Bcl-2在胃癌中的表达及其临床意义

日前，胃癌是世界上比较常见的恶性肿瘤，全世界每年有超过80万新发胃癌病例，病死率居第2位u，但其机制尚未明确。B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(cell lymphoma/leukemia-2 gene，Bcl-2)是Bcl-2家族成员中抗细胞凋亡成员，与细胞凋亡密切有关。当细胞周期调控失衡时，本应脱离细胞周期的细胞不断进入细胞周期而不断增生，细胞凋亡免于发生而癌变形成恶性肿瘤w

Placzek等[z-发现，在68种人肿瘤细胞中均存在Bcl-2等抗凋亡成员的阳性表达，但在胃癌中的表达及意义尚不十分清楚。Bcl-2的高表达可能与肿瘤的发生相关，本研究采用免疫组化SP法检测Bcl-2在胃癌及其对应切缘组织中的表达，探讨其表达与胃癌临床病理因素的关系，为揭示其在肿瘤演进及预后的研究做前期工作。

1材料与方法

1.1实验材料选取42例来白于2008年10月一2011年10月沪州医学院附属医院胃肠外科、具有全部临床数据、术前胃镜和胃癌根治手术后苏木精一伊红染色病理确诊证实为胃癌的患者。其中男性19例，女性23例;年龄36一78岁，平均年龄(48.69士9.35)岁，分成两个年龄段，其中)45岁患者27例，<45岁患者15例。按国际抗癌联盟(Union for International Cancer Control，UICC)和世界卫生组织(WHO)中的胃癌分级分期标准，整理资料归纳如下:(助28例患者的分化程度为胃低分化腺癌,14例为胃高/中分化腺癌;(2>16例胃癌患者浸润深度局限于浆膜肌层内(T,/T,),26例浸润深度则穿透或者超过浆膜层(T3/T});(3)22例胃癌患者存在淋巴结转移，其余20例患者则不存在转移;(4)18例胃癌患者临床分期为1期+11期，其余24例临床分期为111期+W期

1.2主要试剂SP试剂盒及三氨基联苯胺(3,3’一〔liaminobenzi-dine,DAB)显色剂购自北京天根生化科技有限公司，兔抗人Bcl-2单克隆抗体购自美国Bioworld公司。

1.3实验方法所有标本经4%多聚甲醛(pH=7.4)固定、石蜡包埋、4 pm标准厚度连续切片、脱蜡和水化、多次预实验获得SP法最佳反应条件后SP检测Bcl-2表达情况，镜下观察分析判断。细胞质中黄色或棕黄色染色代表Bcl-2蛋白阳性信号，利用黄染或棕黄染强度评分+阳性细胞面积计分的积分来衡量Bcl-2表达水平)以卜操作步骤均严格按实验试剂说明书进行，以浓度为0.01 mmol/I磷酸盐缓冲溶液替代Bcl-2作为阴性对照。

1.4统计学方法采用SPSS 17.0分析数据。计数资料以例数和百分数表不，组间比较采用X检验或配对X}检验。多因素分析采用Logistic}口{归.P<0.05表示差异有统计学意义

2结果

2.1胃癌及切缘组织中Bcl-2的表达状况42例胃癌组织中，29例Bcl-2蛋白呈阳性表达，对应切缘组织Bcl-2有7例一也呈阳性表达，其余22例切缘组织Bcl-2呈阴性表达月3例Bcl-2呈阴性表达，对应切缘组织有2例呈阳性表达，其余11例切缘组织则呈阴性表达Bcl-2在胃癌组织中阳性表达率(69.0S%)明显高于胃切缘组织(21.43%)，二者差异有统计学意义(尸<0.001)(表1，见封三，图1,2)2.2 Bcl-2蛋白表达及与胃癌组织病理类型的关系Rcl-2.蛋白在胃癌组织中的表达水平与1'i/}12和T;/T浸润深度、性别及年龄无关，而与胃癌的高中和低分化程度、l期+II期和}I期+}期临床病理分期、淋巴结转移有关(表2)，同时对后3个指标作为自变量行Logisti c多因素分析，结果也显示胃癌分化程度、病理分期、淋巴结转移与胃癌组织中Bcl-2表达有关(表3)

3讨论

在细胞遗传学和细胞生物学中，细胞凋亡是由多种基因参与严格调控的细胞死亡过程，Bcl-2基因家族成员在细胞凋亡的线粒体途径中扮演着关键角色二该家族在结构上，有一个或者多个Bcl-2同源(Bcl-2 Homology,BH)区域，并依此可分为2类:抗细胞凋亡成员(如Bcl-2,Bcl-XL,Bcl-fir,Mcl-1和A1)及促细胞凋亡成员(如Bax,Bak和Bok)，以及只含有一个B I-I3区域的前促凋亡蛋白(如Bid,Bad,Bik,Rim和Hrk)。两种成员的组成比衡量着细胞对凋亡信号的反应，当然前者抗凋亡的作用受后者的拮抗，例如Bid和Bim与全部抗细胞凋亡蛋自结合后，抑制了Bcl-2等抗细胞凋亡蛋自的作用，最终诱导细胞凋亡

Bcl-2是Tsujimot等最早从伴有t(14;78)(q32;q21)染色体易位的B细胞淋巴瘤中发现的的原癌基因，大小约为230 kb，含3个外显子和2个内含子，编码的膜蛋白(大小为25 ku)，分布于细胞的线粒体外膜、核膜和内质网膜上(以外膜较为常见)，其肤链C末端疏水区的21个疏水氨基酸构成复杂的链状结构，插入靶细胞的线粒体外膜结构中，改变了线粒体膜通透性，影响Cvt c的释放量，衡量靶细胞增殖与凋亡动态平衡。Bcl-2蛋白含有BHl,BH2,BH3和BH4等所有BH结构域，其中BH1和B H2是Bcl-2蛋白特有的区域，参与二聚体的整合以及离子通道的形成，调控核酸核酶的活性，拮抗凋亡;;BH1,BH2和BH3共同构成Bcl-2具有疏水作用的袋状结构，与促细胞凋亡蛋白(Bid,Bad等)BH3区域的。螺旋结合，封闭后者的结构域而形成异二聚体，抑制促细胞凋亡成员作用。

本研究结果显示，胃癌和切缘上皮细胞质中黄色或棕黄色显色代表着Bcl-2蛋白的阳性信号，且在胃癌组织中表达水平高于切缘组织(P<0.05),预示胃癌的演进与其Bcl-2表达水平密切相关。Sun等7研究发现，Bcl-2蛋白在胃癌组织中的阳性率明显高于正常胃组织(P<0.05)。朱艳丽等一利用免疫组化(SABC)法研究发现，胃癌组织中Bcl-2阳性表达率显著高于正常茹膜组织，高/中分化胃癌中Bcl-2的阳性率(73.17%,30/41)也显著高于低分化胃癌(30.77%,4/13)，证实与分化程度相关(P<0.05)这与我们研究一致，本组利用Logistic回归分析发现，胃低分化癌组织中Bcl-2阳性表达为高/中分化癌组织的0.035倍，提示分化程度越高，Bcl-2阳性表达越高。于是我们猜想:高表达Bcl-2的肿瘤细胞可能逃逸或者能耐受免疫细胞的毒性杀伤作用，保持免疫自稳状态，不断进人细胞周期增生，进而不断演进。同时结果也显示，Bcl-2在I+II/}I+W期临床病理分期两组间、淋巴结有无转移两组间均有差异

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