非甾体抗炎药相关胃黏膜损伤机制的研究

非幽体抗炎药(NSAID)具有抗炎、解热、镇痛及抗风湿作用，主要通过抑制环氧合酶而起作用。血管内皮生长因子(VEGF)是反映组织血管生成的指标，丙二醛表示氧自由基堆积指数，缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)在组织缺氧状态下才能表达，我们通过对胃豁膜组织中VEGF、丙二醛、HIF-1。进行检测，以了解NSAID损伤胃豁膜的机制。材料与方法1.材料:收集2011年1一10月我院消化内科内镜室胃勃膜活检标本114份，其中来自服用NSAID的慢性胃炎伴糜烂及胃溃疡患者70例(NSAID组)，男39例，女31例;平均年龄(64.3士10.8)岁。余44份标本来自未服用NSAID的慢性浅表性胃炎患者(对照组)，男24例，女20例;平均年龄(59.7士11.2)岁。两组性别比和年龄差异均无统计学意义(P均>0.OS)，具有可比性。2.方法:鼠抗人VEGF单克隆抗体原液(sc-7269)、鼠抗人HIF-1。单克隆抗体原液(sc53546)购自SANTACRUZ公司，兔抗人丙二醛多克隆抗体原液(ab6463)购自Abcam公司。采用免疫组化染色二步法，通用型二步法检测试剂盒(PV-6000)购自北京中杉金桥生物技术有限公司。抗原热修复:VEGF、丙二醛(0.O1mol/L构椽酸盐缓冲液，pH6.0),HIF-1a(1mmol/LEDTA,pH9.5),DAB显色后，苏木素复染，中性树胶封片。阳性对照为人结肠癌组织，PBS代替一抗作为阴性对照。3结果判定:以伴或不伴胞质染色的细胞核染色为阳性计数标准，没有染色或<1%的细胞核染色为阴性。4.统计学处理:应用SPSS17.0统计软件处理数据，率的比较采用XZ检验，两组患者年龄的比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果两组胃豁膜标本的各指标定性检测结果比较:见表1.讨论在临床上由于具有消炎、止痛、抗凝等作用，NSAID的使用非常广泛，然而这类药物却有不少副作用，包括过敏，肝、肾、骨髓损害等，其中最常见的是胃肠道反应，包括引起胃肠道勃膜炎症、糜烂、溃疡、出血等〔2〕。NSAID对胃肠勃膜损伤机制如下:(1)抑制环氧化酶活性，减少内源性前列腺素合成，从而导致茹膜一碳酸氢盐屏障功能减低。(2)穿透胃豁膜上皮细胞膜，破坏豁膜屏障，产生直接损伤。(3)异常增多的白三烯及自由基对勃膜有毒性作用。干扰生长因子，减少溃疡边缘的内皮细胞增生、溃疡床的血管形成、肉芽组织的生长，从而延迟溃疡的愈合`VEGF在血管形成中处于重要的位置，是作用最强、特异性最高的促血管生长因子之一。VEGF能以自分泌及旁分泌形式刺激细胞的有丝分裂，是诱导血管形成作用最强、特异性最高的血管生长因子，也是一组促进血管内皮细胞分化的多功能细胞因子ai。大量研究显示NSAID可抑制肿瘤细胞VEGF的表达，进而抑制肿瘤的生长，而NSAID对正常胃豁膜组织中VEGF表达的研究相对较少。李成军等[6」研究显示:阿司匹林通过抑制表皮生长因子和VEGF的表达导致微血管生成减少和豁膜血流降低，抑制了溃疡的愈合。HIF-1cx是近年来发现的与机体细胞适应低氧关系密切的一种重要的转录因子，其受细胞内氧分压的精细调节，对一于低氧环境中机体的生存具有重要意义。HIF-1是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种异源二聚体转录因子，在缺氧诱导的基因表达中起着关键作用。HIF-1主要由HIF-1a和HIF-1p两个亚单位组成，其中HIF-1。是惟一的氧调节亚单位，它决定HIF-1的活性。等〔8研究显示:在应用NSAID患者胃体和胃窦的勃膜细胞中HIF-1。的表达明显高于未应用NSAID患者。进而说明NSAID能促进胃豁膜组织HIF-1。的表达。丙二醛是氧自由基氧化生物膜多不饱和脂肪酸所产生的降解产物，它表示氧自由基堆积指数，其含量升高，反映体内氧自由基代谢产物的增多。胃勃膜在化学物质作用和缺血状态下可产生大量的氧自由基，丙二醛是氧自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，形成脂质过氧化物，能引起细胞代谢及功能障碍。氧自由基在体内的堆积对细胞有明显的损害作用，可以直接破坏细胞膜和遗传结构，使具有膜结构的内质网、溶酶体、线粒体等结构破坏Bhattachary。等报道氧自由基在胃溃疡的发生发展中起重要作用，丙二醛等脂质过氧化物生成过多可损伤胃载膜。本研究显示:NSAID组比对照组VEGF的阳性表达率低，说明NSAID能通过抑制VEGF的表达导致微血管生成减少和豁膜血流降低，进而导致豁膜损害如糜烂、溃疡等。NSAID损伤胃豁膜组织使局部缺血和微血管系统的损害，缺氧是组织损伤的一个重要特点，缺氧状态下可以诱导HIF-1。的表达。NSAID组HIF-1a表达高于对照组，说明NSAID损伤胃豁膜组织，使组织缺氧，进而诱导HIF-1a表达，与It等研究结果一致。NSAID组中的丙二醛表达明显高于对照组，说明HASID能通过能胃薪膜组织中的氧自由基堆积进而损伤胃戮膜。罗佳与王惠吉研究显示:NSAID可引起小鼠小肠豁膜组织中丙二醛升高，与本实验的研究结果相一致。参考文献Zhong H,D e Marzo AM,Laughner E. Overexpression of hypoxia-inducible factor 1alpha in common human cancers and their metastases[J].Cancer Research,1999,(22):5830-5835.吴春城,杜志毅,谢会忠. 非甾体抗炎药和幽门螺杆菌感染与消化性溃疡发病的关系[J].中国医药,2011,(11):1363-1365.doi:10.3760/cma.j.issn.1673-4777.2011.11.030.唐承薇. 非甾体类抗炎药胃肠黏膜损伤的机制及预防[J].中华消化杂志,2007,(11):763-764.doi:10.3760/j.issn:0254-1432.2007.11.015.Dvorak HF,Brown LF,Detmar M. Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor,microvascular hyperpermeability,and angiogenesis[J].American Journal of Pathology,1995,(05):1029-1039.王志红,鲍德明,赵敏. EGF、VEGF在老年人胃溃疡中的表达及其与溃疡愈合的关系[J].中国全科医学,2012,(02):187-189.李成军,马丹丹,祝友朋. 阿司匹林对大鼠胃溃疡愈合的影响和机制[J].中国老年学杂志,2011,(15):2898-2900.doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2011.15.041.SongIS,Wang AG,Yoon SY. Regulation of glucose metabolism-related genes and VEGF by HIF-1alpha and HIF-1beta,but not HIF-2alpha,in gastric cancer[J].Experimental and Molecular Medicine,2009,(01):51-58.Ito M,Tanaka S,Kim S. The specific expression of hypoxia inducible factor-1alpha in human gastric mucosa induced by nonsteroidal anti-inflammatory drugs[J].Alimentary Pharmacology and Therapeutics,2003,(Suppl 1):90-98.doi:10.1046/j.1365-2036.18.s1.10.x.