血小板无力症患者其血小板GPⅡb／Ⅲa受体检测及其机制的探讨
发表时间：2010-08-13 浏览次数：484次
作者：方希敏，李原，钱江潮，周海霞，王菊香 作者单位：温州医学院附属育英儿童医院 血液科，浙江 温州 325027
【关键词】 血小板无力症;血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa;血小板聚集
血小板无力症(Glanzmann's thrombasthenia,GT)是一种常染色体隐性遗传性出血性疾病。本病的特点是血小板对多种生理性诱聚剂反应低下或缺如， 由血小板膜糖蛋白Ⅱb(GPⅡb)或Ⅲa(GPⅢa)质或量的缺陷引起，属少见病种，患者常终生存在出血倾向。实验室检查常表现为出血时间延长、血块收缩不良、血小板聚集试验异常及血小板膜糖蛋白Ⅱb(GPⅡb)/Ⅲa(GPⅢa)减少或质的异常。现将我科收治的1例GT患者及10例非出血性疾病患者进行分析，并探讨其可能机制。
1 材料和方法
1.1 标本来源及主要试剂 GT患儿，女，3岁，自幼有反复皮肤瘀点、瘀斑及鼻衄史，父母非近亲结婚。10名非GT患者(均为小儿血液科住院患者)中男6例，女4例，年龄为6个月～8岁，平均(44.1±19.5)个月 (其中传染性单核细胞增多症2例、粒细胞减少症4例、急性上呼吸道感染2例、缺铁性贫血2例)。鼠抗人CD41、CD61、CD42b均购自NeoMarkers公司。
1.2 方法
1.2.1 血小板膜GPⅡb/Ⅲa(CD41/CD61)的检测：参照文献[1]步骤，流式细胞仪检测10 000个血小板中CD61阳性血小板上CD41阳性率。
1.2.2 血小板聚集试验：参照文献[2]及试剂盒使用说明，计算出聚集率(%)与时间的关系曲线。
1.2.3 血小板黏附试验：精确吸取1.5 ml血液加入球形玻璃瓶中，采用球形玻璃瓶旋转法，旋转15 min，用血细胞分析仪测量黏附前后的血小板数，通过公式计算出血小板黏附率。
1.2.4 血块收缩试验：空腹取静脉血1 ml、置于6 mm×80 mm的试管中，在37 ℃水浴箱内静置孵育，于凝固后1 h、24 h分别观察其血块收缩情况。
1.3 统计学处理方法 处理组<对照组均数 -t0.05，9个标准差，即<(-t0.05，9 s)有统计学意义。
2 结果
2.1 血小板膜GPⅡb/Ⅲa的检测 流式细胞仪检测结果示，患者CD41a表达为0%，CD42b表达为88.37%，CD61表达为12.6%，而正常人的CD41a表达为(92.5±4.7)%，CD61表达为(91.7±5.4)%，患者CD41、CD61即(GPⅡb/Ⅲa)表达明显低于正常(见图1、图2)。
2.2 血小板聚集试验(ADP作为诱聚剂)、血小板黏附试验、血块收缩试验见表1。
3 讨论
GT是由瑞士儿科医生Glanzmann于1918年首先报道，该病在特定的人群中发病率较高，往往与近亲结婚有关，其主要是因为血小板膜糖蛋白Ⅱb(GPⅡb，CD41)/Ⅲa(GPⅢa，CD61)减少或质的异常[3]导致血小板聚集功能障碍和血块收缩不良。本病共分3型[4]，Ⅰ型GT为血小板表面GPⅡb/Ⅲa小于正常的5%，活化的血小板不能结合纤维蛋白原，血小板α颗粒纤维蛋白原明显减少，血块缺乏回缩反应;Ⅱ型GT血小板表面GPⅡb/Ⅲa为正常的10～20%，活化的血小板可少量结合纤维蛋白原，血块回缩异常;Ⅲ型GT血小板表面GPⅡb/Ⅲa为正常的50～100%，但活化的血小板不能结合或仅少量结合纤维蛋白原，血块回缩从缺乏到正常。
我们通过流式细胞仪检测CD41、CD61，发现患者CD41a无表达，而CD61仅表达12.6%，均明显低于正常值，说明患者血小板膜糖蛋白Ⅱb、Ⅲa均明显减少，应该为Ⅰ型GT;同时我们通过ADP诱导血小板聚集、发现患者血小板聚集率明显低于对照组，而血小板黏附率仅为10%，均明显低于对照组的(59.7±5.4)%，并出现血块收缩不良，这表明GT患者能影响ADP诱导血小板聚集、血小板黏附及血块收缩。
GPⅡb、Ⅲa只在巨细胞和血小板上表达，定位于17号染色体上q21～23片段内，其作为黏附蛋白受体的整联蛋白超家族成员，与体外连接蛋白受体(VnR)共同构成细胞黏附蛋白亚家族，是血小板表面最主要的抗原及功能蛋白。目前发现在GT数据库中GPⅡb基因包含30个外显子，编码一个1039残基蛋白，有62种基因突变类型，GPⅢa包含15个外显子，编码一个778个氨基酸残基蛋白，有41种基因突变类型[5]。当然，随着研究的不断深入，可能会发现更多的基因突变类型，突变类型包括缺失/插入、剪接位点突变、无义突变、错义突变、移码突变等，当这些突变发生就可以导致GPⅡb、Ⅲa表达减少或者功能异常，从而出现血小板无力症。本例患者可能由于上述基因一种或几种突变，导致CD41、CD61表达明显减少，从而出现上述临床症状及检查结果。
【参考文献】
[1] 韩悦,王兆铖,王爱青,等.流式细胞术在检测血小板无力症中的意义[J].中国实验血液学杂志,1997,7(3):238-240.
[2] 江虹,杨菁.血小板聚集试验及其临床应用[J].中国实验诊断学,2001,5(5):241-243.
[3] George JN, Caen JP, Nurden AT. Glanzmann's thrombasthenia: the spectrum of clinical disease[J]. Blood,1990,75(7):1383-1395.
[4] Boudreaux MK, Lipscomb DL. Clinical, biochemical, and molecular aspects of Glanzmann's thrombasthenia in humans and dogs[J].Vet Pathol,2001,38(3):249-260.
[5] Losonczy G, Rosenberg N, Boda Z,et al. Three novel muta-tions in the glycoprotein IIb gene in a patient with type II Glanzmann thrombasthenia[J]. Haematologica,2007,92(5):698-701.
