EZH2和Ki67在胃癌中的表达及其临床意义

　　作者：苗芳　　作者单位：山东大学，山东 济南 250012

　　【摘要】研究EZH2、Ki67在胃癌、癌旁组织与正常胃粘膜中的表达及其两者之间的关系。方法 采用免疫组织化学SP法检测EZH2、Ki67在50例胃癌、20例癌旁组织与20例正常胃粘膜中的表达。结果 EZH2、Ki67在胃癌中蛋白阳性表达为74%、70%，明显高于癌旁组织(45%、40%)和正常胃粘膜组(10%、5%)。EZH2和Ki67的阳性表达在不同病理分级及病理分期之间有差异(P<0.05)，同时两者的表达呈正相关(P<0.05)，但与患者的性别、年龄、肿瘤的大小、部位均无关(P﹥0.05)。结论 EZH2和Ki67有相关性，可能在胃癌的发生发展中起关键作用，并可作为判定胃癌恶性程度及其进程的参考指标。

　　【关键词】 EZH2,Ki67,胃癌,癌旁组织,免疫组织化学

　　Abstract:Objective: To discuss the representation and significance of EZH2, Ki67 in gastric carcinoma, adjacent gastric mucosa and normal gastric mucosa. Methods: The representations of EZH2, Ki67 in the 20 cases of normal gastric tissues, 20 cases of adjacent gastric mucosa, and 50 cases of gastric carcinoma were cheeked by immunohistochemical method. Results: The representation of EZH2,Ki67was higher in gastric carcinoma than that in adjacent gastric mucosa and normal gastric mucosa (P<0.05). Besides, it was closely related to the dissociation of gastric carcinoma and lymphatic metastatis(P<0.05). Conclusion: EZH2, Ki67 contribute a lot to the development and the seriousness of gastric carcinoma, and these two may have synergistic effect on each other.

　　Key words: EZH2; Ki67; gastric carcinoma; adjacent gastric mucosa; immunohistochemistry

　　胃癌是我国常见的十大恶性肿瘤之一，其死亡率居各种肿瘤之首，胃癌死亡人数占全部肿瘤死亡人数的23.03%。随着胃癌在我国发病率的不断提高，其诊治日益受到重视。EZH2参与染色质结构的形成、基因表达调节及生长控制，具有多潜能性[1-3]。 Ki67为增殖细胞核抗原，其表达与细胞周期密切相关。本研究通过检测EZH2、Ki67在胃癌、癌旁组织及正常胃粘膜中的表达，分析二者的关系及其与胃癌生物学行为的关系，为临床提供参考指标。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　收集泰山医学院附属医院2002年1月～2006年12月胃癌手术标本50例。其中正常胃粘膜20例、癌旁组织20例、胃癌组织50例。所有标本均经10%中性福尔马林固定、石蜡包埋、4 μm厚连续切片。

　　1.2 临床资料

　　50例患者中男性36例，女性14例，年龄36～75岁，平均年龄58岁。所有组织切片HE染色后，均经病理学检查确诊，并根据中国抗癌协会胃癌分类(1990年)标准进行胃癌分类。胃癌组高中分化胃腺癌18例、低分化胃腺癌32例。无淋巴结转移15例，有淋巴结转移35例。

　　1.3 方法

　　免疫组织化学采用SP法，一抗分别为兔抗人EZH2多克隆抗体浓缩液(购自美国Abgent公司)、鼠抗人Ki67单克隆抗体即用型(购自福建迈新生物技术开发有限公司)。SP超敏试剂盒和DAB显色液均购自福建迈新生物技术开发有限公司。SP免疫组化染色主要步骤为：4 μm石蜡切片脱蜡和水化后，3%H2O2处理10 min;抗原修复(EZH2微波修复92℃7 min;Ki67参照说明书进行高压修复)后在室温条件下冷却至室温;50 μl过氧化酶阻断溶液室温孵育10 min;50 μl正常非免疫动物血清室温孵育10 min;除去血清，滴加50 μl的第一抗体，4 ℃过夜;50 μl生物素标记的第二抗体室温孵育10 min;50 μl链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液室温孵育10 min;加100 μl新鲜配制的DAB溶液显色3-10 min;苏木素复染，脱水透明封片，光镜下观察结果。

　　1.4 结果判定

　　参照许良中等[4]的方法，综合考虑切片中阳性细胞所占观察细胞数的百分比和阳性细胞着色强度两项指标，半定量判定结果。根据着色强度判断阳性程度：标本无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。根据阳性细胞在所观察细胞中所占比例分为：阳性细胞数≤10﹪为1分，11～50﹪为2分，51～75﹪为3分，≥75﹪为4分。按这两项指标的总积分将结果分为4级，0～3分为(—);4～5分为(+);6～7分为(++);8分以上为(+++);其中+～+++为阳性表达。

　　1.5 统计学处理

　　应用SPSS12.0统计软件，用卡方检验比较EZH2、Ki67在胃癌、癌旁组织和正常胃粘膜中的表达。用非参数统计中Spearman等级相关进行相关性分析。

　　2 结 果

　　2.1 EZH2在正常胃粘膜、癌旁组织和胃癌中的表达

　　EZH2主要表达于细胞核，部分胞浆着色。EZH2在20例正常胃粘膜中2例(10%)阳性表达;在20例癌旁组织中有9例(45%)阳性表达;50例胃癌组织中有38例(76%)阳性表达(见图1)。三组间的差异有统计学意义(P <0.05)(表1)。EZH2的表达与胃癌的分化程度有关(P <0.05)(表2)，而与性别、年龄、发病部位无关(P ﹥0.05)。

　　2.2 Ki67在正常胃粘膜、癌旁组织和胃癌中的表达

　　Ki67主要表达于细胞核。Ki67在20例正常胃粘膜中1例(5%)阳性表达;在20例癌旁组织中有8例(40%)阳性表达;50例胃癌组织中有35例(70%)阳性表达(见图2)。三组间的差异有统计学意义(P <0.05)(表1)。Ki67的表达与胃癌的分化程度有关(P <0.05)(表2)，而与性别、年龄、发病部位无关(P ﹥0.05)。表1 EZH2、Ki67在正常胃组织，癌旁组织及胃癌中的表达注：与正常胃组织比较, *P <0.05。表2 EZH2、Ki67在胃癌中的表达注:与高—中分化比较，*P <0.05。

　　2.3 EZH2、Ki67表达的相关性分析

　　经分析发现，不管是在癌旁组织还是在胃癌中，二者常常表现为协同表达，呈正相关。经吻合度分析，两者表达的吻合度有统计学意义(表3)。

　　3 讨 论

　　EZH2是PCG(polycomb group)基因家族中的重要成员之一，在PCG基因家族中，EZH2起着核心作用。EZH2与细胞的生长调节有关，通过抑制染色质中的靶基因而调节细胞增殖。EZH2对于细胞增殖是必需的，其高表达导致细胞进入S期。EZH2还能增强原代细胞的生长能力，在多种原发肿瘤表达，与肿瘤的形成和生长密切相关[3]。EZH2蛋白作为转录抑制因子，可在基因水平上抑制多种基因的活性，尤其明显抑制肿瘤转移抑制基因，表现为EZH2蛋白促进肿瘤的侵袭和转移[1-6]。

　　目前，EZH2蛋白的表达在前列腺癌、乳腺癌中的表达研究较多。EZH2在转移性前列腺癌、乳腺癌中的表达明显增高，而且和未转移者相比预后较差。因此EZH2可作为肿瘤标志物监测前列腺癌、乳腺癌的演变。目前在国外关于EZH2在胃癌中的研究鲜见报道，而在国内尚未见报道。本研究发现，EZH2在胃癌中表达明显高于正常胃粘膜和癌旁组织，而且与胃癌的分化程度有关(P <0.05)，而与患者的性别、年龄、发病部位无关(P ﹥0.05)。

　　Ki67是一种增殖细胞核抗原，是由分子质量为345KD和395KD的两条多肽链组成的核蛋白。其表达与细胞的有丝分裂密切相关。它在G0期不表达，在G1后期开始出现，在S期和G2期逐渐升高，M期达到高峰，有丝分裂后迅速降解消失[7]。由于肿瘤细胞的增殖活性与肿瘤的生物学行为有关，因此Ki67是反映细胞增殖状态的理想标记物。本研究发现，Ki67在胃癌中表达明显高于正常胃粘膜和癌旁组织，而且随胃癌的分化程度降低而表达增高(P <0.05)，而与患者的性别、年龄、发病部位无关(P ﹥0.05)。

　　本研究表明两者在胃癌中的表达呈正相关，在胃癌的发生发展过程中除了各自发挥作用外，可能还存在协同作用，作用机制还有待于进一步的深入研究。EZH2和Ki67作为胃癌的相关基因，对它们的检测有助于我们判定胃癌的恶性程度及进程，同时也为胃癌的治疗提供新的思路。

　　【参考文献】

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　　[3] McMenam in ME, Soung P, Perera S, et al. Loss of PTEN expression in paraffinembedded primary prostate cancer correlates with high Gleason score and advanced stage[J]. Cavcer Res,1999,59(17):42914296.

　　[4] 许良中，杨文涛.免疫组织化学反应结果的判定标准[J].中国癌症杂志，1996，6(4)：229231.

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