急性髓系白血病T淋巴细胞亚群及NK细胞的变化及其临床意义

　　作者：徐茂忠，徐 昕，戴秋新，赵 钰，孟文俊 作者单位：东南大学医学院附属江阴医院血液科， 江阴 214400

　　【摘要】 目的：探讨检测外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性对AML患者的病情监测、疗效评价及预后判断的价值。方法：37例AML患者分别采用DA、HA、MA等方案全身化疗，28天为一疗程，在治疗前、化疗结束后2周及下一疗程前采血行T淋巴细胞亚群及NK细胞检测。结果：AML患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及CD16+56+明显低于正常对照组(P<0.05)，化疗2周后CD3+、CD8+、CD4+、CD4+/CD8+及CD16+56+活性均低于化疗前(P<0.05)，且高危组变化更显著，治疗有效组升高较无效组明显(P<0.05)。结论：检测外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性有助于AML患者的病情监测、疗效评价及预后判断。

　　【关键词】 急性髓系白血病;淋巴细胞亚群;自然杀伤细胞;流式细胞术

　　恶性肿瘤(包括急性髓系白血病AML)的发生、发展及转归与机体的免疫功能密切相关。我们于2006年1月~2007年4月采用流式细胞术检测37例AML患者在治疗前、后外周血T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞的变化，观察细胞免疫功能变化的临床意义。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 在我科治疗的急性髓系白血病患者37例，其中男16例，女21例;年龄15～78岁，中位年龄45岁;其中M2a 17例，M1 11例，M4E0 1例，M4 3例，M5 5例。40例在我院健康体检者作为正常对照组，其中男23例，女27例;年龄21~56岁，中位年龄42岁。其中AML患者在化疗前、化疗2周后及下一疗程前抽取外周血做T淋巴细胞亚群及NK细胞检查。

　　1.2 治疗方法 37例AML患者分别采用DA、HA、MA等方案全身化疗，28天为一疗程，所有患者在治疗前、化疗结束后2周及下一疗程前采血行T淋巴细胞亚群及NK细胞检测。

　　1.3 检测方法及指标 均空腹抽晨血后采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)及NK细胞活性(CD16+56+)，流式细胞仪型号为FACSCalibur，由美国Becton Dickinson公司生产，试剂盒由同一公司提供。

　　1.4 疗效标准 按血液病诊断及疗效标准[1]。

　　1.5 统计学方法 应用SPSS/pc+统计软件包进行处理，组间差异的显著性用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 不同时期T淋巴细胞亚群及NK细胞活性比较 见表1。AML患者治疗前CD8+下降，但差异无统计学意义(P>0.05)。AML患者化疗2周后均出现骨髓抑制，其外周血白细胞最低点均值为0.4×109/L，此时CD3+、CD8+、CD4+、CD4+/CD8+及CD16+56+(NK细胞)活性均低于化疗前，尤其CD4+降低明显。

　　2.2 病情与T淋巴细胞亚群及NK细胞活性关系 见表2。我们将37例AML患者根据临床资料分成高危组(如有MDS病史，高龄，高白血病细胞负荷，有脾肿大及LDH明显升高等)及无高危因素组进行分析，高危组CD8+变化不明显(P>0.05)。对11例完全缓解急性白血病患者CR后的持续时间(x，单位：月)与CD4+/CD8+细胞比例(y)进行相关分析，发现两者呈显著正相关(r=0.815，回归方程：y=1.28+0.019x，P<0.05)。

　　2.4 疗效与T淋巴细胞亚群及NK细胞活性关系 见表3。本组患者治疗后完全缓解(CR)11例，部分缓解(PR)12例，进步3例，未缓解(NR)6例，稳定(NC)2例，进展(PD)1例，无效2例。

　　3 讨 论

　　机体免疫功能降低是导致恶性肿瘤发生的主要因素。抗肿瘤免疫主要是细胞免疫，T淋巴细胞在肿瘤免疫中起中心调控作用[2]。T淋巴细胞亚群是一群具有特殊标志的人胸腺中输出细胞，执行细胞免疫功能及免疫调节功能，它通过功能各异的淋巴细胞亚群来完成免疫监视机能，其中CD3+细胞代表淋巴细胞总数，CD4+细胞为免疫应答中的主要反应细胞，具有增强和扩大其他免疫细胞的功能，CD8+细胞可对靶细胞产生细胞介导的细胞毒作用，同时对CD4+细胞具有调节性免疫抑制作用，CD4+/CD8+的稳定比例维持着细胞免疫反应的平衡[3]，只有在CD4+/CD8+正常时才能发挥抗肿瘤作用。NK细胞是机体防御肿瘤的天然屏障，它能直接或分泌细胞毒因子而杀伤肿瘤细胞，其活性降低是肿瘤发展和发生远处转移的重要原因[4]。白血病患者常伴有T淋巴细胞亚群的数量改变和功能损伤[5]。

　　本研究应用流式细胞术检测发现，急性白血病患者治疗前外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及CD16+56+(NK细胞)活性均明显低于健康对照组(P<0.05)，CD8+虽也呈下降趋势(P>0.05)，但改变不如CD4+明显，导致CD4+/CD8+比值也明显下降(P<0.05)，且存在高危因素者这种差异更显著，说明机体确实存在免疫功能调节紊乱现象，有人认为[6]CD8+细胞的相对增加而导致免疫抑制状态可能在白血病发病中有重要意义。

　　化疗2周后CD3+、CD8+、CD4+、CD4+/CD8+及CD16+56+(NK细胞)活性均明显低于化疗前，说明化疗对患者细胞免疫功能有明显的抑制作用。主要是化疗对增殖快的多能造血干细胞形成抑制，使T、B细胞明显减少，特别是CD4+ T细胞对化疗药物尤其敏感[7]。治疗后有效组与无效组比较，CD3+、CD4+、CD3+/CD4+及CD16+56+明显升高，表明有效的化疗在杀伤白血病细胞及免疫功能细胞后随着瘤细胞负荷及免疫抑制因子的减少而使机体的细胞免疫功能逐步得到改善[8]。我们也观察了本组11例CR患者机体的细胞免疫应答能力在持续CR期间逐步恢复正常，其CR后持续时间与CD4+/CD8+细胞比例呈显著正相关，这也表明机体免疫功能的抑制和破坏与急性白血病的发生及进展有关。

　　AML患者存在细胞免疫功能混乱，主要表现在T淋巴细胞亚群及NK细胞活性的降低，检测外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞活性有助于AML患者的病情监测、疗效评价及预后判断，但该组患者病例数量较少，观察时间不长，有待临床进一步观察研究。

　　【参考文献】

　　[1] 张之南. 血液病诊断与疗效标准[M]. 第3版.北京:科学出版社,2007:168-376.

　　[2] 曹广文,杜 平. 现代癌症生物学[M]. 第2版.北京:人民军医出版社,1999:20.

　　[3] 陆慰蜂. 医学免疫学[M]. 北京:人民卫生出版社,2002:94-96.

　　[4] Yano S, Nishioka Y,Lzumi K,et al.Novel metastasis model of human lung cancer in SCID mice depleted of NK cells[J]. In J Cancer,1996,67(2):211-217.

　　[5] Milosevic DB.The different level of immunological recovery after chemotherapy in leukemia and lymphoma patients[J]. J Exp Clin Cancer Res,2002,20(4):517-522.

　　[6] 姜 铭,娄海玲,李炳臣,等. 粒细胞白血病患者外周血T细胞亚群系统分布的研究[J]. 白血病,1996,5(3):166-167.

　　[7] Bruserud O,Ulvestad E,Berentsen S,et al.T-lymphocyte functions in actue leukemia patients with severe chemotherapyinduced cytopenid:characterization of clonog-enicT cell proliferation[J]. Scand J Immunol,1998,47(1):54-62.

　　[8] Jahn B,Bergmann L,Weidmann E,et al.Bone marrowderived T-cell clones obtained from untreated acute myelocytic leukemia exhibit blast directed autologous cytotoxicity[J].Leuk Res,1995,19(2):73-82.