幽门螺杆菌babA2和胃黏膜上皮Leb抗原在不同血型中表达情况及与消化性溃疡的关系

　　作者：邓淑娟,李兴华,方德宁,曾钗明　　作者单位：江苏大学附属上海第八医院消化内科, 上海

　　【摘要】目的： 研究不同血型(ABO)患者幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)表达血型抗原结合黏附素(blood group antigen binding adhesion,babA2)和胃黏膜上皮表达Lewisb (Leb)情况,及两者与消化性溃疡的关系。方法： 测定56例(25例胃炎,31例消化性溃疡)Hp阳性消化性溃疡及消化不良的患者血型,并进行内镜检查,取2块胃黏膜,一块进行Hp培养,采用PCR检测Hp babA2表达情况;另一块组织进行组织病理学检查,并应用免疫组化测定胃黏膜上皮表达Leb情况。分别比较不同血型babA2、Leb表达情况与消化性溃疡的关系。结果： 56例患者中,消化性溃疡组O型血所占比例高于胃炎组及正常人群(P均<0.0125),O型血患者胃黏膜Leb评分显著高于非O型血(P<0.005),消化性溃疡组Leb评分高于胃炎组(P<0.05)。Hp培养成功30例,有28例babA2阳性(7例消化性溃疡,21例胃炎),babA2阳性患者中,消化性溃疡组O型血比例高于非O型血(P<0.0125),消化性溃疡组与胃炎组O型血所占比例差异无统计学意义。结论： O型血可能是通过高表达Leb及Hp的babA2增加了消化性溃疡的发生。

　　【关键词】 幽门螺杆菌,血型抗原结合黏附素,Lewisb;消化性溃疡

　　[Abstract] Objective: To investigate the babA2 of Helicobacter pylori (Hp)and host gastric Lewisb (Leb) antigen status in different ABO blood group,and determine the relationship between the peptic ulcer with it. Methods: Detected ABO blood group of 56 Hppositive patients (25 with gastritis, 31 with peptic ulcer)with peptic ulcer and indigestion. Two gastric specimens got by endoscopy. One was cultured and determined for babA2 genotype by polymerase chain reaction. Gastric expression of Leb obtained from patients with the other one sample was measured immunochemically to determine intensity (range 0-9). Expression of babA2 and Leb in different blood group,and the relationship with peptic ulcer were compared. Results: Among 56 patients, Otype blood proportion in peptic ulcer was higher than the proportion of gastritis groups and normal groups(P<0.0125), Lebantigen score of Otype blood was significantly higher than noO blood type(P<0.005).Thirty gastric specimens were cultured successfully and 28 cases were babA2positive strains(7 with peptic ulcer,21 with gastritis),among babA2positive patients with peptic ulcer, Otype blood proportion was higher than noO blood type(P<0.0125). There was no significant difference between peptic ulcer and gastritis. Conclusion: O blood type increased incidence of peptic ulcer may be through high expression of Leb and blood group antigen binding adhesion of Hp.

　　[Key words] Helicobacter pylori; blood group antigen binding adhesion; Lewisb; peptic ulcer

　　消化性溃疡是临床常见病、多发病,O型血的人更容易患消化性溃疡[1-3]。ABO血型抗原除表达在红细胞表面以外,还以可溶性血型物质的形式存在于在内胚层起源的胃肠上皮和涎腺,胃黏膜可表达Lea、Leb、Lex、Ley抗原。Lewis血型抗原在幽门螺杆菌(Hp)与消化性溃疡的发生机制中起着重要的作用。Ilver等[4]发现Hp表面黏附素基因(babA2)的表达产物BabA2选择性黏附于宿主Lewisb (Leb)抗原。本文提取Hp的RNA检测babA2表达,并检测胃黏膜上皮Leb表达情况,从babA2、Leb抗原的角度探讨O型血是否增加患消化性溃疡的风险。

　　1 材料和方法

　　1.1 试剂来源

　　PCR引物购于上海生工生物工程技术服务公司,Leb抗体购于Santa公司(优宁维代理)。Hp培养皿购于浙江台州爱思进医疗器械有限公司。培养液及抗生素为Merk公司生产。反转录酶和PCR试剂盒为日本TaKaRa公司生产。

　　1.2 研究对象

　　56例消化性溃疡及消化不良患者中,男33例,年龄22～73岁,平均44.8岁;女23例,年龄19～68岁,平均43.9岁,男女年龄差异无统计学意义。所有患者均征得同意后入组。分别由14C呼气试验(UBT≥100 dpm/mmol CO2为阳性)和(或)血抗Hp抗体(IgG为阳性或弱阳性)证实,并测其血型(ABO)。所选病例均未使用抗Hp药物。每人均进行内镜检查并取2块胃窦部组织活检,用于Hp培养及组织病理检查。

　　1.3 PCR检测Hp babA2的表达

　　微需氧培养箱(5%O2,10%CO2,85%N2)中培养Hp,经尿素酶试剂检验为Hp阳性。提取Hp的RNA,细菌的RNA提取方法同细胞,反转录后,采用聚合酶链反应法(PCR)扩增检测babA2基因表达情况。扩增引物为bab上游:CCAAACGAAACAAAAAGCGT(与AF033654的第105-124个碱基对相符),bab下游:GCTTGTGTAAAAGCCGTCGT(与AF033654的第357-375个碱基对相符)[5]。反应条件: 94 ℃,5 min变性;94 ℃,1 min;45 ℃,1 min;72 ℃,1 min;30个循环;72 ℃,5 min延伸。最后得到的是长度为271 bp的PCR产物。

　　1.4 胃黏膜组织病理检查和胃上皮Leb免疫组织化学分析及评分 胃黏膜活检组织经甲醛固定,石蜡包埋,切片后分别进行HE染色组织病理检查及免疫组化染色检测Leb表达情况。病理组织学诊断采用中华病理学会制定的胃活检标本诊断标准。免疫组化采用二步法,经柠檬酸钠缓冲液微波修复,过氧化氢去除内源性过氧化物酶,分别滴加一抗,二抗(通用兔抗人抗体),DAB显色后适时终止反应,苏木精衬染细胞核,中性树胶封固。每个病例中至少有一个代表性区域经免疫组织化学染色。根据IHC评分法[6]对Leb密度进行评分。

　　1.5 统计学处理

　　对消化性溃疡患者中O型血、babA2阳性所占比例与正常人血型分布的构成比进行三样本率的两两比较,行χ2检验,P<0.0125为差异有统计学意义。胃黏膜上皮Leb密度评分经F检验具有方差齐性,应用两样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 消化性溃疡与血型的关系

　　56例患者的内镜及病理诊断分别为浅表性胃炎25例,消化性溃疡31例。患者的血型分布见表1。据大样本统计,中国汉族人群中O型血约占31%,其余血型占69%,组间两两比较,具体结果见表1。表1 56例患者血型分布与正常人血型分布比较:十二指肠溃疡25例,胃溃疡6例;b:浅表性胃炎19例,萎缩性胃炎6例从表1可以看出,消化性溃疡组中O型血所占比例高于胃炎组及正常人群中O型血比例(P均<0.0125),差异有统计学意义;胃炎组与正常人群O型血比例差异无统计学意义(P>0.125),说明O型血的人更容易患消化性溃疡。

　　2.2 不同血型患者胃黏膜上皮表达Leb情况及其与消化性溃疡的关系 56例胃黏膜标本行免疫组化检测,胞质呈棕色为Leb表达阳性(图1为阳性及阴性镜下表现),分别计分,并计算O与非O血型患者Leb的得分。依据阳性细胞的百分比、阳性强度、染色不均匀性进行评分,每项均采用0～3分制,总分数为0～9分。具体评分规则如表2。

　　消化性溃疡组Leb评分为(6.03±2.12)分,胃炎组Leb评分为(5.28±1.96)分,两者有统计学差异(P<0.05),消化性溃疡患者胃黏膜表达Leb抗原高于胃炎患者。O型血患者胃黏膜Leb评分为(6.39±1.28)分,非O型血患者胃黏膜Leb评分为(4.70±1.14)分,两者差异有统计学意义(P<0.005),O型血患者胃黏膜表达Leb抗原高于非O型血患者。表2 IHC评分规则表强度判断是依据一个在每批IHC中都采用的阳性对照病例。不均匀性是指代表性区域呈现不均匀或散在染色阳性。少量的胞质阳性忽略不计。

　　2.3 不同血型患者Hp表达babA2情况及与消化性溃疡的关系

　　30例胃黏膜标本Hp培养成功,有28例表达babA2(图2),babA2阳性表达率为93.3%。经内镜及病理证实,21例为浅表性胃炎,7例为十二指肠球部溃疡。Hp表达babA2阳性者中,消化性溃疡患者O型血比例为57%(4/7),正常人群O型血比例为31%,两者相比差异有统计学意义(χ2=13.72,P<0.0125),babA2阳性O型血患者多于非O型血(χ2=1.62,P<0.0125),这说明babA2阳性O型血患者更易患消化性溃疡。胃炎组O型血比例为48%(10/21),消化性溃疡组与胃炎组O型血所占比例差异无统计学意义。

　　3 讨 论

　　早在20世纪五六十年代就有O型血的人容易患消化性溃疡的报道[7],但机制不清。本文研究结果显示消化性溃疡患者中O型血比例明显高于非O型血。这说明O型血更容易患消化性溃疡,与文献报道相符。自1998年Ilver发现Hp表达与血型相关的黏附素基因babA2之后,逐渐揭开了血型在Hp消化性溃疡发生机制中的重要意义。

　　Hp在人类胃黏膜持续定植是致病的先决条件,Hp黏附素有多种,目前为止,babA2基因的表达产物BabA2是唯一确定特异性结合于血型Leb抗原的黏附素。Leb抗原与BabA2特异性结合提高了Hp的定植,进而引发一系列的免疫炎症反应。

　　ABO 血型物质的基础是Hh血型系统, O 型血的血型抗原即为H 抗原,A、B抗原是在H抗原上分别加上N乙酰半乳糖和D半乳糖,Leb 血型物质是在A、B、H抗原基础上加上α(1, 4) 岩藻糖基。 Lindén等[8]提供的关于Lewis血型物质的结构图表,清晰展示了Lewis血型与ABO血型的关系,O型血表面只有H抗原,α(1, 4) 岩藻糖基更易加到H抗原上,因此O型血可能比A、B型血更易表达Leb。本研究结果与此相符,O型血的评分Leb更高。消化性溃疡患者胃黏膜上皮表达Leb抗原水平高于胃炎组。较高水平的Leb抗原与BabA2特异结合,可能导致更多的黏附,增加了细菌与胃上皮细胞的紧密接触,更多的直接接触可加强微生物与宿主的相互作用。Huff等[9]在动物实验中证实细菌黏附可激活转录因子及宿主信号转导途径,从而诱导产生IL8及炎症反应,进一步破坏胃黏膜屏障,导致溃疡发生。

　　关于babA2与消化性溃疡的关系,多项研究结果并不一致。瑞士及日本学者研究认为Hp表达babA2没有导致宿主胃黏膜免疫炎症反应,与消化性溃疡无明显相关性[10-11]。亦有研究认为Hp表达babA2与毒力因子cagA及vacA密切相关[12-13],表达babA2的菌株更易引起胃黏膜的炎症及溃疡。本实验56例胃黏膜标本中培养Hp成功30例,其中8例消化性溃疡,22例胃炎。28例表达babA2患者中,消化性溃疡组O型血比例高于非O型血,这也从另一侧面进一步证实了Leb在O型血中高表达。事实上,Hp黏附、定植于宿主黏膜表面是一个复杂的过程,来自于Hp的代谢产物、表面蛋白以及与宿主直接相关的毒力因子都是参与致病的因素,宿主同时也产生抗体、分泌黏液及其他防御素等进行保护[14-15]。消化性溃疡的发生是宿主和外界侵袭因素(比如Hp)共同作用的结果。

　　综上所述,O型血人群更容易患消化性溃疡,可能与胃黏膜表面高表达Leb抗原及Hp babA2有关。

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