急性髓细胞白血病中p27kip1的表达及临床意义

　　作者：王明永,王凡平　　作者单位：新乡医学院 医学检验系,河南 新乡 453003; 贵阳医学院第一附属医院 血液科，贵州 贵阳 550004

　　【摘要】目的 探讨急性髓细胞白血病中p27kip1的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化SP法检测37例急性髓细胞白血病及10例正常对照者骨髓中p27kip1蛋白的表达情况，并结合临床病历资料进行分析。结果 p27kip1蛋白在急性髓细胞白血病的阳性表达率为29.7%，正常对照组表达率为70.0%，二者比较差异有显著性(P<0.05);在34例接受化疗的急性髓细胞白血病中，p27kip1阳性表达组化疗后的缓解率(81.8%)高于p27kip1 表达阴性组的缓解率(43.5%)，差异有显著性(P<0.05)。结论 p27kip1在急性髓细胞白血病患者中存在异常表达，且其蛋白的表达水平可能会影响化疗疗效。

　　【关键词】 p27kip1,急性髓细胞白血病,细胞周期

　　急性髓细胞白血病是由于髓系细胞恶性增殖引起的一种恶性疾病，在各类白血病中急性髓细胞白血病发病率最高，在我国发病率为1.62/十万。目前研究认为细胞周期失控是该病的发生原因之一。细胞周期的调控受到一系列调控因子的影响,这些调控因子根据其作用的不同分为正性调控因子和负性调控因子。其中正性调控因子包括细胞周期素(cyclin)和细胞周期素依赖性激酶(cyclindependent kinase,CDK)，负性调控因子由细胞周期素依赖型激酶抑制物(CDKInhibitor,CDKI)组成。作为负性调控因子之一的p27kip1属于CDKI中CIP/KIP家族中的成员，近来被认为是候选的抑癌基因。本文通过免疫组化SP法检测p27kip1蛋白在37例急性髓细胞白血病中的表达情况，并结合临床资料探讨其与急性髓细胞白血病的关系及其对化疗疗效的影响。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 2004年3月～2006年2月为贵阳医学院附属医院确诊为急性髓细胞白血病(leukemia)患者37例(包括初发和复发)，其中男性23例，女性14例，男∶女为1.6∶1，年龄17～78岁，中位年龄47岁，其中M2 18例、M3 4例 、M4 6例、M5 7例、M7 2例。10例健康体检者作为对照。

　　1.2 试剂 抗p27kip1单抗(即用型)、SP免疫组化试剂盒、DAB显色剂、苏木素、PBS缓冲液、APES液(均购自福州迈新公司)、丙酮、无水乙醇。

　　1.3 实验方法 抽取骨髓液0.2～0.3 mL，直接涂于防脱胶处理的玻片上，自然干燥后，冷丙酮固定10 min，-20 ℃保存被检。操作严格按照试剂盒说明进行，阳性对照片由迈新公司提供。

　　1.4 结果判定标准 阳性细胞标准：阳性细胞主要表现为细胞核中出现棕黄色颗粒，同时有部分胞质着色的细胞，PBS代替一抗作空白对照，用已知阳性对照片作阳性对照;计数方法：在高倍镜视野下计数100个单个核细胞，按显色细胞占观察细胞的百分率，当阳性细胞数大于10%者判定为阳性，小于10%者判定为阴性。

　　1.5 统计学处理 用Spss12.0统计软件包，计数资料采用χ2检验,P<0.05为差异有显著性。

　　2 结果

　　2.1 p27kip1的表达 在37例急性髓细胞白血病患者中，有11例出现阳性表达，阳性率为29.7%;对照组中p27kip1的阳性表达率为70.0%，p27kip1在急性髓细胞白血病中阳性表达率明显低于正常对照组,差异有显著性(P<0.05)。

　　2.2 临床分析 在37例急性髓细胞白血病患者中，3例确诊后放弃治疗。在34例接受化疗的急性髓细胞白血病中，M2、M4、M5、M7用TA方案(吡柔比星20 mg/m2/d,第1～3天;阿糖胞苷150 mg/m2/d,第1～7天)，2个疗程未达到完全缓解者使用HA方案(高三尖杉酯碱3 mg/m2/d,第1～5天;阿糖胞苷150 mg/m2/d,第1～7天)，M3采用口服维甲酸。接受化疗的患者中有19例完全缓解，其中11例p27kip1阳性表达患者中有9例缓解，化疗缓解率达到81.8%，明显高于p27kip1表达阴性组的化疗缓解率(43.5%)，差异有显著性(P<0.05)。

　　3 讨论

　　急性白血病是一种造血干细胞的恶性克隆性疾病，根据受累细胞系列将其分为急性髓细胞白血病和急性淋巴细胞白血病。急性髓细胞白血病是由于原始、幼稚非淋巴细胞细胞无限增殖，抑制正常骨髓造血系统所致。成人急性髓细胞白血病的发病率是急性淋巴细胞白血病的3倍，因此急性髓细胞白血病的研究和治疗显得至关重要。目前研究认为白血病细胞的无限增殖与原癌基因的激活和抑癌基因的失活有关。正性调控蛋白的过度表达与负性调节蛋白发生灭活性突变，可通过细胞内增殖信号的传递途径、细胞寿命和细胞周期影响细胞的增殖。

　　p27kip1作为一种负性调节蛋白在调控细胞周期及细胞增殖过程中起着重要的作用，目前证实在许多实体瘤中存在p27kip1蛋白的缺失、突变和低表达[1,2]。Hayette[3]研究认为在急性髓细胞白血病中存在p27kip1的杂合缺失，在急性淋巴细胞白血病中无p27kip1基因的改变。Wegiel B[4]等研究认为p27kip1与血管内皮生长因子一起对急性髓细胞白血病的发生起着作用。本研究发现,p27kip1在急性髓细胞白血病组中存在低表达，其阳性表达率(29.7%)明显低于正常对照组(70.0%),差异具有显著性，且p27kip1与化疗药物敏感性、急性白血病化疗缓解率有关。在接受化疗的34例患者中，p27kip1表达阳性的患者化疗缓解率明显高于p27kip1阴性表达的患者,差异有显著性。这与Yokozawa [5]研究一致， p27kip1与急性髓系白血病的发生、发展及预后有关，p27kip1表达高者患者生存时间长，p27kip1低表达的生存时间短。

　　p27kip1作为一种候选的抑癌基因，它可能参与了急性髓系白血病的发生发展，但是目前对它的研究还处于初步阶段，且对急性髓细胞白血病的研究较少。急性髓细胞白血病的发病机制复杂，弄清p27kip1在急性髓细胞白血病发病中的作用机制，需要进行大样本的研究。

　　【参考文献】

　　[1] 孙志强, 李卓江, 景本年,等. 非霍奇金淋巴瘤p27kip1、p57kip2及细胞周期蛋白D1的表达及其临床意义[J]. 中华血液学杂志, 2002, 12(23): 652-653.

　　[2] AYRAULT O, ZINDY F, REHG J, et.al. Two tumor suppressors, p27Kip1 and patched1, collaborate to prevent medulloblastoma[J]. Mol Cancer Res，2009, 7(1):33-40.

　　[3] HAYETTE S, THOMAS X, BERTRAND Y, et al. Molaular analysis of cyclindependent kinase inhibitors in human leukemia[J]. Leukemia,1997,11(10)：1969-1999.

　　[4] WEGIEL B, EKBERG J, TALASILA K M, et.al. The role of VEGF and a functional link between VEGF and p27Kip1 in acute myeloid leukemia[J]. Leukemia， 2009, 23(2):251-261.

　　[5] YOKOZAWA T, YOWATARI M, LIDA H, et.al. Prognostic significance of the cell cycle inhibitor p27kip1 in acute myeloid leukemia[J]. Leukemia,2000,14(1):18-33.