柴胡对肝星状细胞c-fos和c-jun基因表达的影响
发表时间：2014-12-04 浏览次数：1250次
小柴胡汤治疗急性肝炎为人们所熟知,柴胡及其有效成分在慢性肝病中的作用亦渐为人们所认识n-37我们既往的研究表明中药柴胡对肝星状细胞细胞外基质(ECM)、基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制因子(TIMPs)的表达有明显的调节作用,其机制尚不清楚.我们采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法观察柴胡对肝星状细胞c-fns和c-jun基因表达的调节作用. 材料与方法 1.材料:柴胡由江苏江阴天江制药公司生产的颗粒配制而成,以含5%胎牛血清(FBS)的1640培养液稀释至16留L,经0.朽微孔滤膜过滤,置4℃冰箱储存备用.临用时,以含5%FBS的1640培养液稀释至不同浓度.DMEM培养基购自美国Sigma公司;总RNA提取试剂盒、AMV逆转录酶,RNA酶抑制剂、Olig(dt)15Primers,Tag酶、PCRMarker均为美国Promega公司产品.美国SHEL-LABC02细胞培养箱;美国Idaho毛细管PCR仪;美国KodakdigitalsciencesystemDCVO凝胶成像系统.肝星状细胞株HSC-T}4}:美国加利福尼亚旧金山总医院肝病中心实验室Friedman教授惠赠. 2.肝星状细胞培养:肝星状细胞株HSC-T复苏后接种于塑料培养瓶中,用含5%DMEM的培养液在COz孵箱中培养.HSC-T细胞将近长满培养瓶底时分别换用含不同浓度柴胡(终质量浓度1.0,0.5g/L)的培养液,同时设空白对照组.各组于8,24,4歇72h4个时间点分别收集细胞,少量用于细胞计数及存活率检测,余迅速投入液氮,此后转人一700G保存.每组每个时间点均平行培养6瓶. 3.肝星状细胞总RNA的提取及cDNA的合成:用Promega公司生产的TotalRNAIsolationSystem提取肝星状细胞总RNA}RNA提取工作在标本留取后1周内进行.采用分光光度法测定提取的总RNA含量及纯度,吸光度(Azw/Azao)值需在1.8一2.0.采用25闪逆转录反应体系合成cDNA;含待测RNA2},g,AMV30U,RNA酶抑制剂40U,Oligdt(15Primer)50m岁L及适量dNTP(10mmol/L),5xRT缓冲液,42℃反应1h;95℃5min灭活AMVo4.c-fos,c一un引物序列、共扩增PCR及扩增产物定量分析:参照我们已报道的方法进行〔5-705.统计学方法:结果以均数士标准差(x士、)表示,应用SPSS10.0统计软件分析,采用单因素方差分析. 结果 1柴胡对HSC-T细胞c-fos基因表达的影响(表1):可见对照组HSC-T细胞有c-fos的基因表达,8h时为最高峰,后随培养时间延长逐渐下降.柴胡两组HSC-T细胞c-fos基因表达水平在8,24,48,72h4个时间点均低于对照组;随剂量加大,HSC-T细胞c-fos基因表达水平逐渐降低;两组间差异有统计学意义(P<0.O1). 2.柴胡对HSC-T细胞c-jun基因表达的影响(表2):可见对照组HSC-T细胞有c一un的基因表达,8h时为最高峰,后随培养时间延长逐渐下降.柴胡两组HSC-T细胞c-jun基因表达水平在8,24,48,72h4个时间点均显著低于对照组;随剂量加大,HSC-T细胞c-Jun基因表达水平逐渐降低;两组间差异也有统计学意义(P<0.01). 讨论 近来的研究表明肝星状细胞(HSC)在肝纤维化的发生、发展中发挥了重要作用;它不仅是肝脏中ECM的主要细胞来源,同时也是MMPs及其TIMP.的主要细胞来源.有研究表明中药复方861合剂对肝星状细胞ECM,MMPs,TIMPs的表达有明显的调节作用[8-91.柴胡作为复方861合剂中的主要药物之一.本研究结果显示,加人柴胡的两组HSC-T细胞.-fos,cjun基因表达水平在8,24,48,72h4个时间点均明显低于对照组;随剂量加大,HSC-T细胞c-fos,c-jun基因表达水平逐渐降低;两组间差异有统计学意义.本研究结果提示柴胡对肝星状细胞c-fos和c-jun基因表达有明显的下调作用. 柴胡调控肝星状细胞c-fns,cjun基因表达的机制目前尚不清楚,尚有待进一步研究. 参考文献 郑纯威,丁华熳,陈宇. 柴胡皂苷改善大鼠肝纤维化的实验研究[J].中国中医急症,2011,(5):754-755.doi:10.3969/j.issn.1004-745X.2011.05.040. 杨洁,蔡刁龙,谭献文. 柴胡、红花、川芎中药单体对大鼠肝纤维化治疗作用的实验研究[J].临床和实验医学杂志,2009,(7):1-3.doi:10.3969/j.issn.1671-4695.2009.07.001. 李素婷,杨鹤梅,齐洁敏. 柴胡皂苷-d对酒精性肝纤维化大鼠星状细胞活化的影响[J].时珍国医国药,2008,(11):1897-1898.doi:10.3969/j.issn.1008-0805.2008.11.087. Friedman SL,Lalazar A,Wong L. HSC-T cells,An immortalized rat hepatic stellate cell line[J].Hepatology,1997.338A. 王爱民,向英,耿焱. 重组人肝再生增强因子可抑制大鼠肝星状细胞c-fos基因的表达[J].中华实验外科杂志,2009,(7):900-901.doi:10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2009.07.031. 王爱民,张莉,陈淑娥. 白细胞介素1B及肿瘤坏死因子α对大鼠肝星状细胞c-fos基因表达的调节作用[J].中华实验外科杂志,2004,(7):826-827.doi:10.3760/j.issn:1001-9030.2004.07.020. 王爱民,陈淑娥,古彩喆. 重组人肝再生增强因子抑制大鼠肝星状细胞c-jun基因表达的研究[J].中华实验外科杂志,2004,(9):1058-1059.doi:10.3760/j.issn:1001-9030.2004.09.014. 阴赪宏,马红,王爱民. 复方861对HSC-T6细胞基质分解素-1mRNA表达水平影响的研究[J].临床肝胆病杂志,2002,(3):168-170.doi:10.3969/j.issn.1001-5256.2002.03.017. 阴赪宏,马红,王爱民. 复方861对HSC-T6细胞组织基质金属蛋白酶抑制因子-1基因表达的影响[J].中华肝脏病杂志,2002,(3):197-199.doi:10.3760/j.issn:1007-3418.2002.03.010.
