risk for the development of diabetes mellitus in the West of Scotland Coronary Prevention Study[J]. Diabetes, 2002,51:15961600.

［14］ SATTAR N, MCCONNACHIE A, O’REILLY D, et al. Inverse association between birthweight and Creactive protein concentrations in the MIDSPAN family study[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol,2004,24:583587.

［15］ PANKOW JS, FOLSOM AR, CUSHMAN M,et al. Familial and genetic determinants of systemic markers of inflammation: the NHLBI family heart study[J]. Atherosclerosis, 2001,154:681689.

［16］ DUPUIS J, LARSON MG, VASAN RS, et al. Genome scan of systemic biomarkers of vascular inflammation in the Framingham Heart Study: evidence for susceptibility loci on 1q[J]. Atherosclerosis, 2005,182: 307314.

［17］ CRAWFORD DC, YI Q, SMITH JD, et al. Allelic spectrum of natural variation in CRP[J].Hum Genet,2006,119:496504.

［18］ CASAS JP,SHAH T, COOPER J,et al.Insight into the nature of the CRPcoronary event association using Mendelian randomization[J].Int J Epidemiol, 2006,35:922931.

［19］ KATHIRESAN S, LARSON MG, VASAN RS, et al.Contribution of clinical correlates and 13 Creactive protein gene polymorphisms to interindividual variability in Serum CReactive Protein Level[J].Circulation,2006,113:14151423.

［20］ CRAWFORD DC, SANDERS CL, QIN X, et al. Genetic variation is associated with Creactive protein levels in the Third National Health and Nutrition Examination Survey[J]. Circulation ,2006,114:24582465.